化濁抑潰安腸湯對潰瘍性結腸炎大鼠結腸粘膜環氧合酶—2（Cox—2）表達的影響

COX-2在正常的腸粘膜組織及緩解期潰瘍性結腸炎（UC）中幾乎不表達，而在活動性UC中表達增強。本實驗通過潰瘍性結腸炎大鼠結腸粘膜中COX-2的表達，探討化濁抑潰安腸湯治療UC的機制，為該方在臨床應用提供理論基礎。

材料與方法

1 材料

①實驗動物 SD大鼠60只，雌雄各半，體重220g+20g，購自河北醫科大學動物中心（動物合格證號：804048）。

② 藥物與試劑 陽性對照藥物柳氮磺嘧啶（SASP）：上海三維制藥有限公司生產，批號：2012015。成人用量每日3g，成人體重以60Kg計算，約0.05g/Kg，大鼠取10倍成人用量即0.5g/Kg，用蒸餾水配成50g/L，大鼠灌胃給藥體積為10ml/Kg。

化濁抑潰安腸湯為中藥復方，由白頭翁、黃連、白術、茯苓、葛根、秦皮、苦參、地榆、廣木香、薏米、當歸、白芍、甘草等中藥組成，按組方稱取藥材，加水煎煮2次，合并濾液，水浴濃縮至2g生藥/mL藥液。以成人體重60Kg計算，劑量為0.92g/Kg，大鼠低、中、高劑量按成人用量的5、10、20倍計算，即4.6g、9.2g、18.4g/Kg，藥物用蒸餾水配成460g、920g、1840g/L，大鼠灌胃給藥體積為l0ml/Kg。

山羊抗大鼠COX-2抗體，SP染色試劑盒，購自北京中彬金橋生物技術有限公司。

③動物模型制備除正常組外，其余各組大鼠造模前禁食不禁水48小時，以氯氨酮腹腔注射麻醉，用外徑為2mm的硅膠管插入鼠肛內約8cm，經管內注入5%2、4、6-三硝基苯磺酸水溶液0.4ml（100mg/Kg）+50%乙醇0.25ml，約10秒灌注完畢。

④ 動物分組及給藥方法造模成功后第三天，模型動物分為模型組，化濁抑潰安腸湯低、中、高劑量組及SASP組，并按上述劑量給藥，模型組給等體積蒸餾水，每天一次，連續20天。設正常對照組，不造模、不灌胃，正常喂養；

⑤標本制備 第21天，處死大鼠取血4ml，血液標本離心后送檢。同時剖腹，留取結腸標本，用免疫組織化學染色方法檢測Cox-2的表達情況。

2 統計方法

計量資料采用t檢驗，計數資料采用X2分割檢驗，采用SPSS13.0 統計軟件分析，以α<0.003作為有統計學意義的判定標準。

3 觀察指標

采用過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素染色法，按試劑盒說明進行SP染色，以PBS代替一抗作為陰性對照。

結果判定：Cox-2蛋白陽性染色為胞漿內出現棕黃色顆粒。Cox-2染色陽性計數按照HarsturK等的評判標準進行，高倍鏡下取10個不同視野各計數1000個細胞的陽性細胞數，計算陽性細胞所占的百分率并取均值，陰性表達<10%，陽性表達>10%。

4 結果 在正常組中Cox-2陽性表達率極低為25.00%，在模型組陽性表達率高達80.00%，經過藥物干預后發現，化濁抑潰安腸湯中、高劑量組的陽性表達率與模型組比較顯著降低，陽性率分別為34.38%和33.33%，SASP組陽性率為32.26%，與模型組比較顯著降低，有統計學意義（p<0.003）；化濁抑潰安腸湯組與SASP組的陽性表達率沒有明顯差異（p>0.003），（見table1）。

5討論

COX-2 是一種多見于核膜的誘導性酶，主要出現在病理狀態下，尤其多見于炎癥細胞中。正常情況下，組織中呈陰性表達，在 UC 活動期患者結腸粘膜中顯著升高，并且 COX-2 表達與潰瘍性結腸炎的病情嚴重程度呈正相關。本實驗表明中藥各劑量組和SASP組的大鼠結腸粘膜中COX- 2表達明顯低于模型組。由此可見，化濁抑潰安腸湯同SASP一樣是通過抑制COX- 2在腸粘膜中的表達，從而抑制或減輕炎癥，促進潰瘍愈合的。

參考文獻

[1]李瑞東.化濁抑潰安腸湯對潰瘍性結腸炎大鼠血清NO、TNF-α含量及IL-6活性的影響.《中成藥》2009，06，31（6）：934-935

[2] 師永盛，霍麗娟，安麗婷.潰瘍性結腸炎患者結腸黏膜 COX-2 和 TNF-α的表達及其意義[J].山西醫科大學學報.2011，42（4）：327-329；