優選心舒滴丸中最佳人參提取、精制工藝研究

【摘要】目的優選心舒滴丸中人參提取、精制工藝條件。方法以人參皂苷Rg1、Re含量為指標，采用正交試驗設計，優選人參提取工藝條件；以比吸附率、洗脫量為指標優選大孔吸附樹脂精制工藝條件。結果優選提取工藝條件：體積分數為70%的乙醇6倍量，提取3次，每次1h；精制純化工藝條件：采用AB8型大孔吸附樹脂，以體積分數為70%的乙醇為洗脫溶劑，4倍樹脂體積。結論優選工藝可較好的提取純化人參皂苷有效成分。

【關鍵詞】心舒滴丸；提取工藝；人參皂苷Rg1；人參皂苷Re；大孔吸附樹脂

【中圖分類號】R284.2【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）10-0172-02

心舒滴丸由人參、丹參、冰片等藥物組成，用于冠心病的治療，人參為方中主藥，人參皂苷為其主要活性成分之一，具有明顯的擴張冠狀動脈、增加心肌血流量、提高心肌耐缺氧能力、調節心律和血壓等作用。本文采用高效液相色譜法，以人參皂苷Rg1、Re的含量為指標[1，2]，優選人參最佳提取工藝及大孔吸附樹脂精制工藝條件，為生產提供依據。

1儀器與試藥

DIONEX3000高效液相色譜儀（在線脫氣、自動進樣、光電二極管陣列檢測器、Chromeleon色譜工作站，美國戴安公司）；人參皂苷Rg1對照品（批號：110754-200320，供含量測定用）、人參皂苷Re對照品（批號：110703-200322，供含量測定用）均由中國藥品生物制品檢定所提供；AB8型大孔吸附樹脂（天津南開大學化工廠）、HP20型大孔吸附樹脂（北京綠百葉科技發展有限公司）、D101型大孔吸附樹脂（天津農藥總廠）；甲醇、乙腈（色譜純，美國TEDIA公司）；其它試劑為分析純。

人參為五加科植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根，購自廣州康爾健藥業公司，符合《中國藥典》2005年版一部人參項下要求。

2方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：DIONEXC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈0.05%磷酸（體積比19.8∶80.2）；檢測波長：203nm；流速：1.0mL？min-1；在此條件下，供試品中人參皂苷Rg1與人參皂苷Re及其它組分峰能達到基線分離。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷Rg1對照品0.01070g，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度；精密稱取人參皂苷Re對照品0.01015g，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度；精密量取人參皂苷Rg1對照品溶液2.5mL、人參皂苷Re對照品溶液2mL，置5mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1mL含人參皂苷Rg10.535mg、人參皂苷Re0.406mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3標準曲線的制備

分別精密吸取不同濃度的對照品溶液注入高效液相色譜儀中，以峰面積積分值為縱坐標（Y），以人參皂苷Rg1微克數為橫坐標（X），計算回歸方程Y=262173X-692964，r=0.9997，表明人參皂苷Rg1在5.35～53.5μg范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

以峰面積積分值為縱坐標（Y），以人參皂苷Re微克數為橫坐標（X），計算回歸方程Y=214558X-731757，r=0.9998，表明人參皂苷Re在4.06～40.6μg范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.4優選提取工藝

2.4.1提取溶劑的選擇

人參主要有效成分皂苷類溶于水及乙醇，因此，可用水或乙醇為溶劑提取。首先分別以體積分數為50%和70%的乙醇、水為提取溶劑進行提取，結果顯示以乙醇為溶劑時，人參皂苷Rg1、Re提取率較高。進而采用正交實驗優選人參醇提工藝條件。

