生津降糖顆粒提取最佳工藝分析

【摘要】目的：研究生津降糖顆粒提取工藝的最佳條件。方法：以葛根素含量、正丁醇浸出物分別作為醇提工藝和水提工藝的考察指標，采用L9（34）正交設計優選提取工藝。結果：醇提的最佳工藝為加6倍量φ=70%乙醇浸漬1h后，加熱回流2次，第1次2h，第2次1h，水提的最佳工藝為加6倍量的水煎煮2次，每次2h。結論：該提取工藝穩定、可行。

【關鍵詞】生津降糖顆粒；葛根素；正交試驗；提取工藝

【中圖分類號】R284【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）10-0633-02

生津降糖顆粒是由葛根、人參、麥冬、玄參、山藥等中藥組成的中藥復方制劑，為臨床經驗方。具有益氣生津、滋陰養腎之功效。主要用于糖尿病氣陰兩虛所導致的倦怠乏力、自汗盜汗、氣短懶言、口渴喜飲、形體消瘦、五心煩熱、心悸失眠、溲赤便秘等癥。方中葛根、人參、麥冬、玄參、山藥經現代藥理研究表明，具有明確的降血糖作用，為治糖尿病主要的藥物。其中，人參主要降血糖有效成分為人參多糖、人參皂苷，人參多肽及一些人參非皂苷部分；葛根為黃酮類葛根素、葛根苷、大豆苷等。許多成分在醇中溶解性好，水中溶解性差。麥冬、玄參、山藥降血糖主要有效部位在水提部分。為使該方更好的發揮療效，最大限度地保留有效成分，我們對生津降糖顆粒進行了醇水雙提法工藝研究，將葛根、人參兩味藥材先用乙醇回流提取，藥渣與麥冬、玄參、山藥等合并用水煎煮提取，并對提取工藝進行了正交設計，以葛根素為醇提工藝的考察指標，正丁醇浸出物為水提工藝的考察指標，確定了最佳提取工藝條件。

1儀器與試藥

1.1儀器

高效液相色譜儀（日本島津）；檢測器SPD-10A型；數據處理機（SHIMADZUC-R7A型）。

1.2試劑與藥材

藥材均購于廣州市藥材公司，經鑒定符合中國藥典2000年版一部與部頒標準，實驗前各藥材均粉碎成粗粉（40目）；葛根素對照品（批號752-200108）由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純，實驗用水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1提取工藝路線的設計

方中君藥葛根主含葛根素，人參主含人參皂苷，可用乙醇提取，尚含多糖、人參多肽及一些人參非皂苷部分，可用水提取。麥冬、玄參、山藥等含有機酸、蒽醌類成分，可用水提取。故采用醇水雙提法進行提取。

2.2葛根、人參乙醇提取工藝條件優選

2.2.1正交試驗設計

選擇影響醇提效果主要因素：乙醇濃度、乙醇用量、回流時間次數、浸漬時間為考察對象，選用L9（34）正交表安排試驗，見表1。

按表1設計的工藝條件，以處方比例稱取葛根、人參共90g，浸漬后回流提取，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10（50℃），即為醇提液。

2.2.2考察指標的確定

葛根、人參等藥材，原方水煎服有效，說明其降血糖有效成分對熱較穩定，故可采用回流法提取。葛根為方中君藥，葛根素為方中降血糖主要有效成分之一，故選擇葛根素含量為考察指標。

2.2.3葛根素的含量測定

2.2.3.1色譜條件

色譜柱：HPODSHypersil柱（4.0mm×25cm，5μm）；流動相：ψ（甲醇∶水）=23.5∶76.5；流速0.8mL/min；柱溫：35℃；檢測波長254nm，理論塔板數以葛根素計，不得低于3000。

2.2.3.2標準曲線

準確稱取葛根素對照品適量，用甲醇溶解，配成50μg/mL的對照品溶液。精密吸取對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，按“2.2.3.1”項下條件測定。以峰面積為縱坐標，質量濃度為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為：Y=2.2178×10-4ρ-9.5223×10-3（r=0.9996），ρ在0.1～05μg/mL范圍內，線性關系良好。

