論述高效液相色譜法對(duì)注射用硫酸頭孢匹羅含量的測(cè)定

【摘要】近些年來，我國(guó)醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展十分快速，在市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)改革不斷深入的形勢(shì)下，市場(chǎng)對(duì)于藥品的需求量不斷增多，同時(shí)對(duì)于藥品測(cè)定的要求也在不斷提高。我國(guó)人口老齡化趨勢(shì)嚴(yán)重，很多年輕人在快節(jié)奏和高壓力的生活環(huán)境下，其身體健康方面也不容樂觀，在這樣的形勢(shì)下，提高藥品測(cè)定的準(zhǔn)確性，確保藥品安全及其藥效，從而為臨床應(yīng)用提供有力保障。硫酸頭孢匹羅是臨床應(yīng)用中，比較常見的一種藥品，其在抗菌方面療效顯著，本文利用高效液相色譜法對(duì)硫酸頭孢匹羅含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，其測(cè)定數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，操作簡(jiǎn)單，峰值穩(wěn)定，是可以種可靠的測(cè)定方法。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；硫酸頭孢匹羅；含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R927.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2014）10-0252-01

引言

硫酸頭孢匹羅屬于第四代頭孢菌素，其廣譜抗菌活性強(qiáng)，在葡萄球菌、耐青霉素肺炎球菌的治療中，療效顯著。臨床主要用于較為嚴(yán)重的呼吸道感染以及尿道感染和皮軟組織感染中。高效液相色譜發(fā)，又稱為HPLC法，它是以液體作為流動(dòng)相，利用高壓輸液系統(tǒng)對(duì)藥品進(jìn)行測(cè)定一種方法，屬于色譜法的一個(gè)分支。這種方法在眾多領(lǐng)域得以廣泛應(yīng)用，尤其是在藥品測(cè)定領(lǐng)域，因其具有自動(dòng)化水平和分析精度高，操作簡(jiǎn)單方便等優(yōu)點(diǎn)，受到了業(yè)內(nèi)人士的廣泛青睞，文章從幾個(gè)部分對(duì)其測(cè)定實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了詳細(xì)的分析，研究和討論，希望能夠?yàn)槿藗兲峁┮恍椭蛥⒖肌?/p>

一硫酸頭孢匹羅

硫酸頭孢匹羅是德國(guó)赫斯特公司和法國(guó)魯塞爾？尤克拉夫公司聯(lián)合研制，主要用于嚴(yán)重的下呼吸道感染、白細(xì)胞減少病人感染、重癥監(jiān)護(hù)病人的嚴(yán)重感染、敗血癥/菌血癥、皮膚和軟組織感染和復(fù)雜性上、下尿路感染等。它不僅有第3帶頭孢菌素的特征而且與青霉素結(jié)合蛋白親和力高，在細(xì)菌周質(zhì)中維持高濃度，對(duì)染色體和質(zhì)粒介導(dǎo)的β內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定且親和力低，對(duì)冬蟲耐藥菌有效，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌均有高度抗菌活性。不僅具有抗需氧的革蘭陰性菌活性，有具有強(qiáng)大的抗厭氧菌活性。對(duì)引起腦膜炎的細(xì)菌均有良好的抗菌活性，且對(duì)血腦屏障的穿透力比其他的廣譜抗菌素強(qiáng)，是藥代動(dòng)力學(xué)優(yōu)良的長(zhǎng)效藥物。

二實(shí)驗(yàn)部分

進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的之前，工作人員需要將實(shí)驗(yàn)所需要的儀器，設(shè)備，藥品以及各種相關(guān)設(shè)施都準(zhǔn)備齊全，做好消毒處理，保障試驗(yàn)過程中無(wú)干擾情況發(fā)生，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，其具體做法如下：

1、儀器和試藥

Agilent1100高效液相色譜儀，G1314紫外檢測(cè)器。注射用硫酸頭孢匹羅由哈藥集團(tuán)制藥總廠研究所提供（批號(hào)：070903，070904，070905）；硫酸頭孢匹羅對(duì)照品由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。乙腈為色譜純；枸櫞酸、磷酸氫二鈉、均為分析純；水為重蒸水。

2、方法與結(jié)果

2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取硫酸頭孢匹羅對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并制成每1mL約含硫酸頭孢匹羅50μg的溶液，在200nm～350nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在260nm～270nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)吸收值較大，確定265nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱：依利特HypersilODS2色譜柱（5μm，4.6mm×200mm）；乙腈-pH3.6磷酸鹽緩沖液（稱取枸櫞酸1.42g、磷酸氫二鈉4.36g加水溶解并稀釋至1000mL）（12：88）為流動(dòng)相，流速1.0mL？min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)265nm；進(jìn)樣量：20μL。定量方法：外標(biāo)法。樣品溶液測(cè)定色譜圖中，理論塔板數(shù)按硫酸頭孢匹羅峰計(jì)算為7150。

