賴氨大黃酸與順鉑聯合對人肺癌A549細胞系增殖和凋亡的影響

紀春梅，甄永占，范曉禹，王志軍，蔣守芳，朱麗華，章廣玲

大黃酸(rhein)是許多中藥尤其是大黃的主要有效成分。可抑制多種腫瘤細胞增殖并誘導其凋亡，具有廣泛的生物學活性［1－3］。蒽醌類化合物的共同特點是不溶于水，限制了其在腫瘤治療方面的應用。本實驗室對大黃酸進行結構改造獲得了水溶性好的賴氨大黃酸(rhein lysinate，RHL)。本研究觀察RHL聯合順鉑對人肺癌A549細胞增殖、凋亡的影響及其作用機制，為今后大黃酸在腫瘤治療中的應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及細胞系

1.1.1 試劑:賴氨酸(北京市科海軍舟生物科技發展中心)。賴氨大黃酸(rhein lysinate，RHL)由本室合成，分子式:C21H22N2O8，相對分子質量:430，純度93%;順鉑(中國醫學科學院腫瘤研究所);蛋白定量試劑盒(BCATMprotein assay kit)(Pierce公司產品);寬范圍蛋白預染 Marker(New England Biolabs公司);蛋白質印跡發光液和PVDF膜(Millipore公司);FITC-AnnexinⅤ 凋亡檢測試劑盒(北京寶賽生物技術有限公司);BCL-2抗體(sc-492)、BAX 抗體(sc-493)、β-actin抗體(sc-1616)(Santa Cruz公司);HRP標記的羊抗兔、兔抗羊和羊抗小鼠IgG抗體(北京中杉金橋有限責任公司);絲裂原活化蛋白激酶家族成員抗體試劑盒、磷酸化絲裂原活化蛋白激酶家族成員抗體試劑盒和凋亡相關分子抗體試劑盒(Cell Signaling Technology公司)。

1.1.2 細胞系分組及處理:人肺癌細胞系(A549)由河北聯合大學中心實驗室傳代保存。用含10%胎牛血清(Hyclone)的高糖DMEM培養液(Gibco公司)，于37℃、5%CO2飽和濕度條件下培養，2 d傳代1次，實驗用細胞為對數生長期細胞，分對照組、1μmol/L順鉑組、100μmol/L RHL組以及1μmol/L順鉑和100 μmol/L RHL 聯合用藥組［4－5］。

1.2 方法

1.2.1 細胞增殖活性檢測:應用MTT法檢測定細胞存活率。取對數生長期的細胞……