頸動脈粥樣硬化患者外周血Th17水平研究

朱太卿 張莉峰 袁學(xué)謙 肖悠美 張存玲 王慧貞 王煥榮 王愛麗

鄭州人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 鄭州 450003

隨著老齡化社會的到來，心腦血管動脈粥樣硬化（ather-osclerosis，AS）的發(fā)病率越來越高。Th17細(xì)胞是近年新發(fā)現(xiàn)的一個CD4+細(xì)胞亞群，并以分泌細(xì)胞因子白細(xì)胞介素17（Interleukin-17，IL-17）為主要特征。Th17細(xì)胞及其分泌的IL-17具有促進炎癥發(fā)生、發(fā)展的作用。本研究旨在觀察頸動脈粥樣硬化患者外周血Th17細(xì)胞及IL-17的水平，進一步探討Th17細(xì)胞及細(xì)胞因子IL-17在頸動脈粥樣硬化發(fā)病中的作用。

1 對象和方法

1.1 對象 （1）頸動脈粥樣硬化組：來自2012-01-2012-12鄭州人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的頸動脈硬化患者36例，男20例，女16例，平均年齡（52±14）歲；所有患者經(jīng)頸動脈彩超檢查確診為頸動脈粥樣硬化，所有患者近3個月未發(fā)生心腦血管病。近4周無感染性疾病，近3周未服用抗炎藥或免疫抑制劑。無自身免疫性疾病或惡性腫瘤，并排除血液病、嚴(yán)重的心、肝、腎等疾病。（2）正常對照組：系同期我院健康體檢者36例。經(jīng)頸動脈彩色多普勒超聲檢查排除頸動脈粥樣硬化，各項體檢指標(biāo)正常，無自身免疫性疾病。2組年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 Th17細(xì)胞檢測 所有患者均于住院第2天抽取清晨空腹肘靜脈血。用淋巴細(xì)胞分離液常規(guī)密度梯度離心法獲取外周單個核細(xì)胞。顯微鏡下計數(shù)，調(diào)整上機細(xì)胞濃度為1×105～1×106個／mL。將細(xì)胞液分成2份，均為500μL，做好標(biāo)記，隨后分別加入FITC標(biāo)記抗人CD4抗體（作為T淋巴細(xì)胞標(biāo)記），混勻后室溫下避光反應(yīng)30min。離心PBS洗滌2次，加入固定液500μL室溫避光固定反應(yīng)30min。再次離心PBS洗滌2次，加入破膜劑500μL行細(xì)胞打孔，室溫避光固定反應(yīng)15min。離心棄上清液后測定管加入PE標(biāo)記抗人IL-17抗體，同型對照管加入IgG1-PE，室溫下避光反應(yīng)30min，PBS洗滌2次后上流式細(xì)胞儀檢測。8h內(nèi)上機檢測。采用Cellquest軟件獲取分析細(xì)胞。帶有熒光標(biāo)記的淋巴細(xì)胞（%）結(jié)果以陽性細(xì)胞百分率表示。

1.3 IL-17檢測 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA法）法對頸動脈粥樣硬化患者及正常對照組血漿中的IL-17進行檢測，操作步驟按試劑盒說明。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。兩個獨立樣本均數(shù)間的比較用成組t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

頸動脈粥樣硬化患者組與正常對照組外周血Th17細(xì)胞及血漿IL-17水平比較見表1。結(jié)果顯示，與正常對照組比較，Th17細(xì)胞數(shù)量顯著升高（P＜0.01），血漿IL-17水平也同樣顯著升高 （P＜0.05）。

表1 2組Th17細(xì)胞及血漿IL-17比較 （）

表1 2組Th17細(xì)胞及血漿IL-17比較 （）

注：▲P＜0.01，△P＜0.05

組別 n Th17／CD4+（%） IL-17（pg／mL）患者組 36 1.78±0.39▲ 18.57±1.91△對照組36 0.74±0.25 12.32±1.54

3 討論

隨著現(xiàn)有生活方式的改變及社會精神壓力的加大，動脈粥樣硬化所致的心腦血管病的發(fā)病率越來越高，并呈現(xiàn)出年輕化趨勢。關(guān)于動脈粥樣硬化發(fā)病機制的學(xué)說很多，影響較大的有脂質(zhì)浸潤學(xué)說、動脈平滑肌細(xì)胞增殖學(xué)說、血栓形成學(xué)說等。隨著研究的進展，炎癥免疫學(xué)說逐漸被大多數(shù)人接受。許多研究表明免疫細(xì)胞及它們分泌的細(xì)胞因子組成的炎癥介質(zhì)在動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展中都起到了重要作用，其中效應(yīng)T細(xì)胞發(fā)揮著關(guān)鍵作用［1-2］。依據(jù)分泌細(xì)胞因子不同，將效應(yīng)性T細(xì)胞分為Th1和Th2兩個亞群，研究表明Th1亞群及其分泌的細(xì)胞因子具有促動脈粥樣硬化進展的作用，而Th2及其分泌的細(xì)胞因子具有延緩動脈粥樣硬化的作用。

2005發(fā)現(xiàn)了效應(yīng)T細(xì)胞一種新的亞群，并以分泌細(xì)胞因子白細(xì)胞介素17為主要特征，因此被命名為Th17細(xì)胞。實驗證明，Th17細(xì)胞亞群在多種自身免疫性疾病中存在異常，Th17細(xì)胞在機體的炎癥免疫反應(yīng)中起著重要調(diào)節(jié)作用［3］。Gao［4］研究發(fā)現(xiàn)，有動脈粥樣硬斑塊形成的小鼠動物模型動脈血管壁的IL-17水平比對照組明顯升高，且Th17細(xì)胞增加的程度與斑塊大小呈正相關(guān)，而阻斷IL-17發(fā)揮作用后可以延緩斑塊的發(fā)展。Wang等［5］研究發(fā)現(xiàn)急性冠脈綜合征患者的外周血中Th17細(xì)胞數(shù)量及IL-17、IL-8水平都比對照組有明顯升高。一系列的研究證實Th17細(xì)胞及IL-17會促使動脈粥樣硬化形成及導(dǎo)致其相關(guān)疾病的發(fā)生。

與上述研究結(jié)果類似，本實驗中，頸動脈粥樣硬化患者組外周血中的Th17細(xì)胞及血漿IL-17水平顯著高于正常對照組，這說明Th17細(xì)胞及其分泌的IL-17參與了頸動脈粥樣硬化的發(fā)病過程。關(guān)于Th17細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子如何促進頸動脈動脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展有待進一步研究。

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