槐米中蘆丁提取工藝優(yōu)化研究

【摘要】目的優(yōu)選槐米的最佳提取條件。方法以槐米中所含成分蘆丁含量和提取率為評價指標，采用L9（34）正交試驗，對影響槐米的沸水煎煮提取效果的諸因素（藥材的粉碎度、溶劑用量、提取次數(shù)、提取時間）進行優(yōu)選。結果藥材為細粉、溶劑2500mL、提取3次、提取時間40min提取效果最好。結論本實驗為優(yōu)化槐米中蘆丁的提取工藝提供了參考依據(jù)。

【關鍵詞】蘆丁槐米正交試驗

【中圖分類號】R284.2【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）10-0591-01

槐米系豆科屬植物槐樹（SophorajaponicaL.）的花蕾，中醫(yī)臨床上作為止血藥，治療痔瘡、子宮出血、吐血、鼻出血，并有清肝瀉火、治療肝熱目赤、頭痛眩暈的功效。藥理研究表明，它能保持毛細血管正常的抵抗力，降低血管通透性，可使因脆性增加而出血的毛細血管恢復正常的彈性，還有抗炎，解痙等作用。槐米主要成分蘆丁含量高達12%～20%[1]，近年來有文章報道槐米具有治療糖尿病的功效。蘆丁的藥用價值開發(fā)利用較早。但蘆丁與其苷元槲皮素均難溶于水，為了改善其在水中的溶解性狀，增強其藥理活性，科研人員對其進行了長期而又有效的研究包括化學結構的改造，衍生物、復合物的制備，無機酸酯鹽以及β-環(huán)糊精包合物和共沉淀物的研制等。為了提高蘆丁的提取效率，避免資源浪費，摸索一種蘆丁的提取方法也顯得尤為重要，目前可采用的提取方法有浸漬法、有機溶劑提取法、堿提酸沉法、連續(xù)萃取法和微波法等，其中最常用，工藝較成熟的是石灰水法，但該法存在要求條件高，且產(chǎn)品純度不高等缺點。作者通過實驗，找出了原料利用率和產(chǎn)品純度都較高，且較經(jīng)濟簡便的正交法優(yōu)化槐米中蘆丁的提取工藝。現(xiàn)將實驗過程及結果報道如下。

1儀器及試劑

BL—220H千分之一電子天平（SHIMADZUCORPORATION），SHB—3型循環(huán)水式真空泵（上海申生科技有限公司），101—3A型電熱鼓風恒溫干燥箱（上海迅能電熱設備有限公司），BL—220H萬分之一電子天平（SHIMADZUCORPORATION），TU—1810紫外分光光度計（北京普析通用有限公司）。槐米（購于廣州清平市場，由廣州白云山中藥廠曾令杰博士鑒定為正品），蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100080-200306），乙醇、氫氧化鈉、三氯化鋁、亞硝酸鈉等均為分析純。

2方法與結果

2.1提取方法

稱取槐米100g，粉碎，加適量蒸餾水，用煎煮法提取，棉花過濾，濾液常溫下放置析晶12h，以藥材粉碎度（A）、溶劑用量（B）、提取次數(shù)（C）、提取時間（D）為考察因素，每個因素各取3個水平，在平行操作條件下，采用L9（34）正交試驗，以蘆丁含量和粗品提取率為評價指標，結果見表1。表1L9（34）因素和水平（略）

2.2粗品提取率的測定

將上述所得到的粗品于60℃干燥8h，移至干燥器中，放置1h后稱定質量，計算提取率。

2.3粗品的精制

取上述提取的蘆丁粗品，按1∶200加蒸餾水煮沸至完全溶解，稍放冷后抽濾、冷卻、析晶、抽濾后，沉淀物于60℃干燥8h，移至干燥器中，放置1h后稱定質量。

2.4蘆丁含量的測定

2.4.1對照品溶液的制備

精密稱取105℃干燥至恒重的蘆丁對照品25.7mg，于100mL容量瓶中，加75%（φ）乙醇適量，超聲波振蕩使溶解，加75%（φ）乙醇至刻度，搖勻，為蘆丁對照品溶液。

2.4.2供試品溶液的制備

取各提取物樣品約60mg，置25mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，為供試品溶液。

2.4.3測定波長的確定

分別取供試品溶液和對照品溶液，按標準曲線的制備的方法顯色，于350～600nm波長之間掃描，結果表明，兩者均在510nm波長處有最大吸收，故選擇510nm為測定波長。由于供試品本身有色，在510nm波長處有吸收，故在測定供試液時，以同一濃度未加顯色劑的供試液為空白對照，可消除背景吸收的影響。

2.4.4標準曲線的制備

精密吸取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于25mL量瓶中，分別加水使成約5mL，各加5%（ω）NaNO2溶液1mL，搖勻，放置6min，加1%（ρ）AlCl3溶液3mL，搖勻，放置6min，加4%（ρ）NaOH溶液10mL，搖勻，放置15min，加水至刻度，以第一管為空白，在510nm波長處測定吸光度，以蘆丁對照品的質量濃度（ρ）為橫坐標，吸收度（A）為縱坐標，得回歸方程A=0.0126ρ-0.0211，r=0.99961，表明蘆丁對照品在10.28-61.68μg·mL-1范圍內(nèi)線性關系良好。

2.4.5樣品測定

取所得的9個樣品，按“2.4.2”項下的方法制備供試液，精密量取3mL，按“2.4.4”方法顯色，測定吸光度并計算蘆丁的含量，結果見表2，方差分析見表3。表2L9（34）正交試驗設計及結果（略）表3正交試驗方差分析（略）

由表3方差分析結果可知，提取次數(shù)、提取時間二因素對蘆丁的提取都有顯著影響，綜合二因素影響的程度、確定最佳提取條件為A3B2C3D3，即藥材細粉、溶劑2500mL、提取3次、時間40min。

3討論

以槐米中提取得到蘆丁含量和粗品得率為考察指標，由表2的R值及表3中可以得出結論，各因素對實驗結果影響顯著的有C、D，表3正交試驗方差表明提取時間、提取次數(shù)影響較顯著，藥材粉碎度、溶劑用量影響小。從表2、表3的結果可以推斷出，提取最佳工藝條件為A3B2C3D3。即：藥材為細粉、溶劑2500mL、提取3次、提取40min提取效果最好。由表2可知，最終的工藝與正交試驗號8的條件基本相符。張來新曾報道過堿水提取法及乙醇回流提取法的提取率分別為9.6%和10.8%，本實驗的提取率為12.66%，所以本實驗用水為溶劑提取蘆丁，經(jīng)精制后得到的樣品純度高，污染少，成本低，操作簡單，適于大規(guī)模生產(chǎn)，值得推廣借鑒。

參考文獻

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