參麥注射液聯用低分子肝素鈣后在大鼠體內藥動學特征研究

王鵬，薛清丹，鞠愛霞，康宇紅，李秋紅

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

心腦血管疾病發病機制復雜，單用一種藥物進行治療難以收到滿意效果，臨床目前主要采用藥物聯用的治療方法。隨著中西醫結合的深入開展，加之心腦血管疾病病因復雜，常采用反應較快、針對性強的西藥與作用緩和持久的中藥聯合治療方針，中西藥聯合用藥方法表現出了獨特的療效和強大的優勢［1-2］。參麥注射液是由人參、麥門冬組成的中藥制劑，具有益氣固脫、養陰生津、生脈的功效，臨床用于心腦血管疾病、免疫力低下、腫瘤及各種慢性疾病的輔助治療［3-5］。近幾年隨著中西聯合用藥情況的普遍發展［6-9］，參麥注射液與其他西藥聯合用藥治療心腦血管疾病情況越來越多，且療效顯著［10-14］，其中以抗凝類的低分子肝素鈣與參麥注射液聯用情況最多。然而聯合應用的理論基礎在國內外尚未有較深入的實驗研究。本實驗以人參皂苷Rg1、Re、Rb1作為參麥注射液的指標成分，研究單獨用藥及與低分子肝素鈣聯用后參麥注射液在大鼠體內的藥動學，從藥動學角度觀察中西藥聯合用藥后西藥對中藥體內過程的影響，為臨床上參麥注射液與西藥合理聯合應用且療效增強的機制探討提供參考依據。

1 材料

1.1 藥品與試劑

人參皂苷Rg1、Re、Rb1對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號分別為110703-200726、110754-200822、110704-200921);參麥注射液(神威藥業有限公司，批號11122721);低分子肝素鈣注射液(兆科藥業有限公司，批號01070012);甲醇(Dikma試劑公司，批號70242，色譜純);乙腈(Tedia試劑公司，批號1110410，色譜純);其他試劑均為分析純;水為超純水。

1.2 儀器

高效液相色譜儀(LC-2010A，日本島津);旋渦混合器(XW-80A，上海);低速臺式離心機(TDL-60B，上海);超聲波清洗器(SK8200H，上海);微量移液器(GILSON，法國);電子天枰(AR2140，上海);高速冷凍離心機(TGL16M，長沙)。

1.3 實驗動物

清潔級Wistar大鼠，雄性，體質量180～250g，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，動物許可證號:SYXK(黑)2008-001)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil(R)C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，大連物理化學研究所;流動相:乙腈-水(0～30min，20:80遞變至22:78;30～35min，22:78;35～60min，22:78遞變至40:60);流速:1.0mL/min;柱溫:20℃;檢測波長:203nm;進樣量:20μL。

2.2 溶液的制備

分別精密稱取人參皂苷Rg1、Re、Rb1對照品適量，甲醇溶解，配成1.0mg/mL對照品儲備液;另精密取內標大豆苷元對照品適量，甲醇溶解，配成1.0mg/mL儲備液。

2.3 生物樣品處理

吸取血漿樣品150μL置于1.5mL離心管中，加入內標溶液20μL，加入400μL乙腈，渦旋混合3min，14000r/min低溫離心10min，取450μL上清液于40℃氮氣吹干，而后用100μL 20%的乙腈-水溶液進行復溶，渦旋混合1min，14000r/min低溫離心5min，取20μL上清液進樣分析。

