法舒地爾抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)減輕2型糖尿病大鼠心肌纖維化

李貴芝，周 紅，房彩霞，張力輝，王 綿，王瑞英

(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北石家莊050000)

糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy，DC)的主要病理改變之一是心肌纖維化，最后導(dǎo)致心功能減退、最終發(fā)生心功能衰竭［1］。而引起心肌損傷的關(guān)鍵是氧化應(yīng)激(oxidative stress)的增強(qiáng)［2］。eNOS在調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞功能中發(fā)揮重要作用。eNOS可減緩心肌損傷后的心肌重塑，發(fā)揮心肌保護(hù)作用［3］。RhoA是Rho蛋白家族的重要成員之一，Rho激酶(Rho kinase，ROCK)是最早發(fā)現(xiàn)的RhoA下游效應(yīng)器。研究表明RhoA/ROCK信號通路在多種糖尿病慢性并發(fā)癥中起著重要作用［4］。RhoA過度表達(dá)可導(dǎo)致心肌肥厚、心血管重塑、心肌收縮功能下降及心力衰竭［5］。目前RhoA/ROCK通路在高血糖狀態(tài)下對心肌氧化應(yīng)激的影響尚未見報道。本實驗建立2型糖尿病大鼠模型，采用ROCK抑制劑法舒地爾(fasudil)進(jìn)行干預(yù)，觀察心肌上RhoA/ROCK信號通路對氧化應(yīng)激及eNOS表達(dá)的影響，探討糖尿病心肌損傷可能的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物

清潔級雌性SD大鼠42只，體質(zhì)量180～200 g，河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供［許可證號:SCXK(冀)2012-1-003，動物質(zhì)量合格證編號:1010399］自由進(jìn)食水，按清潔級大鼠要求飼養(yǎng)。

1.2 主要試劑

鹽酸法舒地爾注射液(天津紅日藥業(yè)有限公司);鏈脲佐菌素(Sigma公司);125I胰島素放射免疫分析藥盒(濰坊三維生物工程有限公司);羥脯氨酸、SOD和MDA試劑盒(均南京建成生物有限公司);Folin酚試劑(北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司);蛋白磷酸酶抑制劑復(fù)合物(北京博邁德科技發(fā)展有限公司);兔抗大鼠磷酸化MYPT1(Thr853)抗體(Cell Signaling公司);兔抗大鼠磷酸化MYPT1(Thr696)多克隆抗體和小鼠抗……