干擾素-α抑制大鼠血管平滑肌細胞增殖

龍向淑，宋 方，黃 晶，吳 強

(貴州省人民醫院 心血管內科， 貴州 貴陽 550002)

干擾素-α抑制大鼠血管平滑肌細胞增殖

龍向淑，宋 方，黃 晶，吳 強*

(貴州省人民醫院 心血管內科， 貴州 貴陽 550002)

血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)過度增殖是血管成形術后再狹窄、動脈粥樣硬化及高血壓等血管增殖性疾病的共同病理基礎，有效抑制VSMCs增殖對上述疾病的防治具有重要的臨床意義。干擾素(Interferon, IFN)具有抗病毒、免疫調節及抑制腫瘤細胞增長等作用，但其對VSMCs增殖的影響及其機制尚未完全明確。本研究探討IFN-α對大鼠VSMCs增殖的影響及其部分機制，為其臨床應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 動物和試劑(盒)：清潔級SD大鼠(雌性1只，雄性2只)，體質量120～140 g[第三軍醫大學實驗動物中心，合格證號：SCXK(渝)2012-0003]。IFN-α(北京三元基因工程有限公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(Hyclone公司)；細胞周期檢測試劑盒(C1052)(碧云天公司)；100 bp DNA Ladder(北京天根公司)；RT-PCR試劑盒(TaKaRa公司)；PCR擴增引物由寶生物工程(大連)有限公司合成(表1)；P204抗體(Santa Cruz公司)；Western 中分子質量蛋白Marker(北京康為世紀生物科技有限公司)。

1.2 細胞培養及實驗分組：按文獻[1]的方法進行VSMCs培養。取4～6代細胞用于實驗。實驗分3組，即對照組(control)、IFN-α干預組(IFN)和20% FBS+IFN-α組(F+I)；IFN組用終濃度為2×106U/L IFN-α干預6 h，F+I組予20% FBS刺激12 h后與IFN組同步加IFN-α，繼續培養48 h收集細胞。

1.3 MTT實驗：按文獻[2]的方法操作。

1.4 流式細胞術檢測細胞周期：按試劑盒(C1052)說明書操作。

1.5 RT-PCR檢測mRNA表達：常規提取總RNA和反轉錄，定量PCR擴增目的基因。

1.6 Western blot 檢測蛋白表達：按文獻[2]的方法操作。

表1 引物序列Table 1 The sequences of primers

2 結果

2.1 IFN-α對VSMCs增殖及細胞周期的影響：與對照組比較，IFN組、F+I組的MTT吸光度A值降低(P<0.05)；IFN和F+I組的G0/G1期細胞增多，S期細胞減少(P<0.05)(表2)。

2.2 IFN-α對P204 mRNA及蛋白表達的影響：IFN組、F+I組的P204 mRNA及蛋白表達較對照組升高(P<0.05)(圖1，表2)。

3 討論

VSMCs增殖是血管增殖性疾病重要的病理改變。……