TP-ELISA法檢測梅毒抗體假陽性結(jié)果的影響因素

趙 花，李軍民，張 紅

TP-ELISA法檢測梅毒抗體假陽性結(jié)果的影響因素

趙 花，李軍民，張 紅

目的 探討TP-ELISA法檢測梅毒特異性抗體假陽性結(jié)果的影響因素。方法 采用TP-ELISA法對2619例標(biāo)本進行檢測，初檢陽性者再行TRUST試驗和TPPA確認(rèn)試驗，結(jié)果判定以TPPA為準(zhǔn)，比較TP-ELISA法與TPPA法的符合率。結(jié)果 231例TP-ELISA法檢測陽性標(biāo)本中S/CO值>1.0者201例，經(jīng)TRUST復(fù)檢后陽性者169例，經(jīng)TPPA確認(rèn)陽性者196例，TP-ELISA法和TPPA的符合率為97.5%。在S/CO為0.70～1.0的30例標(biāo)本中，經(jīng)TRUST復(fù)檢后陽性者12例，經(jīng)TPPA確證為陽性者19例，TP-ELISA法和TPPA的符合率為63.3%。結(jié)論 TP-ELISA法檢測陽性標(biāo)本中S/CO值為0.70～1.0者應(yīng)采用TRUST和 TPPA法聯(lián)合檢驗，以減少誤診及漏檢。

梅毒螺旋體；特異性抗體檢測；非特異性抗體檢測；確認(rèn)試驗

梅毒是由梅毒螺旋體(treponema pallidum，TP)感染所引起的一種慢性性傳播疾病，人體感染后可造成全身多組織和器官的損傷和病變。近年來，在我國發(fā)病呈上升趨勢[1,2]。梅毒診斷除依據(jù)臨床癥狀和體征外，主要依靠實驗室檢查。由于TP直接鏡檢法受實驗室的條件限制，目前仍以血清學(xué)檢查為主，常用的檢測方法有特異性抗體檢測(TP-ELISA)、非特異性抗體檢測(TRUST)、確認(rèn)試驗(TPPA)等。其中TP-ELISA法臨床應(yīng)用最為廣泛，但由于受不確定因素的影響，常會出現(xiàn)檢測值處于臨界區(qū)域(灰區(qū))的問題[3]。為此，筆者就TP-ELISA篩查梅毒抗體假陽性結(jié)果的影響因素進行探討。

1 材料與方法

1.1 材料 2619份標(biāo)本來自本院2011-03至2013-04門診、住院患者及健康體檢者，年齡0～93歲，男1098例，女1521例。其中經(jīng)皮膚性病專科確診的梅毒患者113例，泌尿科確診的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎127例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE) 91例，老年人、孕婦、糖尿病、慢性肝病等696例，其余為正常送檢標(biāo)本。

1.2 儀器和試劑 RT3100洗板機，Stat Fax 2100酶標(biāo)分析儀。TP-ELISA試劑產(chǎn)自廈門新創(chuàng)生物公司；TRUST試劑產(chǎn)自上海榮盛；TPPA試劑產(chǎn)自日本富士株式會社。

1.3 檢測方法 所有受檢者清晨空腹抽靜脈血3 ml，常規(guī)分離血清。各項操作和結(jié)果判定嚴(yán)格按試劑盒說明書進行。所有標(biāo)本先行TP-ELISA法檢測，每次試驗設(shè)陽性對照1孔，陰性對照2孔，陰性對照<0.05者以0.05計。初檢陽性者再行TRUST試驗和TPPA確認(rèn)試驗。結(jié)果判定以TPPA為準(zhǔn)，計算TP-ELISA法與TPPA法的符合率。

2 結(jié) 果

2.1 TP-ELISA法陽性標(biāo)本復(fù)檢結(jié)果 2619份標(biāo)本經(jīng)TP-ELISA法檢測陽性231例，其中S/CO值>1.0者201例；經(jīng)TRUST復(fù)檢后陽性者169例，后者經(jīng)TPPA確認(rèn)均為陽性；32例TRUST陰性標(biāo)本經(jīng)TPPA確認(rèn)陽性27例，TP-ELISA法和TPPA的符合率為97.5%(196/201)。TP-ELISA法S/CO值在0.70～1.0的陽性標(biāo)本30例，經(jīng)TRUST復(fù)檢后陽性標(biāo)本有12例，經(jīng)TPPA確認(rèn)陽性19例，符合率為63.3%(19/30，表1)。其中21例S/CO值在0.751～1.0的標(biāo)本經(jīng)TPPA確認(rèn)15例陽性，6例陰性，陽性率72.4%；9例S/CO值在0.7～0.750的標(biāo)本經(jīng)TPPA確認(rèn)4例陽性，5例陰性，陽性率44.4%。

