MBP-1過表達對食管癌Eca-109細胞增殖和凋亡的影響

李雪婷，謝勇恩

(川北醫學院 免疫與分子生物學研究所， 四川 南充 637007)

MBP-1過表達對食管癌Eca-109細胞增殖和凋亡的影響

李雪婷，謝勇恩*

(川北醫學院 免疫與分子生物學研究所， 四川 南充 637007)

MBP-1又稱為c-MYC啟動子結合蛋白(c-MYC promoter binding protein)，其過表達可抑制多種癌細胞的增殖，但對食管癌細胞的影響尚未見報道。本研究構建了MBP-1的重組真核表達質粒，并將該重組質粒轉染食管癌Eca-109細胞，檢測MBP-1能否在食管癌細胞中過表達及其對食管癌細胞增殖和凋亡的影響。

1 材料與方法

1.1 質粒載體和細胞系:pcDNA3.1(+)質粒(本研究所唐恩潔教授贈送)，含MBP-1基因的質粒pCMV6-MBP-1(Origene公司)，食管癌Eca-109細胞系(中國科學院上海細胞生物研究所)。

1.2 主要試劑:PCR試劑盒(成都朝暉生物技術公司)。Lipofectamine2000、DAB 顯色試劑盒、MTT、鼠抗MBP-1單克隆抗體、兔抗β-actin單克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG和辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG(晶美公司)，凋亡檢測試劑YO-PRO-1(Molecular Probe公司)。其余試劑均為國產或進口分裝(分析純)。

1.3 MBP-1重組真核表達載體的構建:根據GenBank中MBP-1的mRNA序列(GenBank accession number：GU170215)，設計如下引物：P1:5′-GCAAGCTTATGGATGGAACAGAAAATAAAT CTAAG-3′；P2:5′-GCGGATCCACAGCTTACTTGGCCAG-3′。引物P1的5′末端引入HindⅢ的酶切位點，引物P2的5′末端引入BamHⅠ酶切位點。以質粒pCMV6-MBP-1為模板，通過PCR擴增獲取MBP-1目的基因，PCR擴增產物與質粒pcDNA3.1(+)的酶切、連接、轉化和重組質粒的篩選參照文獻[1]進行，對重組質粒進行酶切和DNA測序鑒定。

1.4 Western blot檢測:食管癌Eca-109細胞以2×106個細胞/孔接種25 cm2細胞培養瓶，置CO2孵箱培養，當細胞達90%匯合時用于轉染，細胞分為3組，每組3瓶細胞，第1組轉染重組質粒，第2組轉染質粒pcDNA3.1(+)，第3組不做任何處理，細胞轉染按脂質體轉染試劑Lipofectin2000說明書進行。……