2.4.2實驗設計

以人參皂苷Rg1、Re為指標，采用L9（34）正交實驗設計對影響提取效率的因素進行考察。實驗設計見表1。

2.4.3供試品溶液的制備

依照處方分別稱取人參20g，置圓底燒瓶中，按L9（34）實驗列號各條件回流提取，濾過，合并提取液，定容至1000mL，作為樣品溶液。精密吸取樣品溶液各100mL，水浴蒸干，殘渣加水25mL使溶解，移置分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次25mL，棄去氨試液，正丁醇液水浴蒸干，殘渣加甲醇使溶解，并定容至10mL量瓶中，作為供試品溶液。

2.4.4實驗結果

精密吸取供試品溶液、對照品溶液，分別注入液相色譜儀中，測定峰面積，計算人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量。結果見表2、表3。

由實驗結果可知，因素A、D對人參提取效率有顯著性影響，在以人參皂苷Rg1、Re為指標考察的四個因素中，依次排列為D>A>B>C，較優的工藝應為A2B3C2D3，即體積分數為70%乙醇6倍量提取3次，每次1h。

2.5精制工藝考察

按處方稱取人參1000g，按照優選提取工藝條件操作，收集提取液，減壓回收乙醇至無醇味，作為樣品溶液，備用。

2.5.1吸附條件考察

分別量取處理好的AB8型、D101型、HP20型等大孔吸附樹脂各10mL，平行兩份，裝柱，各精密量取樣品溶液200mL通過樹脂柱，以水洗至流出液近無色，收集流出液，定容，再以體積分數為70%乙醇100mL洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，定容，流出液分別取樣，按照“2.4.3”項下制備方法制備供試品溶液，注入液相色譜儀中，測定人參皂苷Rg1、Re的含量。計算大孔吸附樹脂比吸附量、洗脫率，結果顯示AB8型大孔吸附樹脂對人參皂苷Rg1、Re的比吸附量和洗脫率均高于其他樹脂，分別為4mg/mL樹脂和98.3%，故選擇AB8型大孔吸附樹脂。

2.5.2洗脫條件考察

2.5.2.1洗脫溶劑濃度考察

精密量取樣品溶液90mL通過AB8型大孔吸附樹脂柱（10mL樹脂裝柱，內徑1.5cm），樹脂柱水洗至近無色，然后依次用體積分數為30%、50%、70%、90%乙醇各20mL洗脫，分別收集洗脫液，制備供試品溶液，注入液相色譜儀中，測定人參皂苷Rg1、Re的含量。結果顯示，體積分數為70%乙醇的累計洗脫率已達92.59%，故確定洗脫溶劑濃度為70%。

2.5.2.2洗脫溶劑用量考察

精密量取處理后樣品溶液通過樹脂柱，水洗至流出液近無色，量取體積分數為70%乙醇60mL洗脫，分段收集洗脫液，制備供試品溶液，測定人參皂苷Rg1、Re的含量，結果顯示4倍量樹脂體積的洗脫溶劑洗脫率即可達到95.72%，故確定洗脫溶劑用量為4倍樹脂體積。

3討論

3.1大孔吸附樹脂具有物理化學穩定性高、吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長、節省費用等諸多優點，在對總皂苷的粗分離和除去水溶性色素、多糖和無機鹽等雜質顯示出其獨特的效果。本文通過考察影響樹脂吸附的因素，發現藥液濃度對樹脂的吸附有顯著影響，如藥液濃度過低則精制時間增加，效率降低；藥液濃度過高則影響樹脂的吸附，造成吸附量降低。

3.2大孔吸附樹脂可顯著降低總固體得率，使活性成分高度富集，精制前提取液總固體得率為20%，人參皂苷Rg1、Re含量為5.10mg/g；大孔樹脂精制后，其總固體得率為1.5%，人參皂苷Rg1、Re含量為56.88mg/g，同時吸濕性降低，有利于制成現代劑型的中藥，便于質量控制。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2005年版一部[S].北京：化學工業出版社，2005.

[2]蔣海強，何偉，李勇.參連降糖顆粒定性定量研究[J].中南藥學，2005，3（3）：173-175.