表1 TP-ELISA法檢測梅毒抗體陽性標(biāo)本 TRUST和TPPA復(fù)檢結(jié)果

2.2 TP-ELISA法假陽性結(jié)果 16例TP-ELISA法陽性樣本經(jīng)TPPA確認(rèn)陰性者為風(fēng)濕4例，SLE 3例，其他9例。

3 討 論

目前，梅毒臨床實驗診斷方法大致分為 TRUST、TP-ELISA及TPPA。TRUST檢測因其滴度與臨床癥狀呈正相關(guān)，一般用于梅毒的療效觀察、隨訪和復(fù)發(fā)的輔助診斷[4]。TPPA屬于梅毒螺旋體抗原血清試驗，有著很高的敏感度和特異性，一般用于確認(rèn)試驗[5]。TP-ELISA法因其操作簡便，靈敏度、特異性均較高，可批量檢測等特點，是目前各實驗室普遍采用的篩檢梅毒特異性抗體的常規(guī)檢測方法。

由于TP-ELISA法檢測受諸多不確定因素影響，常會導(dǎo)致假陽性。本研究結(jié)果顯示，TP-ELISA檢測S/CO值>1.0的陽性者201例中，經(jīng)TPPA確認(rèn)陽性者196例，符合率為97.5%，表明這兩種方法相符性較好；而S/CO值在0.70～1.0的30例ELISA陽性標(biāo)本，經(jīng)TPPA確認(rèn)后陽性僅有19例，符合率明顯偏低，僅63.3%。其原因可能與以下因素有關(guān)：(1)標(biāo)本因素，血清標(biāo)本在采集過程中受到污染；血液凝固不完全，血清有殘留的纖維蛋白原存在[6]；溶血標(biāo)本，具有類似辣根過氧化物酶作用。(2)操作因素，不同人員操作習(xí)慣差異，如加樣手法、洗滌時間及次數(shù)、試劑的反復(fù)凍融使酶的活性降低等原因均可造成結(jié)果判讀錯誤[7]。(3)儀器因素，空白值異常，反應(yīng)孔污染或殘留物造成本底值過高，洗板機的拖帶污染現(xiàn)象等[8]，應(yīng)定期校準(zhǔn)酶標(biāo)儀。(4)“灰區(qū)”，指處于Cutoff值周圍一定范圍的測定結(jié)果，通常將Cutoff左右20%的檢測值視為“灰區(qū)”[9]。文獻[10]指出，由于一些不確定因素的影響，處在灰區(qū)范圍的結(jié)果重復(fù)性較差，容易造成假陽性或假陰性。因此，確定本實驗室的“灰區(qū)”范圍，對“灰區(qū)”結(jié)果再行TPPA確認(rèn)試驗可提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確率。

除了上述原因外，還有機體內(nèi)在因素的影響：(1)老年人假陽性率較高，本研究發(fā)現(xiàn)，16例假陽性標(biāo)本中，老年人占7例，可能原因：一是抗體免疫功能異常或長期服藥，產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體；二是體內(nèi)存在口腔螺旋體等誘導(dǎo)特異性抗原的交叉反應(yīng)抗體，可能引起假陽性[11]。(2)生理狀況改變，如妊娠，可能與自身基礎(chǔ)性疾病或免疫功能有關(guān)。(3)疾病導(dǎo)致的生物學(xué)假陽性反應(yīng)[12]，如急性猩紅熱、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、呼吸道感染等疾病一般滴度較低，在6個月內(nèi)就會轉(zhuǎn)陰；慢性系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、溶血性貧血等一般滴度較高，通常持續(xù)半年以上或終身。

建議對TP-ELISA法檢測陽性、S/CO為0.70～1.0的標(biāo)本采用TRUST和 TPPA法聯(lián)合檢驗，并建立適宜本實驗室“灰區(qū)”的檢測范圍，以減少誤診及漏檢率。

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(2014-05-10收稿 2014-07-12修回)

(責(zé)任編輯 尤偉杰)

Uncertain factors of detectingTreponemapallidumantibody by enzyme linked immunosorbent assay

ZHAO Hua, LI Junmin, and ZHANG Hong.

Clinical Laboratory, Shaanxi Provincial Corps Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Xi’an 710054, China

Objective To study the uncertain factors of the false positive results ofTreponemapallidumspecific antibody(anti-TP) detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA). Methods Anti-TP was detected in 2619 samples by ELISA. The positive samples were examined again by tolulized red unheated serum test (TRUST) andT.pallidumparticle assay (TPPA). Results The S/CO>1.0 in 231 positive samples detected by ELISA were 201, The 201 positive samples were examined again by TRUST and confirmed positive by TPPA. The positive samples by TRUST were 169, and by TPPA were 196. The coincidence rate of ELISA and TPPA was 97.5%. In 30 samples’ S/CO between 0.7 and 1.0, the positive samples examined again by TRUST were 12, and confirmed positive by TPPA were 19. The coincidence rate of ELISA and TPPA was 63.3%. Conclusions The method of ELISA is affected by the uncertain factors, So false positive results exist. The sample’s S/CO between 0.7 and 1.0 should be examined by TRUST and TPPA jointly.

TP；ELISA；TRUST；TPPA

趙 花，本科學(xué)歷，主管技師，E-mail:wodelongfengbaobao@163.com

710054西安，武警陜西總隊醫(yī)院檢驗科

R446.111；R759.1