HPLC法測定柴芩清感顆粒中黃芩苷的含量

廣東省婦幼保健院，廣東 廣州 510010

HPLC法測定柴芩清感顆粒中黃芩苷的含量

黃瑞紅莊少雄

廣東省婦幼保健院，廣東 廣州 510010

目的建立HPLC法測定柴芩清感顆粒中黃芩苷含量的方法。方法色譜柱為Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)；流動相為甲醇-0.2%磷酸(40∶60)；流速為1.0ml·min-1；檢測波長為280nm；柱溫為室溫。結(jié)果黃芩苷線性范圍為30.25～605.0μg·ml-1，平均回收率為100.92%，RSD為1.21%。結(jié)論該法操作簡單，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為柴芩清感顆粒中黃芩苷含量的測定方法提供參考依據(jù)。

柴芩清感顆粒；黃芩苷；HPLC

柴芩清感顆粒由柴胡、黃芩、桑葉、菊花、連翹、杏仁等組成，用于治療風(fēng)熱型上呼吸道感染。黃芩苷是黃芩的主要有效成分，具有抗炎、抗病毒等作用[1]。為了有效控制柴芩清感顆粒的內(nèi)在質(zhì)量，保證療效，實(shí)驗(yàn)選擇黃芩苷為含量測定指標(biāo)，建立柴芩清感顆粒中黃芩苷含量的HPLC測定方法。結(jié)果表明該方法操作簡單，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：SPD-20A紫外檢測器，LC-20AT泵(日本島津公司)；Sartorious BT 25S電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；KQ-100DE型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司)。

柴芩清感顆粒(廣州藍(lán)天醫(yī)藥科技有限公司，批號20100805，20100809，20100811)；黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110715-201117)；甲醇為色譜純；水為純凈水；其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱：Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)；流動相：甲醇-0.2%磷酸(40:60)；流速：1ml·min-1；檢測波長：280nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μl。黃芩苷峰與前后峰的分離度均在1.5以上，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液的制備 對照品溶液的制備：取在60℃減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量，精密稱取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。供試品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)20分鐘，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 專屬性試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定。結(jié)果見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.6050mg的對照品儲備液，分別精密吸取對照品儲備液適量，用甲醇配制成0.03025、0.0605、0.1210、0.3025mg/ml的對照品溶液，分別精密吸取上述4個對照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定。以黃芩苷對照品的濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，測得的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=107x-48965，R2=0.9998，表明該法測定黃芩苷在30.25～605.0μg·ml-1線性良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對照品溶液(60.5μg/ml)10μl連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算黃芩苷峰面積的RSD( n=6)為0.6%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性考察 取同一個供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，結(jié)果黃芩苷峰面積的RSD(n=6)為1.3%，表明供試品溶液在10小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號：20100805)，按供試品溶液制備方法平行制備6組供試品溶液，按上述色譜條件測定，結(jié)果樣品中黃芩苷的平均含量(n=6)為12.36mg/g，RSD為2.1%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知黃芩苷含量的柴芩清感顆粒(批號：20100805，含量：12.36mg/g)約0.25g，分取6份，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，分別精密加入黃芩苷對照品溶液(3.09mg)，按“3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率(n=6)為100.92%，RSD為1.21%。見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

2.9 樣品測定 取柴芩清感顆粒，3批，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，柴芩清感顆粒的平均含量為12.378mg/g，見表2。

表2 黃芩苷含量測定結(jié)果(mg/g)

3 討論

3.1 檢測波長與流動相選擇 參考2010年版中國藥典一部黃芩項(xiàng)下的含量測定方法[2]，以及黃芩苷含量測定相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)、文獻(xiàn)，本試驗(yàn)選擇檢測波長為280nm。流動相的選擇參考文獻(xiàn)[3、4]，對比了甲醇-0.2%醋酸、乙腈-0.2%磷酸、甲醇-0.2%磷酸等系統(tǒng)，結(jié)果選擇甲醇-0.2%磷酸(40：60)，黃芩苷峰形對稱且重現(xiàn)性好，分離度大于1.5。

3.2 樣品提取時間的選擇 由于藥材中的成分，在工藝提取過程中已被提取出來，且該制劑為顆粒劑，其中的成分容易溶出，所以選擇超聲處理提取樣品中的黃芩苷，方法簡便快捷。試驗(yàn)中對比了20、30、40分鐘三個超聲時間對黃芩苷提取效果的影響，結(jié)果表明三個時間的提取效果無明顯差異，故選擇超聲20分鐘。

3.3 提取溶劑的選擇 試驗(yàn)中對比了甲醇、70%乙醇、70%甲醇對黃芩苷提取效果的影響，結(jié)果表明，70%乙醇的提取效果更佳。

[1]李景松，張貴君，張智圓，等．黃芩藥材中活性成分黃芩苷的研究概況[J]．世界中醫(yī)藥，2013，8(4)：469-471.

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：170.

[3]張宇潔，雷楠，李金娟．HPLC測定雙黃連口服液中黃芩苷含量的實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化[J]．光譜實(shí)驗(yàn)室，2012，29(4)：2277-2281.

[4]黃其春，涂文升．RP-HPLC法測定甘露扶正口服液中黃芩苷的含量[J]．中國藥房，2011，22(3):253-254.

objective：To establish a method for determination of the contents of baicalin in Chaiqin Qinggan granules.MethodsThe chromatographic condition：Agilent HC-C18column(5μm，4.6×250mm),CH3OH-0.2%H3PO4(40-60) as mobile phase, the flow rate is 1.0 ml·min-1, the detection wavelength is 280 nm, the column temperature is room temperature.ResultsThe calibration curves showed good linearlty in the range of 30.25～605.0μg·ml-1,the average recoveries is 100.92%，RSD is 1.21%.ConclusionThis method is simple,with exact result and good repeatiton and can be used as the references for determination of the contents of baicalin of Chaiqin Qinggan granules.

Chaiqin Qinggan granules; baicalin; HPLC

R284.1

A

1007-8517(2014)03-0021-02

2013.11.29)