RGD和細胞穿膜肽共修飾脂質體的構建及其體外功能評價

趙炳芬

(勝利油田 中心醫院 腫瘤科， 山東 東營 257034)

研究論文

RGD和細胞穿膜肽共修飾脂質體的構建及其體外功能評價

趙炳芬*

(勝利油田 中心醫院 腫瘤科， 山東 東營 257034)

目的制備RGD和TAT共修飾載紫杉醇(PTX)脂質體(RGD/TAT-LP-PTX)，研究其理化性質和體外抗腫瘤作用。方法薄膜分散法制備RGD/TAT-LP-PTX，研究其理化性質；檢測肝癌HepG2細胞對RGD/TAT-LP的攝取效率以及脂質體的攝取機制。共聚焦實驗研究腫瘤細胞對脂質體的攝取。MTT檢測RGD/TAT-LP-PTX對HepG2細胞的增殖抑制作用。結果RGD/TAT-LP-PTX的粒徑134.5±8.4 nm，電位為22.35±2.55 mV，紫杉醇的包封率84.6%。RGD/TAT-LP在4 h攝取效率是2 h的1.65倍(P< 0.05)；HepG2細胞在4 h對RGD/TAT-LP的攝取效率分別是TAT-LP、RGD-LP和LP的2.2倍、2.7倍和3.9倍(P< 0.01)；RGD/TAT-LP-PTX在24 h HepG2細胞的存活率是48 h的1.75倍(P< 0.05)；給藥48 h后，TAT-LP-PTX、RGD -LP-PTX和LP-PTX的細胞存活率分別是RGD/TAT-LP-PTX組的1.65倍、1.74倍和2.1倍(P< 0.01)。結論RGD和TAT共修飾紫杉醇脂質體是一種潛在高效的腫瘤靶向給藥系統。

整合素受體；細胞穿膜肽；脂質體；腫瘤靶向

在過去幾十年，隨著現代生物研究的進展，對腫瘤疾病的治療手段日益豐富。其中腫瘤的靶向治療成為了腫瘤治療研究的熱點[1]。脂質體是最常用的一種靶向給藥載體，具有良好的生物相容性，可表面修飾實現主動靶向[2]。TAT作為一種強效的細胞穿膜肽(cell penetrating peptides，CPP)被廣泛應用于納米載體的研發中，以提高納米載體的入胞能力[3]。有研究表明，腫瘤細胞表面有整合素受體高度表達[4]。本研究以脂質體為載體，制備了RGD和細胞穿膜肽共修飾紫杉醇脂質體，并對其理化性質和體外活性進行評價。

1 材料與方法

1.1 材料

大豆磷脂(SPC，上海太偉藥業有限公司)；膽固醇(Chol，Sigma公司)；DSPE-PEG2000和FITC標記的磷脂(Avanti polar lipids公司)；DMEM高糖培養基和胎牛血清(Gibco公司)；其余試劑為分析純。人源肝癌細胞(HepG2，ATCC)。

1.2 方法

1.2.1 肝癌HepG2細胞的培養：將HepG2細胞置于含有100 mg/L胎牛血清的DMEM培養基中培養，培養條件為5% CO2，飽和濕度，溫度為37 ℃。待細胞匯合度為0.8～0.9時，用2.5 mg/L胰蛋白酶消化傳代，取增殖期細胞進行實驗。……