bFGF體外誘導大鼠BMSCs分化為心肌樣細胞

于艷囡，王海萍，呂 洋

(河北北方學院 組織學與胚胎學教研室, 河北 張家口 075000)

bFGF體外誘導大鼠BMSCs分化為心肌樣細胞

于艷囡，王海萍*，呂 洋

(河北北方學院 組織學與胚胎學教研室, 河北 張家口 075000)

心血管病嚴重危害人類健康，各種因素作用于心肌細胞均可引起不可逆性損傷，干細胞培養(yǎng)有望從根本上治療這一疾病。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)具有強大增殖和分化能力，BMSCs在不同的誘導劑作用下可以向骨細胞、心肌細胞等分化[1]。堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)具有激活心肌細胞增生的潛能,bFGF促進細胞增生的作用與其濃度有一定關系。本實驗旨在用不同濃度bFGF對大鼠BMSCs進行體外誘導，并探究其有效性，尋找最適濃度。

1 材料與方法

1.1 動物和試劑:SPF級3周SD大鼠(20～30 g)，雌雄均可(河北醫(yī)科大學 合格證號：908134)。IMDM培養(yǎng)基(Gibco公司)，胎牛血清(蘭州民海公司)，α-actin，desmin(北京博奧森公司)， cTnT(NeoMark公司)，免疫細胞化學染色試劑盒(北京四正柏公司)。

1.2 方法

1.2.1 分離BMSCs純化擴增培養(yǎng)：取大鼠四肢長骨，沖出骨髓液過濾接種于培養(yǎng)瓶，調(diào)整細胞于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后換液，此后每3天換液1次，貼壁細胞達90%匯合時消化，接種傳代。第2代培養(yǎng)48 h后，A、 B和C組分別加0.5、 1和2 ng/mL bFGF，D組空白對照。誘導3 d后去除誘導，普通培養(yǎng)基培養(yǎng)4周。

1.2.2 心肌標志鑒定：培養(yǎng)的細胞PBS洗3次，4%多聚甲醛固定15 min，再洗3次，山羊血清封閉1 h，分別加入 α-橫紋肌肌動蛋白(α-actin)、結蛋白desmin和心肌肌鈣蛋白T(cTnT)，4 ℃孵育過夜，加PBS作空白對照，其他步驟按試劑盒說明，最后蘇木素復染，乙醇脫水，中性樹脂固定,顯微鏡下觀察。

1.2.3 免疫熒光檢測：取培養(yǎng)的B組細胞爬片，然后按試劑盒說明書操作，激光掃描共焦顯微鏡下觀察。……