中藥菲寧膠囊對人肺癌A549裸小鼠移植瘤生長的影響

郭利華+陳亞娟+郭利群+石穎+孫雨詩+章淼

摘要：目的 觀察菲寧膠囊對人肺癌A549裸小鼠移植瘤生長的影響。方法 取處于生長旺盛期的人肺癌A549瘤組織，剪切成約1.5 mm3大小的組織塊，無菌條件下接種于裸小鼠右側腋窩皮下。分4組：① 陰性對照組；② 陽性對照組；③ 聯合給藥組；④ 中藥組。結果 1.陰性對照組的腫瘤處于持續生長狀態；2.陽性對照組的腫瘤相對增殖率為50.04%，動物體重在實驗過程中出現明顯的減輕，取材時脾臟明顯與陰性對照組有很大差異；3.聯合給藥組腫瘤相對增殖率為50.09%，但是脾臟指數明顯高于陽性對照組的脾臟指數；4.中藥組的腫瘤相對增殖率為70.6%。結論 中藥菲寧膠囊可考慮成為一種與腫瘤化療藥環磷酰胺聯用長期給藥從而達到增高抑瘤效果和提高生存質量的藥物。

關鍵詞：菲寧膠囊；肺癌A549裸小鼠；實驗研究

中圖分類號：R285 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2014）12-0066-02

1 材料與方法

1.1 受試物與配制

1.1.1 環磷酰胺粉針劑（CTX） 200mg/支，山西普德藥業股份有限公司 。生產批號：04130202。 給藥前用生理鹽水稀釋至所需濃度。

1.1.2 菲寧膠囊藥液： “菲寧膠囊”中藥復方：人參15 g，沙參20 g，白術20 g，茯苓15 g，生苡仁30 g，虎杖15 g，石見穿15 g等16味。藥材由云南省中醫院中藥房提供。給藥前用生理鹽水配制成所需濃度。

1.2 動物 BALB/c-nu裸小鼠，SPF級，4～5w齡，雌性。由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號：SCXK（京）2012-0001。

1.3 瘤種 A549，引自中科院上海藥物研究所。

1.4 實驗方案

1.4.1 分組

1.4.1.1 陰性對照組 與受試組同步給予N.S.；

1.4.1.2 陽性對照組 環磷酰胺（CTX），119.57 mg/kg（據成人每日用藥量：600 mg/m2）；

1.4.1.3 聯合給藥組 環磷酰胺+中藥菲寧膠囊藥液；

1.4.1.4 中藥組 中藥菲寧膠囊藥液，每味藥1袋/80 mL（據成人每日用藥量：每味藥2 袋/200 mL）。

1.4.2 給藥體積及給藥途徑 每周連續給藥5天后停藥2天，共3周。生理鹽水和中藥菲寧膠囊藥液按0.2 mL/10 g的給藥體積灌胃給藥（ig）；環磷酰胺按0.1 mL/10 g的給藥體積腹腔注射給藥（ip）。

1.4.3 實驗方法[1] 取處于生長旺盛期的人肺癌A549瘤組織，剪切成約1.5 mm3大小的組織塊，無菌條件下接種于裸小鼠右側腋窩皮下。在接種后8天，去除移植瘤未生長或生長過緩、過速的裸小鼠，選擇已形成100～300 mm3大小體積瘤組織的裸小鼠，按上述實驗方案隨機分組及給藥。實驗期間每周測量瘤徑和體重3次，3周后取材、測量瘤徑和稱量體重。每次測量后按以下公式計算腫瘤體積（TV）、相對腫瘤體積（RTV）和相對腫瘤增殖率（T/C %）：① TV（tumor volume）= 1/2×a×b2，其中a、b分別表示腫瘤的長和寬；② RTV（relative tumor volume）= Vt/V0，其中V0為分組給藥時（即d0）所測得的腫瘤體積，Vt為每一次測量時的腫瘤體積；③ T/C（%）= TRTV/ CRTV×100%，其中TRTV為治療組的RTV，CRTV為陰性對照組的RTV。