3.線性關(guān)系精密稱定硫酸頭孢匹羅對(duì)照品1568mg，置25mL容量瓶中，加流動(dòng)相使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取此溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0，10.0mL，分別置50mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜條件，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以對(duì)照品濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A=48.00C+26.15，r=0.9999。結(jié)果表明：在12.5μg？mL-1～125g？mL-1的濃度范圍內(nèi)，硫酸頭孢匹羅的濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系。精密度試驗(yàn)在上述色譜條件下，取上述線性項(xiàng)下50.18μg？mL-1的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定峰面積，結(jié)果證明精密度試驗(yàn)良好，RSD為0.098%（n=6）。

4.回收率試驗(yàn)取硫酸頭孢匹羅對(duì)照品九份，精密稱定，按處方加入輔料，用流動(dòng)相溶解并制成高、中、低3種不同濃度的溶液（約40μg？mL-1、50μg？mL-11、60μg？mL-1）各3份，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。測(cè)定結(jié)果在各濃度下的回收率都比較高，平均回收為99.87%，n=9說明該方法的準(zhǔn)確度高，方法可行。

5.溶液穩(wěn)定性在上述色譜條件下，取“含量測(cè)定”項(xiàng)下的供試品溶液（070903），在0、1、2、3、4、6h分別進(jìn)樣，記錄峰面積，硫酸頭孢匹羅峰面積的RSD分別為0.42%（n=6），說明該供試品在6h內(nèi)穩(wěn)定。

6.系統(tǒng)耐受性試驗(yàn)

6.1在上述色譜條件下，分別用依利特HypersilODS2（5μm，4.6mm×200mm）及迪馬DikmaTechDiamonsil（鉆石）C18（5μm，4.6mm×200mm）兩根不同的色譜柱，取“含量測(cè)

定”項(xiàng)下的供試品溶液分別進(jìn)樣，進(jìn)行測(cè)定，色譜峰峰型、保留時(shí)間與理論塔板數(shù)均無(wú)明顯表化，說明本法耐用性良好。

6.2調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值為3.4、3.8，取“含量測(cè)定”項(xiàng)下的供試品溶液（070903）進(jìn)樣，進(jìn)行測(cè)定，色譜峰峰型、保留時(shí)間與理論塔板數(shù)也均無(wú)明顯變化，說明3.6為合適的流動(dòng)相pH

值。

7.進(jìn)行硫酸匹羅含量的測(cè)定的過程中，工作人員首先要將對(duì)照品與注射用的硫酸匹羅進(jìn)行精密稱定，數(shù)量為14毫克，然后將其分別放置在容積為25毫升的量瓶中，隨后加入流動(dòng)相對(duì)其進(jìn)行稀釋直到目標(biāo)刻度，并進(jìn)行搖動(dòng)，使其均勻。再次分取兩種溶液5.0毫升，放入容積為50毫升的量瓶中，如上所述進(jìn)行稀釋和搖勻。分別作為供試品溶液和對(duì)照品溶液，按上述選定的色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。批號(hào)為070903，070904，070905的3批樣品含量測(cè)定結(jié)果分別為76.2%、75.9%、76.3%。

三結(jié)果與討論

本次使用了高效液色相鋪法對(duì)硫酸頭孢匹羅含量進(jìn)行了測(cè)量，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，此方法測(cè)定數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，操作性以及重現(xiàn)性方面，都具有明顯優(yōu)勢(shì)。適用于硫酸匹羅的含量測(cè)定。如果與使用磷酸二氫銨.乙腈作為流動(dòng)相的方法相比較，本辦法無(wú)論是在色譜峰峰值方面還是在塔板數(shù)方面都有明顯的改善。為了能夠確保測(cè)定數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，為臨床應(yīng)用提供最為科學(xué)的依據(jù)，合理的選用測(cè)定方法，是非常關(guān)鍵的，在醫(yī)藥測(cè)定制度不斷改革和完善的過程中，高效液色相譜法的應(yīng)用范圍也必將更加廣泛，嚴(yán)格按照步驟和規(guī)范進(jìn)行操作，才能夠發(fā)揮其作用，為醫(yī)藥領(lǐng)域做出更多貢獻(xiàn)。

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