2.4 方法學考察

2.4.1 專屬性實驗

給藥后的血漿樣品，按“生物樣品處理”項操作后進樣。結果表明血漿中的內源性物質和內標物質均不干擾，本方法的專屬性符合要求。

圖1 給藥后血漿樣品中人參皂苷Rg1、Re、Rb1及大豆苷元生物樣品色譜圖

2.4.2 人參皂苷Rg1、Re、Rb1血漿標準曲線的制備

取空白血漿，分別精密加入人參皂苷Rg1、Re、Rb1標準品溶液適量。配制人參皂苷Rg1、Re、Rb1血漿標準系列。按“生物樣品處理”項操作，分別以樣品與內標峰面積比值y對樣品濃度x進行線性回歸，得到人參皂苷Rg1、Re、Rb1血漿標準曲線方程及線性范圍為分別為:y=0.0018x-0.002，r=0.9996，1.0～30.0μg/mL;y=0.0012x+0.0005，r=0.9996，0.5～15.0μg/mL;y=0.0014x-0.0004，r=0.9995，0.5～200.0μg/mL。

2.4.3 人參皂苷Rg1、Re、Rb1的精密度與相對回收率

分別配制高、中、低濃度的人參皂苷Rg1、Re、Rb1血漿QC樣品。按“生物樣品處理”項操作，進行精密度和回收率實驗。結果表明該方法的回收率符合要求，人參皂苷Rg1日內和日間精密度的RSD均小于5%;人參皂苷Re、Rb1日內和日間精密度的RSD均小于10%。

2.4.4 穩定性考察

分別配制高、中、低濃度的人參皂苷Rg1、Re、Rb1血漿QC樣品，進行穩定性考察。結果表明人參皂苷Rg1、Re、Rb1血漿樣品室溫穩定保存12h及冷凍保存30天穩定性良好(RSD＜5%)。

2.5 藥動學研究

Wistar大鼠12只，隨機分成2組。分別為參麥注射液單獨組(9.00mL/kg，尾靜脈注射);低分子肝素鈣注射液(1.44mL/kg，皮下注射)+參麥注射液聯合組;各組大鼠均于給藥前和給藥后5min、15min、30min、45min、1h、1.5h、2h、3h、6h、12h、24h、48h、96h、144h眼靜脈采集血液樣品300μL置肝素化的試管中，3000r/min離心，分離血漿，-20℃保存待測。

2.6 數據處理與統計分析

采用DAS 2.0統計軟件對12只健康大鼠服藥后各時間點的血漿藥物濃度進行分析，用統計矩法計算各項藥動學參數，并采用SPSS 18.0對藥動學參數進行統計學分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2.7 低分子肝素鈣對人參皂苷Rg1、Re、Rb1在大鼠體內藥動學的影響

2.7.1 聯合用藥對人參皂苷Rg1在大鼠體內藥動學的影響

單獨及聯合低分子肝素鈣給藥后人參皂苷Rg1的血藥濃度-時間曲線(圖2)，相關藥動學參數見表1。參麥注射液與低分子肝素鈣聯用后人參皂苷Rg1的血藥濃度均升高，顯示出了統計學差異;聯合低分子肝素鈣后人參皂苷Rg1的CL降低，MRT延長，AUC(0-144)和AUC(0-∞)均顯著升高。

表1 聯合低分子肝素鈣用藥后人參皂苷Rg1在大鼠體內的藥動學參數(n=6，)

表1 聯合低分子肝素鈣用藥后人參皂苷Rg1在大鼠體內的藥動學參數(n=6，)

注:與單獨給藥組相比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

Parameter SMI SMIwith LMWH Ke(h-1)2.452±0.799 2.477±0.205 CL(mL/h) 0.332±0.042 0.279±0.016*t1/2(h) 0.305±0.086 0.388±0.010 MRT(h) 0.944±0.010 0.956±0.004*AUC(0-144)(μg·h/mL) 26.630±3.093 30.230±1.196*AUC(0-∞)(μg·h/mL) 27.432±3.092 32.044±1.096*

2.7.2 聯合用藥對人參皂苷Re在大鼠體內藥動學的影響

圖2 單用及聯用低分子肝素鈣后人參皂苷Rg1在大鼠體內的血漿藥-時曲線(n=6，)

單獨及聯合低分子肝素鈣給藥后人參皂苷Re的血藥濃度-時間曲線(圖3)，相關藥動學參數見表2。單獨及聯用低分子肝素鈣注射液后人參皂苷Re在大鼠體內的血藥濃度變化趨勢基本一致，無顯著性差異，人參皂苷Re的藥動學參數沒有顯著性變化。

