羊水細胞培養在產前診斷中的應用價值

劉玉榮

羊水細胞培養在產前診斷中的應用價值

劉玉榮

目的 探討羊水細胞培養在產前診斷中的應用價值。方法 178例具有產前診斷指征的孕婦, 采用羊水細胞培養G顯帶技術進行檢查。結果 有10例孕婦染色體異常核型, 檢出率為5.62%,其中有6例為數目異常.4例為結構異常。結論 羊水細胞培養在產前診斷中的應用價值高。

羊水細胞培養；產前診斷；染色體核型分析

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年4月～2013年4月在本院產科就診的具有產前診斷指征的178例孕婦, 年齡20～47歲, 孕周16～25周, 有70例孕婦唐氏綜合征篩查為陽性.23例孕婦有異常生育史, 60例孕婦年齡≥35歲.14例婦女于早孕服藥, 6例孕婦神經管急性篩查為陽性.5例孕婦丈夫染色體異常。

1.2 方法

1.2.1 羊膜穿刺 經B超定位后, 在無菌條件下, 用一次性羊水穿刺針行羊膜穿刺術。舍棄最開始的2 ml羊水, 再抽取20～30 ml的羊水放入2支無菌離心試管中。

1.2.2 羊水細胞培養 以1000 r/min的離心速度將2支無菌試管中的羊水進行離心處理達10 min, 舍棄上層清液, 保留管內沉淀細胞和0.5 ml羊水, 加入20%胎牛血清及含張氏成分的5 ml F10培養基, 用細管使之混勻, 將其接種于T-25的無菌試管中, 在37℃有5%二氧化碳培養環境中進行培育.5 d后觀察細胞生長情況, 若發現纖維狀或者梭狀細胞生長是, 則可更換5 ml新鮮培養液進行傳代培養［2］。

1.2.3 收獲細胞并進行制片 在對羊水細胞進行培養6～7 d后, 在倒置的顯微鏡下對正在培養的羊水細胞進行觀察, 觀察其生長情況, 發現有不同大小的梭長形細胞正在進行克隆并生長, 每個克隆過的細胞其生長狀態良好并且已經形成細胞島。對培養皿中的培養液進行定時的更換, 每天對細胞進行觀察, 在觀察2～3 d后, 發現每個形成的細胞島已經逐漸長成為透亮細胞, 這些細胞較大, 細胞融合度達到70%～80%,并且數目不等, 形狀多呈圓形或類圓形, 這時即可對細胞進行收獲。在對細胞進行收獲的前1 d, 更換新鮮培養液, 在培養液中加入秋水仙素, 使其濃度達到0.1 mg/ml, 在4～5 h后,使用顯微鏡觀察, 發現培養液中出現大量的呈魚眼狀的細胞時, 即可對細胞終止培養并進行收獲。加入0.25%的2 ml胰酶消化液, 在37℃的環境下放置5 min, 使得瓶壁上細胞脫落,再以1500r的轉速離心處理8 min, 棄上清液。加入1.5 ml的0.4%枸緣酸鈉和0.4%的氯化鉀混合液低滲7 min, 滴片, 常規G顯帶。每張玻片有20～30個細胞分裂相, 進行染色體核型分析, 每例分析核型5個。

1.3 核型統計分析 使用顯微鏡對細胞核型進行觀察, 常規技術分散良好的細胞核型有30個中期分裂相, 細胞核型計數發生異常的則有50個分裂相, 如出現≥2個細胞核型計數異常, 則對所有分裂相進行計數, 使用染色體核型分析軟件對核型圖像進行采集, 對3～5個核型進行分析, 并完成報告, 為遺傳咨詢提供意見。

2 結果

進行羊水穿刺培養一次性成功的患者有178例, 成功率高達100%, 其中有11例患者進行血性羊水培養并且取得成功。178例患者的培養時間為9～14 d。

本研究中178例孕婦有10例胎兒染色體異常者, 其中唐氏綜合征陽性組占有1例結構異常和1例數目異常, 占20%；高齡產婦組有3例數目異常, 占30%；異常生育史組有1例結構異常, 占10%；夫婦一方染色體異常組有2例染色體結構異常, 占20%；超聲檢查異常組有2例數目異常,占20%。10例染色體異常者中, 有6例數目異常.4例結構異常。178例孕婦中10例胎兒染色體異常, 檢出率為5.62%。

3 討論

導致新生兒出生缺陷的重要原因之一就是染色體病, 然而, 這可以通過產前診斷進行預防。在孕中期進行羊水檢查,操作安全便捷, 細胞培養成功率相對較高, 及早發現異常情況能夠及時終止妊娠。

有研究表明, 胎兒染色體異常在對具有產前診斷指征孕婦中的異常檢出率在3.8%～7.7%［3］。本研究結果顯示該組胎兒異常檢出率為5.62%。據相關報道顯示.35歲以上的孕婦胎兒出現唐氏綜合征的幾率15%～31%, 大部分均出現在＞35歲的孕婦群體中。這說明唐氏綜合征血清學篩查尤為重要。對于年齡≥35歲的孕婦出現非整倍體的幾率顯著高于年齡＜35歲的孕婦, 因此, 對高齡產婦進行羊膜穿刺, 進行羊水細胞培養檢查必不可少［4］。

為了預防和減少染色體異常胎兒出生, 作者認為產前診斷中進行羊水細胞培養意義重大。首先, 產前診斷中進行羊水細胞培養能有效提高我國人口素質。本研究結果顯示, 胎兒染色體異常檢出率為5.62%, 對于這類胎兒, 可以提前建議孕婦進行引產；其次, 通過對孕婦年齡、游離β人絨毛膜促性腺激素和血清甲種胎兒球蛋白(AFP)進行篩查后, 有產前診斷指征的高風險孕婦在醫師的指導下對產前診斷知識有了更深入的認識, 更好地配合檢查, 提高檢出率；在羊水細胞培養過程中, 對細胞進行轉瓶培養, 大大增加了羊水細胞培養的成功率, 為臨床上其他項目提供了便利。

綜上所述, 羊水細胞培養應用于產前診斷中, 操作便捷、創傷小、效果安全可靠, 還可分瓶進行傳代培養, 提高了細胞培養成功率, 值得臨床上廣泛推廣使用。

［1］ 魯莉萍, 陳意振, 張莉超.羊水細胞培養在產前診斷中的應用——619例染色體核型分析.中國優生與遺傳雜志.2005.13(5):32-32.56.

［2］ 王麗娟, 段程穎, 傅文宇, 等. 902例產前診斷染色體核型分析.蘇州大學學報(醫學版).2008.28(5):862-863.

［3］ 劉曉翌, 肖曉素, 樊尚榮, 等.羊水細胞培養用于染色體病產前診斷64例分析.中國實用婦科與產科雜志.2005.21(7):420-421.

［4］ 宋鳳俠, 龐泓, 張莉, 等.403例羊水細胞培養產前診斷.中國婦幼保健.2004.19(22):25-26.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.20.082產前診斷方法中最為廣泛且可靠的方式是羊水脫落細胞培養和分析染色體核型分析［1］。本文旨在研究羊水細胞培養在產前診斷中的應用價值, 現報告如下。

2015-02-03］

130021 吉林省人民醫院中心實驗室