PTEN對髓系白血病細胞VEGF及MMP表達的影響

成志勇，王亞麗，王鳳云，韓 英，谷 蕾，梁麗青，謝旭磊

浸潤與轉移是惡性腫瘤的重要生物學特征。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及金屬基質蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)相互影響、相互作用下，促進了腫瘤細胞的浸潤及轉移［1－2］。

PTEN(phosphatase and tensin hemology deleted on chromosome ten gene)基因是迄今為止發現的第一個編碼蛋白具有蛋白磷酸酶及脂質磷酸酶雙重活性的抑癌基因，PTEN低表達、缺失及突變等均可影響其抑制腫瘤生長、浸潤和侵襲功能。其主要通過對細胞內多種信號傳導通路的調控，參與抑制腫瘤細胞的侵襲、浸潤及轉移［3－4］。實驗通過對髓系白血病細胞的研究，探討PTEN對髓系白血病細胞中VEGF及MMP相互作用的影響。

1 材料與方法

1.1 研究資料與對象

1.1.1 主要試劑:反轉錄反應體系、SYBR Green Real Master Mix(北京天根);PTEN、VEGF鼠抗人單克隆抗體(Santa Cruz公司);明膠(石家莊博海)。

1.1.2 臨床資料:慢性髓系白血病患者來源于保定市第一醫院血液科及河北醫科大學第二醫院，符合WHO診斷標準。10例慢性期 CML患者(CMLCP)，其中男6例，女4例，中位年齡為39歲(25～67歲);10例急變期CML患者(CML-BC)，男5例，女5例。中位年齡為40歲(27～65);10例健康志愿者作為正常對照(NC)。所有患者均獲得倫理委員會的審查批準，同時簽署知情同意書。

1.1.3 腺病毒載體:含有野生型PTEN基因腺病毒(Ad-PTEN-GFP)和空載體腺病毒(Ad-GFP)，在人胚腎細胞系293A細胞中進行擴增及滴度測定。

1.1.4 細胞系:人胚腎細胞系293A細胞用含10%胎牛血清高糖DMEM培養基培養，人慢性髓系白血病K562細胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養基培養，細胞均在37℃，5%CO2的飽和濕度環境孵育。

1.2 方法

1.2.1 病毒轉染:按感染復數(multiplicity of infection，MOI)為200，在100μL無血清培養液混合病毒液后，加入 K562細胞，37℃，5%CO2培養2 h，加入含10%胎牛血清RPMI 1640培養液繼續培養，流式細胞儀檢測表達綠色熒光蛋白細胞比例，并計算轉染效率。……