圖3 單用及聯用低分子肝素鈣后人參皂苷Re在大鼠體內的血漿藥-時曲線(n=6，)

表2 聯合低分子肝素鈣用藥后人參皂苷Re在大鼠體內的藥動學參數(n=6，)

表2 聯合低分子肝素鈣用藥后人參皂苷Re在大鼠體內的藥動學參數(n=6，)

Parameter SMI SMIwith LMWH Ke(h-1)1.491±0.081 1.489±0.210 CL(mL/h) 1.092±0.022 1.074±0.097 t1/2(h) 0.466±0.025 0.473±0.069 MRT(h) 0.924±0.005 0.928±0.013 AUC(0-144)(μg·h/mL) 7.622±0.131 7.940±0.706 AUC(0-∞)(μg·h/mL)8.245±0.164 8.558±0.707

2.7.3 聯合用藥對人參皂苷Rb1在大鼠體內藥動學的影響

單獨及聯合低分子肝素鈣給藥后人參皂苷Rb1的血藥濃度-時間曲線(圖4)，相關藥動學參數見表3。參麥注射液聯用低分子肝素鈣后人參皂苷Rb1血藥濃度顯著升高(P＜0.01)。人參皂苷Rb1的Ke降低，MRT延長，CL降低，t1/2延長，AUC(0-144)和AUC(0-∞)均顯著升高(P＜0.01)。

圖4 單用及聯用低分子肝素鈣后人參皂苷Rb1在大鼠體內的血漿藥-時曲線(n=6，)

表3 聯合低分子肝素鈣用藥后人參皂苷Rb1在大鼠體內的藥動學參數(n=6，)

表3 聯合低分子肝素鈣用藥后人參皂苷Rb1在大鼠體內的藥動學參數(n=6，)

注:與單獨給藥組相比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

Parameter SMI SMIwith LMWH Ke(h-1) 0.016±0.001 0.015±0.001*CL(mL/h) 0.005±0.001 0.004±0.001＊＊t1/2(h) 42.871±2.255 46.283±2.191*MRT(h) 0.871±0.008 0.879±0.009＊＊AUC(0-144)［μg/(mL·h)］2639.834±26.660 2949.229±44.420＊＊AUC(0-∞)［μg/(mL·h)］3030.592±18.346 3354.738±26.035＊＊

3 討論

本實驗通過研究低分子肝素鈣對參麥注射液在大鼠體內過程的影響，從藥動學角度探討中西藥聯合使用時西藥對中藥體內過程的影響。與低分子肝素鈣聯合用藥后，人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的血藥濃度均顯著升高，且顯著影響了其MRT、CL、AUC(0-144)、AUC(0-∞)等藥動學參數。據報道參麥注射液與低分子肝素鈣聯用對不穩定性心絞痛、肺源性心臟病心力衰竭等心血管疾病產生了較好的治療效果［10-14］?？赡芘c低分子肝素鈣明顯增加了人參皂苷Rg1和Rb1在大鼠體內的血藥濃度，延長藥物在體內停留時間，降低其清除率，提高藥物體內含量，增強了人參皂苷Rg1和Rb1對心血管的有關藥理作用［15］，從而藥物聯用后藥效增強。

本研究建立了同時測定大鼠血漿中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的HPLC法，經方法學考察表明，本測定方法線性關系良好，樣品測定不受內源性物質干擾。特異性、靈敏度、精密度、回收率、穩定性均符合生物樣品分析方法指導原則要求，本方法可滿足對人參皂苷Rg1、Re、Rb1的藥動學進行研究的檢測方法要求。首次探明低分子肝素鈣對參麥注射液體內藥動學的影響，從藥動學角度驗證了臨床上藥物合用療效增加的結果，為臨床上中西藥更廣泛更合理的聯用奠定堅實的理論基礎，使中西藥聯用發揮更可靠更有效的治療效果。

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