eIF4H低表達對MEL細胞增殖和紅系分化的影響

薛建有，桑婷婷，戚武林，曹玲玲，毛群銓，朱曉芳，張世馥

目前已發現一些因子參與調控紅系分化。GATA1是一個至關重要的造血轉錄因子，GATA1/FOG1復合體通過激活α-珠蛋白和EKLF基因的表達而抑制GATA2的表達來促進紅系分化［1］。PU.1與GATA1的作用恰好相反，可阻礙紅系分化。在HMBA或DMSO誘導分化的MEL細胞中GATA1表達上調而PU.1表達下調，GATA1的過表達導致MEL細胞紅系分化，但這種GATA1的誘導作用可被PU.1的上調表達抑制［2］。PU.1與GATA1相結合導致GATA1級聯信號通路的阻斷而阻礙了紅系分化進程。c-Myc在紅系分化過程中表達下調，其過表達阻礙Rac2和組蛋白乙酰轉移酶(HAT)Gcn5下調表達從而導致珠蛋白H3和H4乙酰化、阻礙了核固縮和排核［3］。真核生物翻譯起始因子 4H(eIF4H)最早在兔子網織紅細胞中發現，在eIF4B和eIF4F缺少的情況下可促進血紅蛋白的合成［4］。然而eIF4H是否對白血病細胞增殖和紅系分化的產生影響尚未見報道。為此，本研究通過構建eIF4H低表達的MEL細胞穩定株，通過觀察eIF4H低表達對MEL細胞體外增殖和紅系分化的影響，為進一步探究eIF4H在白血病發生中的作用機制提供依據。

1 材料與方法

1.1 細胞和質粒

HEK293T細胞(中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心)，MEL細胞(中國協和醫科大學基礎醫學研究所惠贈)。

載體質粒 pLKO.1、對照質粒 pLKO.1-TRC(scramble)、包裝質粒pCMV-VSVG和pCMV-dR8.2(Addgene公司)。

1.2 試劑

胎牛血清(Hyclone公司);MEN培養基和DMEM培養基(Gibco公司);嘌呤霉素、丁酸鈉和MTT(Sigma公司);轉染試劑 LipofectanineTM2000(Invitrogen公司);PI凋亡染色試劑盒(南京凱基生物);兔抗小鼠eIF4H單克隆抗體(CST公司);小鼠抗人β-actin單克隆抗體和羊抗小鼠 IgG單克隆抗體(Sigma公司)。

1.3 方法

1.3.1 細胞培養:MEL和HEK29T細胞培養于含10%FBS的DMEM培養液(100 U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素)中，于37℃、5%CO2飽和濕度下培養，每隔2 d傳代1次，取對數生長期細胞用于實驗。……