結核分枝桿菌Rv1009蛋白的免疫學特性研究

薛士鵬

結核分枝桿菌Rv1009蛋白的免疫學特性研究

薛士鵬

目的 探討結核分枝桿菌Rv1009蛋白在體外實驗中所表現出的免疫學特征。方法 將小白鼠隨機分為Rv1009免疫組和生理鹽水組, 各5只。Rv1009免疫組小白鼠需要在腹股溝皮下包埋兩條NC膜, 進行3次免疫, 每次免疫的時間間隔為2周；生理鹽水組小白鼠皮下注射生理鹽水即可。收集所有小白鼠的血清, 采用ELISA方式來對小白鼠血清中抗體的滴速情況進行測定。結果 從實驗中發現, 小白鼠免疫血清抗體的滴速情況為1：1700, 淋巴細胞的增殖數量為(2.5±0.2), 鼠源性γ干擾素(IFN-γ)的含量為(1250±33)pg/ml, 白細胞介素-10(IL-10)的含量為(522±16)pg/ml, 以上數量均明顯高于生理鹽水組［(0.8±0.1)、(255±20)pg/ml、(75±5)pg/ml］。在白細胞介素-12(IL-12)的水平情況方面,各組別之間的含量較為相近。結論 結核分枝桿菌Rv1009蛋白具有極強的臨床研究價值, 很有可能會成為未來新型的結合疫苗, 為人類的生命健康安全帶來福音。

結核分枝桿菌Rv1009蛋白；體外實驗；免疫學特性；皮下注射

結核病是危害人類健康的頭號公敵, 是傳染病中給人類造成傷害最為嚴重的疾病。在臨床中, 針對結核疾病主要使用的藥物是卡介苗, 但是從近幾年的研究上來看, 卡介苗的保護性不完整情況越來越突出, 再加上人口流動性和艾滋病流行、吸毒、酗酒等外界因素的影響, 結核疾病在全世界范圍內廣泛擴散, 并且呈現出發病人群的數量回升的趨勢。為了積極研究結核疾病的致病機制和免疫機制, 研究出有效預防和治療結合疾病的藥物, 本院特進行了一次研究, 取得了較為良好的效果, 現將具體情況報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 液體培養液主要由Difco公司提供, IFN-γ、IL-10和IL-12所需要使用的檢測試劑盒由深圳晶美公司提供［1］, OADC和RPM11640培養所需要的培養基主要由GIBCO公司提供。另外還在華美生物公司購進了E.coliDH5α和羊抗鼠。本次研究中所使用的對象為小白鼠, 均為雌性。

1.2 研究方法

1.2.1 制備融合蛋白和轉移膜［2］將轉化的E.coli DH5α添加在20 ml的培養液中, 在37℃的環境中進行振蕩培養,培養的時間在4 h左右, 并且使用IPTG進行誘導。對上述制備好的融合蛋白進行急菌處理, 將其轉移到硝酸纖維素膜上,將含有目的蛋白表達的NC膜剪下備用即可。

1.2.2 免疫小白鼠［3］將小白鼠隨機分為Rv1009免疫組和生理鹽水組, 各5只。Rv1009免疫組小白鼠需要在腹股溝皮下包埋兩條NC膜, 進行3次免疫, 每次免疫的時間間隔為2周；生理鹽水組小白鼠皮下注射生理鹽水即可。收集所有小白鼠的血清, 采用ELISA方式來對小白鼠血清中抗體的滴速情況進行測定。

2 結果

Rv1009蛋白小白鼠血清特異性抗體的滴速為1：1700,生理鹽水組小白鼠檢測呈現出陰性。Rv1009組淋巴細胞的增殖數量為(2.5±0.2), 生理鹽水組淋巴細胞增殖的數量為(0.8±0.1), Rv1009組淋巴細胞阻滯的速度較為明顯。另外,在IFN-γ的含量方面, Rv1009組為(1250±33)pg/ml, IL-10的含量為(522±16)pg/ml, 以上數均明顯高于生理鹽水組的［(255±20)、(75±5)pg/ml］。在IL-12的水平情況方面, 各組別之間的含量較為相近。

3 討論

在臨床研究的過程中, 很多學者在結核領域做出了相當大的貢獻, 這些研究的成果在不同程度上給結核的防治帶來了積極的借鑒意義［4］, 也給人類帶來了福音。學者Mukamolova發現, resuscitation-promoting factor(Micrococcus luteus分泌的能夠復活的促進因子, 簡稱為RPF)［5］能夠刺激結核細菌休眠,也能夠促進患者機體繁殖和生長, 在結核疾病中所產生的作用與真核細胞的因子極為相似, 能夠進行自我刺激。另外,還有實驗證明, RPF還能夠對其他種類的高G+C含量中的革蘭陽性菌產生刺激, 也就是說, RPF能夠對結核分枝桿菌產生作用［6］。在學者Sassetti的研究過程中發現, RPF蛋白并不是結核株生長所必須具備的條件, 而且這種樣蛋白在功能傷害會出現重疊的現象［7］。在本次研究的過程中, 進行試驗的小白鼠體內特異性抗體的滴速情況為1：1700, 證實了本次實驗研究的結果正確性。淋巴細胞的增殖數量為(2.5±0.2), IFN-Y的含量為(1250±33)pg/ml, IL-10的含量為(522±16)pg/ml。上述指標均能夠證明Rv1009蛋白能夠誘導有效細胞產生免疫應答的情況。作者認為, 在感染的過程中首先需要使介導細胞之間出于平衡的狀態, 也就是說在本次試驗研究中, IL-10在小白鼠體內水平升高不能夠單純地下結論說此種情況對機體會產生不利的影響［8］。

綜上所述, 結核分枝桿菌Rv1009蛋白讓人們在對抗結核疾病的過程中看到了希望, 具有極強的臨床研究價值, 值得在臨床中推廣應用。

［1］ 樊愛琳, 師長宏, 蘇明權, 等. 結核分枝桿菌Rv1009結構域多肽的免疫學特性研究 .中華檢驗醫學雜志.2008.31(11):1282-1286.

［2］ 冷潔, 韓娜, 鄒悅.青島地區鏈霉素耐藥結核分枝桿菌的rpsL43基因突變特征.山東醫藥.2014.54(23):55-57.

［3］ 楊柳, 蘇哲, 岳喬紅, 等. 結核分枝桿菌Rv1009基因蛋白的克隆和表達. 中國防癆雜志.2007.29(1):12-14.

［4］ 薛瑩, 姜鴻, 柏銀蘭, 等. 結核分枝桿菌Rv1009蛋白的免疫學特性. 中國人獸共患病學報.2007.23(3):256-258.

［5］ 薛瑩, 柏銀蘭, 高輝, 等. 結核分枝桿菌Rv1009基因真核表達質粒的構建及表達. 中國人獸共患病學報.2007.23(7):664-666.

［6］ 樊愛琳, 蘇明權, 師長宏, 等. 結核分枝桿菌Rv1009結構域基因的克隆、表達及親和層析純化. 生物技術通訊.2007.18(4).1282-1286.

［7］ 陽幼榮, 吳雪瓊, 韓躍松, 等. 重組結核分枝桿菌Rv1009蛋白應用價值的研究. 中國現代醫學雜志.2009.19(22):3410-3413.

［8］ 蘇明權, 李立文, 張彩蓮, 等. 結核分枝桿菌Rv1009的生物信息學分析及克隆、表達. 生物技術通訊.2003.27(6):557-559.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.20.211

2015-02-02］

473061 南陽醫學高等專科學校