頸動脈粥樣硬化患者外周血Th17水平研究

朱太卿 張莉峰 袁學謙 肖悠美 張存玲 王慧貞 王煥榮 王愛麗

鄭州人民醫院神經內科 鄭州 450003

隨著老齡化社會的到來，心腦血管動脈粥樣硬化（ather-osclerosis，AS）的發病率越來越高。Th17細胞是近年新發現的一個CD4+細胞亞群，并以分泌細胞因子白細胞介素17（Interleukin-17，IL-17）為主要特征。Th17細胞及其分泌的IL-17具有促進炎癥發生、發展的作用。本研究旨在觀察頸動脈粥樣硬化患者外周血Th17細胞及IL-17的水平，進一步探討Th17細胞及細胞因子IL-17在頸動脈粥樣硬化發病中的作用。

1 對象和方法

1.1 對象 （1）頸動脈粥樣硬化組：來自2012-01-2012-12鄭州人民醫院神經內科就診的頸動脈硬化患者36例，男20例，女16例，平均年齡（52±14）歲；所有患者經頸動脈彩超檢查確診為頸動脈粥樣硬化，所有患者近3個月未發生心腦血管病。近4周無感染性疾病，近3周未服用抗炎藥或免疫抑制劑。無自身免疫性疾病或惡性腫瘤，并排除血液病、嚴重的心、肝、腎等疾病。（2）正常對照組：系同期我院健康體檢者36例。經頸動脈彩色多普勒超聲檢查排除頸動脈粥樣硬化，各項體檢指標正常，無自身免疫性疾病。2組年齡、性別差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 Th17細胞檢測 所有患者均于住院第2天抽取清晨空腹肘靜脈血。用淋巴細胞分離液常規密度梯度離心法獲取外周單個核細胞。顯微鏡下計數，調整上機細胞濃度為1×105～1×106個／mL。將細胞液分成2份，均為500μL，做好標記，隨后分別加入FITC標記抗人CD4抗體（作為T淋巴細胞標記），混勻后室溫下避光反應30min。離心PBS洗滌2次，加入固定液500μL室溫避光固定反應30min。再次離心PBS洗滌2次，加入破膜劑500μL行細胞打孔，室溫避光固定反應15min。離心棄上清液后測定管加入PE標記抗人IL-17抗體，同型對照管加入IgG1-PE，室溫下避光反應30min，PBS洗滌2次后上流式細胞儀檢測。8h內上機檢測。采用Cellquest軟件獲取分析細胞。帶有熒光標記的淋巴細胞（%）結果以陽性細胞百分率表示。

1.3 IL-17檢測 應用酶聯免疫吸附實驗（ELISA法）法對頸動脈粥樣硬化患者及正常對照組血漿中的IL-17進行檢測，操作步驟按試劑盒說明。

1.4 統計學方法 采用SPSS 17.0統計軟件，計量資料用均數±標準差（）表示。兩個獨立樣本均數間的比較用成組t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

頸動脈粥樣硬化患者組與正常對照組外周血Th17細胞及血漿IL-17水平比較見表1。結果顯示，與正常對照組比較，Th17細胞數量顯著升高（P＜0.01），血漿IL-17水平也同樣顯著升高 （P＜0.05）。

表1 2組Th17細胞及血漿IL-17比較 （）

表1 2組Th17細胞及血漿IL-17比較 （）

注：▲P＜0.01，△P＜0.05

組別 n Th17／CD4+（%） IL-17（pg／mL）患者組 36 1.78±0.39▲ 18.57±1.91△對照組36 0.74±0.25 12.32±1.54

3 討論

隨著現有生活方式的改變及社會精神壓力的加大，動脈粥樣硬化所致的心腦血管病的發病率越來越高，并呈現出年輕化趨勢。關于動脈粥樣硬化發病機制的學說很多，影響較大的有脂質浸潤學說、動脈平滑肌細胞增殖學說、血栓形成學說等。隨著研究的進展，炎癥免疫學說逐漸被大多數人接受。許多研究表明免疫細胞及它們分泌的細胞因子組成的炎癥介質在動脈粥樣硬化的發生、發展中都起到了重要作用，其中效應T細胞發揮著關鍵作用［1-2］。依據分泌細胞因子不同，將效應性T細胞分為Th1和Th2兩個亞群，研究表明Th1亞群及其分泌的細胞因子具有促動脈粥樣硬化進展的作用，而Th2及其分泌的細胞因子具有延緩動脈粥樣硬化的作用。

2005發現了效應T細胞一種新的亞群，并以分泌細胞因子白細胞介素17為主要特征，因此被命名為Th17細胞。實驗證明，Th17細胞亞群在多種自身免疫性疾病中存在異常，Th17細胞在機體的炎癥免疫反應中起著重要調節作用［3］。Gao［4］研究發現，有動脈粥樣硬斑塊形成的小鼠動物模型動脈血管壁的IL-17水平比對照組明顯升高，且Th17細胞增加的程度與斑塊大小呈正相關，而阻斷IL-17發揮作用后可以延緩斑塊的發展。Wang等［5］研究發現急性冠脈綜合征患者的外周血中Th17細胞數量及IL-17、IL-8水平都比對照組有明顯升高。一系列的研究證實Th17細胞及IL-17會促使動脈粥樣硬化形成及導致其相關疾病的發生。

與上述研究結果類似，本實驗中，頸動脈粥樣硬化患者組外周血中的Th17細胞及血漿IL-17水平顯著高于正常對照組，這說明Th17細胞及其分泌的IL-17參與了頸動脈粥樣硬化的發病過程。關于Th17細胞及其分泌的細胞因子如何促進頸動脈動脈粥樣硬化斑塊的發展有待進一步研究。

［1］ Lundberg AM，Hansson GK.Innate immune signals in atherosclerosis［J］.Clin Immunol，2010，134（1）：5-24.

［2］ Andersson J，Libby P，Hansson GK.Adaptive immunity and atherosclerosis［J］.Clin Immunol，2010，134（1）：33-46.

［3］ 吳鳳英，胡靜 .腦梗死與頸動脈粥樣硬化斑塊及相關因素分析［J］.中國實用神經疾病雜志，2010，13（1）：26-28.

［4］ Gao Q，Jiang Y，Zhang L，et al.A critical function of Th17 proinflammatory cells in the development of atherosclerotic plaque in mice［J］.Immunol，2010，5 （10）：5 820-5 827.

［5］ Wang Z，Lee J，Zheng Q，et al.Increased Th17cells in coronary artery disease are associated with neutrophili inflammation［J］.Scand Cardiovasc，2011，45（6）：54-61.