左氧氟沙星原料及其制劑利用高效液相色譜法測定的有關物質

【摘要】左氧氟沙星為第三代氟喹諾酮類抗生素，具有光譜抗菌的作用，在臨床上有廣泛的應用，本文采用高效液相色譜法對其原料和制劑中的雜質進行測定，詳細闡述了實驗過程中的檢測方法。

【關鍵詞】左氧氟沙星原料及其制劑；高效液相色譜法；測定

【中圖分類號】R927【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）10-0256-02

一左氧氟沙星簡介

左氧氟沙星是喹諾酮類藥物中的一種，為第三代氟喹諾酮類抗生素，是氧氟沙星的左旋異構體，其體外抗菌活性約為氧氟沙星的兩倍，具有廣譜抗菌作用，抗菌作用強，它是通過抑制細菌DNA旋轉酶的活性，阻止細菌DNA的合成和復制而導致細菌死亡。自1993年在日本上市以來，在呼吸道感染、泌尿生殖系感染和皮膚軟組織感染等方面取得很好的治療效果，對治療急性和慢性下呼吸道感染的有效率達到了80%-100%，對于婦產科、耳鼻喉科等感染的有效率到達90%以上，其藥物的治療效果非常好。

二高效液相色譜法簡介及特點

1、高效液相色譜法簡介

高效液相色譜法是色譜法的一個重要分支，又稱為“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”等。它的測定方法是將單一溶劑或混合溶劑、緩沖液等液體作為流動相，將其泵入色譜柱，柱內的固定相和流動相的成分被分離后，通過檢測器進行檢測，對樣品進行分析的過程。這種方法被普遍用于化工、醫藥、食品、環境等領域，成為重要的分析手段。

2、高效液相色譜法特點

①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

②高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小于1小時。

③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

④高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μl數量級。

⑤應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。

三實驗前準備

準備好以下試驗所需用品：2695一2996高效液相色譜（美國Waters公司）、Empower色譜工作站（美國Waters公司）、左氧氟沙星（生產批號：130455一200202）、鹽酸左氧氟沙星（生產批號：040310、040311、040312）、乳酸左氧氟沙星（生產批號：050201）、鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液（生產批號：0411230202）、注射用甲磺酸左氧氟沙星（生產批號：20050218）、乳酸左氧氟沙分散片（生產批號：041215）、鹽酸左氧氟沙星膠囊（生產批號：04120601）、乙腈、甲醇為色譜純、分析純試劑。

四試驗方法與結果

1、色譜條件

色譜柱：KromasilTMC18（250mm×4.6mm，5μm）；柱溫：40℃；流動相0.05mol？L-1磷酸二氫鉀溶液（調節PH至5.0）—乙腈（87：13）；流速：1.0ml？min-1；檢測波長：293nm。

2、檢測波長的確定

左氧氟沙星對光具有不穩定性，選用光降解產物進行測定。通過對1.0ml？min-1左氧氟沙星水溶液一天的光照后，進樣20μl發現，左氧氟沙星在293nm波長處有最大吸收，其雜質在288nm-294nm處有最大吸收，我們選擇293為測定波長。

3、分析方法的選擇

取1.0mg？ml-1左氧氟沙星對照品水溶液，光照24h后，進樣20μl，記錄色譜圖。以0.05mol？L-1磷酸二氫鉀溶液（調節PH至5.0）—乙腈（87：13）為流動相，改變水相PH值，考察流動相的PH對氧氟沙星與雜質色譜行為的影響。結果表明流動相pH越小，左氧氟沙星與臨近雜質的分離度越小，柱效隨之增加。色譜柱的一般pH適用范圍為3.0一7.0，為使方法具有通用性，同時流動相pH為5.0時，左氧氟沙星與臨近雜質的分離度與柱效較合適，因此選擇流動相的pH為5.0。最終確定色譜條件為：0.05mol？L-1磷酸二氫鉀溶液（調節PH至5.0）—乙腈（87：13）為流動相；流速為1.0ml？min-1；檢測波長為293nm。

4、分析方法的專屬性

4.1光降解

稱取左氧氟沙星對照品適量溶解于水中，光照24h，取濾液進行檢測。

4.2熱降解

稱取左氧氟沙星對照品適量溶解于水中，水浴加熱30h，冷卻，取濾液進行檢測。

4.3氧化降解

稱取左氧氟沙星對照品適量溶解于水中，取過氧化氫溶液適量加入其中，放置6h，取濾液加流動相進行檢測。

4.4酸降解

稱取左氧氟沙星對照品制成1.0mg？ml-1的水溶液，加硫酸等體積混合，放置6h，中和后，濾過，取濾液加流動相進行檢測。

5、線性范圍

精密稱取左氧氟沙星對照品，加流動相溶解并稀釋至下列濃度：0.006，0.02，0.04，0.5，0.8，1.0，1.2，2.0，3.0mg？ml-1，分別進樣20μl，記錄色譜圖，已峰面積與進樣量（μg）進行線性回歸，得回歸方程為Y=5.16×106X-9.65×105，r=0.9999。說明左氧氟沙星在定量限至有關物質樣品測定濃度的6倍范圍內與色譜峰面積的線性關系良好。

6、檢測限和定量限

本方法的檢測限按信噪比3：1，左氧氟沙星為1.8μg？ml-1，定量限按信噪比10：1，左氧氟沙星為6.0μg？ml-1。

7、重復性與重現性

在上述色譜條件下，對同一樣品進行反復5次測定，結果RSD為0.7%。對3個不同批號的樣品，進行測定，RSD為0.8%，0.3%，0.2%。

8、溶液的穩定性

取線性關系試驗項下溶液1.0mg？ml-1，于室溫20℃下分別放置0，1，2，4，8，12h，在上述色譜條件下測定，左氧氟沙星峰面積的RSD為1.1%，結果表明左氧氟沙星在測定溶液中12h內穩定。

9、回收率試驗

精密稱取左氧氟沙星對照品，按片劑處方加入輔料，再用流動相溶解并稀釋至高、中、低3個濃度共9份供試品溶液，依法測定，結果平均回收率為99.4%，RSD為0.4%。

10、樣品測定

準確稱取左氧氟沙星適量，加入流動相制成1.0mg？ml-1的溶液，吸取適量溶液，加入流動相制成5.0μg？ml-1的溶液，將其作為對照品。吸取上述兩種溶液各2μl，泵入液相色譜儀，進行測定。

五討論

試驗中，用稀鹽酸、氫氧化鈉和雙氧水對左氧氟沙星的水溶液進行降解作用，未發現有雜質產生，說明其對酸堿具有穩定性，抗氧化性能較好，將其水溶液光照放置3小時后，發現雜質產生，說明左氧氟沙星對光照敏感，其原料及有關物質為光降解產物。文獻記載方法對色譜柱有明確要求，測定方法要求高，成本大，并且雜質檢測率低，不適用于基層單位，該實驗結果顯示，利用高效液相色譜法測定左氧氟沙星原料及其試劑可以檢測出雜質的真實含量，并且檢測過程對色譜柱無特殊要求，成本低，效果好，可以廣泛應用于各行各業。

參考文獻

[1]王維劍.左氧氟沙星的有關物質研究進展[J].中國抗生素雜志，2010，35（11）：820-824

[2]中國藥典2010年版第一增補本[S].2010