紫莖澤蘭揮發油的抗菌活性研究

【摘要】用蒸餾法提取揮發油，用紙片擴散法測定紫莖澤蘭揮發油對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌的抑菌能力，及對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度和生長曲線。根據抑菌圈大小，其對供試的三種菌的抑菌能力由大到小的順序為：金黃色葡萄球菌、白色念珠菌和大腸桿菌。對金黃色葡萄球菌的抑菌濃度為20μl/mL，生長曲線表明其明顯抑制金黃色葡萄球菌對數生長期的菌體分裂。紫莖澤蘭揮發油具有抗菌生物制劑開發前景。

【關鍵詞】紫莖澤蘭；揮發油；抗菌活性

【中圖分類號】R722.12【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）10-0153-01

紫莖澤蘭（EupatoriumadenophorumSpreng），菊科澤蘭屬，紫莖澤蘭提取物對螨蟲、蚜蟲以及米象等倉庫蟲害具有良好的殺滅能力，對黃瓜炭疽病、小麥赤霉病、玉米大斑病和番茄青枯菌等植物病原菌具有良好的抑制作用[1-2]，對動物的病蟲害如馬圓線蟲等也有良好的抑制作用[3]，故我國又進行了植物源農藥的開發研究。然而，國內外對紫莖澤蘭揮發油的研究較少，由于其揮發油成分容易受環境、季節和氣候等因素的影響，抗菌活性大小的研究并未得到一致結果。本研究測定紫莖澤蘭揮發油的抗菌活性，為深度開發利用紫莖澤蘭提供基礎資料。

1.材料

1.1紫莖澤蘭莖葉

采自四川攀枝花，經鑒定確認品種為菊科澤蘭屬紫莖澤蘭

1.2菌種

金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌，由四川省攀枝花市第五人民醫院提供。

1.3藥品

藥敏紙片：青霉素、鏈霉素、兩性霉素B、空白紙片，購于康泰生物，其余為分析純。

1.4培養基

LB液體培養基：蛋白胨5g，肉浸粉5g，NaCl2.5g，水500mL。

瓊脂培養基：蛋白胨10g，肉浸粉10g，NaCl5g，瓊脂20g，水1000mL。

沙堡氏培養基：葡萄糖8g、蛋白胨2g、瓊脂3g，水200ml。

沙氏液體培養基：葡萄糖8g、蛋白胨2g，水200ml。

1.5主要儀器

RE52-2旋轉蒸發儀，SW-CJ-1FD型超凈工作臺，YM-75高壓滅菌鍋，YP1002N分析天平，SHZ-85B臺式恒溫振蕩器，UY-7504單光束紫外-可見分光光度計，直尺。

2.方法

2.1紫莖澤蘭揮發油的制備

提取揮發油，得到具有濃郁的特殊氣味的淡黃色透明油狀物，得油率為0.5%。0.5%的吐溫-80的石油醚陰性對照液溶解。

2.2紙片擴散法測抑菌圈

分別制備金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌菌懸液，將每種菌液濃度調至106cfu/ml，分別把菌液均勻涂在相應的固體瓊脂平板上，細菌37℃/24h，真菌為25℃/48h培養，用直尺測量其抑菌圈。培養活化時間、處理重復數、測定次數、如何測定？

2.3紫莖澤蘭揮發油對金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度測定

將紫莖澤蘭揮發油用液體培養基稀釋成濃度分別80、40、20、10μl/ml的溶液，分別移取10μl菌懸液（菌體濃度為106個/ml），放在培養箱中37℃培養24h，分別取100μl涂板，用文獻[9]方法測定最低抑菌濃度。

2.4紫莖澤蘭揮發油對金黃色葡萄球菌生長曲線的影響

參照文獻方法將培養至對數生長期的金黃色葡萄球菌菌液，按1%的接種量（菌體濃度為106個/mL）分別接種至含100μl/ml紫莖澤蘭揮發油的LB肉湯培養基中，于37℃，150rpm搖床振蕩培養，每4h取樣一次，用分光光度計在540nm下測定OD值，連續測36h（9次），以時間為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制生長曲線。以不加紫莖澤蘭揮發油的菌體培養液作對照。實驗重復3次。

4.結論與討論

紫莖澤蘭莖葉中用水蒸氣蒸餾法提取揮發油得油率相對較低，進一步可采用其它方法如索氏提取法等提高得油率，文獻。紫莖澤蘭揮發油是一個較為廣譜的抗菌藥物。他對金黃色葡萄球菌（G+）、大腸桿菌（G-）和白色念珠菌（真菌）都有作用，其中對金黃色葡萄球菌（G+）的作用較強，其為20μl/mL。紫莖澤蘭揮發油能明顯抑制金黃色葡萄球菌的對數生長，為紫莖澤蘭的深度利用和開發提供理論基礎。

參考文獻

[1]李麗萍，謝響明，宋洪英，等.紫莖澤蘭提取物對番茄青枯菌的抑菌作用及其機理[J].生物技術通報，2010，（7）：146-152

[2]趙平，王榮瓊，楊曉乾等.恒溫條件下紫莖澤蘭花、葉提取液對馬圓線蟲蟲卵的孵化試驗[J].山東畜牧獸醫，2010，31：2-3