1α，25(OH)2 D3通過阻滯細胞周期抑制胃癌細胞系增殖

郭利華，邵曉娜，朱華陀，陳文果，李 嵐，虞朝輝，陳李華

(浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院消化內科，浙江杭州310003)

1α，25(OH)2D3對多種腫瘤細胞具有潛在的抗增殖作用，流行病學以及細胞體外實驗研究結果發(fā)現活性維生素D3可以調節(jié)結腸癌、乳腺癌、前列腺癌細胞周期、細胞侵襲、誘導細胞凋亡、促進細胞分化的作用［1－3］。1α，25(OH)2D3的目的基因包括細胞周期調節(jié)因子P21、P27、cyclins、細胞間黏附、侵襲抑制因子以及編碼細胞骨架蛋白等［4］。本研究的目的是觀察1α，25(OH)2D3對胃癌細胞增殖、細胞周期的影響，闡述1α，25(OH)2D3發(fā)揮抗增殖作用的分子機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

人胃癌細胞系BGC-823和SGC-7901細胞(中國科學院上海細胞庫);RPMI 1640培養(yǎng)基、0.25%胰蛋白酶和澳洲胎牛血清(Gibco公司);1α，25(OH)2D3、MTT和DMSO(Sigma公司);Trizol、PI染料和 RNA酶(Sangon公司);PrimeScriptTMRT Master Mix和SYBR? PrimeScriptTM(Takara公司)。

1.2 細胞培養(yǎng)

采用含10%牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)BGC-823、SGC-7901人胃癌細胞系，在37℃，含5%CO2、濕度100%恒溫孵育箱中培養(yǎng)。2～3 d后，加2 mL 0.25%胰蛋白酶消化3 min，加等體積的培養(yǎng)液終止消化，1 000×g離心5 min。

1.3 MTT細胞增殖檢測

細胞以2 000個/孔種植于96孔板，4 h后，各組細胞加入不同濃度的1α，25(OH)2D3(1 ×10－10、1×10－9、1×10－8和 1 ×10－7mol/L)并設置陰性對照，每組4個復孔。細胞培養(yǎng)72 h后，每孔加20μL的MTT(5 g/L)，培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h;吸取上清，每孔加150μL DMSO，室溫下搖床上搖晃10 min，用酶標儀檢測490 nm的A值。計算生長抑制率=［(A實驗組－A對照組)/A對照組］×100%。

1.4 細胞周期檢測

將BGC-823和SGC-7901細胞用無血清的培養(yǎng)基以(4～5)×105個/孔鋪于6孔板，24 h后更換含10%胎牛血清的培養(yǎng)基，加入終濃度為100 nmol/L的1α，25(OH)2D3，對照組加入等量的 RPMI1640培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)72 h。細胞用0.5%胰蛋白酶消化，接著用PBS洗2次，每次1 000×g離心5 min;棄上清后用預冷的70%乙醇固定，4℃過夜;離心除去乙醇，PBS洗滌2次，然后加5uL的RNA酶(5 g/L)，室溫下處理15 min;每管加5μL的PI(5 g/L)染料，室溫避光孵育30 min;1 h內流式檢測?！?br>