反基因鎖核酸體外阻斷肝癌細胞系乙肝病毒S基因表達

羅艷紅，鄧益斌，鄒佳峻

(右江民族醫學院 臨床學院 醫學檢驗中心, 廣西 百色 533000)

研究論文

反基因鎖核酸體外阻斷肝癌細胞系乙肝病毒S基因表達

羅艷紅，鄧益斌*，鄒佳峻

(右江民族醫學院 臨床學院 醫學檢驗中心, 廣西 百色 533000)

目的探討針對乙肝病毒S基因同聚嘌呤區的鎖核酸體外抑制細胞內病毒復制的效果。方法針對乙肝病毒S基因同聚嘌呤區設計合成鎖核酸、硫代寡核苷酸、未修飾寡核苷酸及無關對照序列，以陽離子脂質體介導，體外轉染HepG2.2.15細胞，采用熒光定量聚合酶鏈反應技術和時間分辨免疫熒光技術分別監測2、4、6、8和10 d細胞培養上清液中HBV DNA、HBsAg和HBeAg的含量;四甲基偶氮唑藍法檢測鎖核酸對細胞代謝的影響。結果加入鎖核酸后，對細胞內HBV DNA復制、HBsAg與HBeAg表達均有較明顯的時間和劑量依賴性抑制作用，6 d后抑制率分別為52.14%、57.48%和29.63%。鎖核酸對細胞代謝無明顯影響。結論針對乙肝病毒S基因同聚嘌呤區的鎖核酸，體外能有效抑制乙肝病毒的復制，既為乙肝病毒治療提供有效靶位，也為反基因治療提供理論和實驗依據。

脂質體; 乙型肝炎病毒; 鎖核酸; 反基因治療

反基因治療(anti-gene therapy)是由特定寡聚脫氧核苷酸與靶雙鏈DNA同聚嘧啶或同聚嘌呤區專一性結合形成局部三螺旋結構，阻止靶DNA與聚合酶、轉錄因子等蛋白結合，實現抑制靶基因的復制與表達的目的。鎖核酸(locked nucleic acid，LNA)是新發現的一種帶環狀結構的核苷酸衍生物[1-4]，與其他寡核苷酸相比，具有更高的熱穩定性、更好的分子雜交能力、更強的抗核酸酶降解能力、更好的脂溶性和更低的細胞毒性等優勢?！?br>