1.4.4 統計學方法 采用SPSS11.0軟件包數據以（x±s）表示、組內均數用配對t檢驗，多組間均數比較采用單因素方差分析；組間均數兩兩比較采用q檢驗。

國內評價參考標準：T/C（%）>60%為無效，T/C（%）60%，并經統計學分析P<0.05可判為有效。

2 結果

中藥菲寧膠囊對人肺癌A549裸小鼠移植瘤生長的影響見表1。由表1可知：實驗過程中陰性對照組的腫瘤處于持續生長狀態。陽性對照組，環磷酰胺在119.57mg/kg給藥劑量下，腫瘤相對增殖率（T/C %）為50.04%，有一定的抑瘤作用；與實驗開始時相比，動物體重在實驗過程中出現明顯的減輕，取材時脾臟明顯與陰性對照組有很大差異（P<0.01）。聯合給藥組（腹腔注射環磷酰胺+口服菲寧膠囊中藥液），腫瘤相對增殖率（T/C %）為50.09%，與陽性對照基本無差異；給藥過程中，聯合組體重減輕程度與陽性組基本一致，但是脾臟指數明顯高于陽性對照組的脾臟指數（P<0.01）。中藥組，腫瘤相對增殖率（T/C %）為70.6%，未達到參考標準的抑瘤效果；但是其脾臟指數與陰性對照差異最小（P<0.01）。

由以上表可知：實驗過程中陰性對照組的腫瘤處于持續生長狀態。陽性對照組，環磷酰胺在119.57mg/kg給藥劑量下，腫瘤相對增殖率（T/C%）為50.04%，有一定的抑瘤作用；與實驗開始時相比，動物體重在實驗過程中出現明顯的減輕，取材時脾臟明顯與陰性對照組有很大差異（P<0.01）。聯合給藥組（腹腔注射環磷酰胺+口服菲寧膠囊中藥液），腫瘤相對增殖率（T/C%）為50.09%，與陽性對照基本無差異；給藥過程中，聯合組體重減輕程度與陽性組基本一致，但是脾臟指數明顯高于陽性對照組的脾臟指數（P<0.01）。中藥組，腫瘤相對增殖率（T/C%）為70.6%，未達到參考標準的抑瘤效果；但是其脾臟指數與陰性對照差異最小（P<0.01）。

3 急性毒性實驗研究

菲寧膠囊方中藥水煎濃縮液一次灌胃測不出LD50，故測其灌胃給藥的最大給藥量為387.2 g生藥/kg，相當于臨床成人（體重按60kg計）擬用量的108倍，觀察14天，未見動物行為表現、飲食、活動等有明顯異常，未見死亡。結果顯示本品短期服用比較安全。

課題組對中藥的水煎濃縮液（3.14 g生藥/g浸膏）進行了小鼠急性毒性試驗，小鼠未見死亡，但未測出LD50值，故試驗用3.14 g生藥/g水煎濃縮液.配制為4.30 g生藥/mL試品，結果表明小鼠的最大給藥量量為387.2 g生藥/kg，相當于臨床成人（體重按60 kg計）擬用量的108倍。表明本品在387.2g生藥/kg濃度以下時，對小鼠的急性毒性作用較低。

4 討論

菲寧膠囊是云南省名中醫李斯文教授治療肺癌三十余年豐富的臨床經驗積累的結晶，在臨床應用中取得了良好的療效。該方主要由以益氣、養陰、健脾等扶正中藥為主，佐以清熱解毒、軟堅散結中藥為輔而成。設立人參、沙參、白術、茯苓等16味中藥為治療肺癌的基本方。方中人參、白術、茯苓、生苡仁、砂仁具有益氣健脾之功效，南北沙參具有滋陰生津之作用，浙貝、虎杖、石見穿則有清熱解毒，抗癌抑瘤作用；該方將攻補融為一體，使補而不助邪，攻而不傷正。全方共奏益氣健脾、消腫散結之功；主治中晚期肺癌（氣陰兩虛型）。

中醫藥治療肺癌的研究大多是臨床療效觀察，其獲效依據及其作用機理，以及如何增強用藥目的性與安全性等內容尚不能闡明。而實驗研究大多以單味藥研究為主，復方的很少。本課題探討菲寧膠囊對人肺癌A549荷瘤裸小鼠移植瘤生長的影響，驗證其在臨床應用中的有效性，為進一步開發利用提供可靠的數據。

本實驗證實中藥菲寧膠囊服用比較安全，菲寧膠囊有抑制腫瘤生長的作用，可考慮成為一種與腫瘤化療藥環磷酰胺聯用長期給藥從而達到增高抑瘤效果和提高生存質量的藥物，進一步證實中醫藥聯合西藥有減毒增效的作用。

參考文獻：

[1]孫均田.現代藥理實驗方法[M].北京：北京醫科大學.中國協和醫科大學聯合出版社，2008.endprint