紫外線光療對早期蕈樣肉芽腫皮損組織中BCL-2/IgH融合基因表達的影響

王 濤，劉躍華，鄭和義，左亞剛，方 凱

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院皮膚科，北京，100730)

*通信作者(corresponding author):yuehualiu@263．net

BCL-2基因是與細胞凋亡關(guān)系密切的原癌基因之一。BCL-2/IgH融合基因可導(dǎo)致BCL-2蛋白的過度表達，可能是淋巴瘤發(fā)病和發(fā)展的機制之一。既往有研究顯示，BCL-2/IgH在淋巴瘤的輔助診斷、檢測療效、評估化療、預(yù)防復(fù)發(fā)和評估預(yù)后等方面有重要的作用。紫外線光療治療蕈樣肉芽腫(Mycosis Fungoides，MF)引起的BCL-2蛋白表達下降究竟是由于何種機制所致，目前并不清楚。有研究顯示光療后早期MF患者皮損組織中BCL-2蛋白表達顯著下降。但有作者認為補骨脂聯(lián)合紫外線A治療(Psoralen plus Ultraviolet A，PUVA)治療后MF皮損組織中BCL-2蛋白變化與臨床和病理改變并不相關(guān)［1］。綜上，針對光療后MF組織中BCL-2變化的更深入的研究很有必要，檢測BCL-2/IgH是否在MF患者體內(nèi)高表達，甚至光療前后其表達變化與否值得深究。

本研究采用SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR方法檢測早期MF經(jīng)紫外線光療前后BCL-2/IgH融合基因出現(xiàn)的可能變化，探索此方法在評價光療療效和預(yù)后的可能性。

1 材料與方法

1.1 對象:24例早期MF患者經(jīng)PUVA或NB-UVB及PUVA治療緩解后聯(lián)合NB-UVB等3種治療前后48份皮損處石蠟包埋組織標本。

以正常人DNA模板為陰性對照，以β-actin為內(nèi)參照，以預(yù)實驗中陽性標本為陽性對照。

1.2 主要試劑盒及來源:FFPE DNA Kit(CW547，康為世紀公司);SYBR? Premix EX TaqTM和 ROX Reference Dye(×50)(TaKaRa)。

1.3 方法:用熒光定量PCR檢測BCL-2/IgH融合基因。根據(jù)試劑盒說明配制PCR反應(yīng)體系。1)熒光定量PCR反應(yīng)體系(冰上配制，20μL)及引物序列，BCL-2/IgH引物序列按照文獻報道［2］由生工生物工程(上海)有限公司合成，內(nèi)參基因β-actin引物序列由賽百盛基因技術(shù)有限公司合成。……