2.2.3.3樣品測定

精密吸取“2.2.1”項下醇提液2mL，水浴加熱蒸干，加甲醇溶解并定容于20mL容量瓶中，用100Syringe濾過器（0.2μm）過濾，為供試品溶液。精密吸取各供試品溶液、對照品溶液5μL分別進樣，按“2.2.3.1”項下條件測定，結果見表2。方差分析見表3。

2.2.4結果分析

從表2可以看出，因素A，C有極顯著性，A2>A3>A1，C2>C3>C1，應取A2C2，因素B有顯著性，B2>B3>B1，應取B2。因素D為次要因素，根據有利于生產原則，選D1，那么最佳提取工藝條件為A2B2C2D1，加6倍量70%乙醇浸漬1h后，加熱回流2次，第1次2h，第2次1h，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1.10（50℃）。按上述優化條件進行重復3次提取，葛根素平均提取率（ω）為1.36mg/g。

2.3葛根、人參醇提后的藥渣與其他藥材水提取工藝條件優選

2.3.1正交試驗設計

選擇影響水提效果的主要因素：加水倍數、煎煮時間、浸漬次數、浸漬時間為考察對象，選用L9（34）正交表進行試驗，見表4。

按表4設計的工藝條件，以處方比例稱取葛根、人參等藥材共280g，葛根、人參按“2.1”中最佳工藝提取后，藥渣與其他藥材合并浸漬后用水提取，濾過，合并濾液并濃縮至相對密度為1.10（50℃），即為水提液。

2.3.2考察指標的確定

葛根、人參醇提后再與其他藥材用水提取，符合中醫用藥復方配伍，發揮整體協同作用的觀點。方中各藥材主要含皂苷、黃酮苷、有機酸、蒽醌類等成分，故選用正丁醇浸出物得率為考察指標。

2.3.3正丁醇浸出物得率測定

精密吸取按正交表設計提取的各組藥樣2mL，置具塞錐形瓶中，水浴揮干后，加入20mL正丁醇，密塞，超聲處理2次，每次5min，濾過，合并濾液，置已干燥至恒重的蒸發皿中，低溫蒸干。于105℃干燥至恒重，置干燥器中，放冷后稱重，計算正丁醇浸出物得率。結果見表5，方差分析見表6。表5水提正交試驗表及結果（略）

2.3.4結果分析，從表6可以看出，因素C有極顯著性，C2>C3>C1，應取C2，因素A、B有顯著性，A2>A1>A3，B2>B3>B1，應取A2B2，D為次要因素，根據有利于生產原則選D1。水提最佳工藝條件為A2B2C2D1，即葛根等醇提后的藥渣與其他諸藥混合，加6倍量的水煎煮2次，每次2h。按上述優化條件進行重復3次提取，平均正丁醇浸出物得率（ω）為3.23g/g。

2.4優選提取工藝條件重復性試驗

為進一步考察上述優選工藝的穩定性，按上述優化條件進行重復3次中試。結果見表7，所得浸膏平均收率（ω）為1378%，葛根素的提取率（ω）均在70%以上。表7生津降糖顆粒提取工藝條件重復性試驗（略）

3討論

本實驗通過正交法對生津降糖顆粒的提取工藝進行優選，按最佳工藝進行重復性實驗。葛根素含量高，浸膏收得率高，制備工藝路線設計合理，工藝條件基本符合工廠生產要求，易于操作，成品、半成品質量可控，有利于成品的質量穩定，為進一步開發提供了依據。

參考文獻

[1]譚生建，汪海東，邱夏.RP-HPLC測肺生片葛根素含量[J].中成藥，1997，19（5）：53.

[2]冉曉靜，閆洪軍.高效液相色譜法測定葛根素注射液中葛根素的含量[J].藥物分析雜志，1998，18（6）：400.