尿液視黃醇結合蛋白的檢測在腎臟疾病的臨床意義

【摘要】 目的 探討尿液視黃醇結合蛋白（UrRBP）了解腎臟病患者腎小管功能是否有損害以及其在腎臟病診斷中的價值。 方法 應用ELISA法對正常對照組和不同腎臟病組進行UrRBP測定。 結果 腎臟病組與正常對照組之間差異顯著，P<0.01，各腎臟病組之間比較差異有統計學意義，P<0.01。 結論 通過對UrRBP的測定，發現其結果與腎小管損害程度間存在一定的聯系，也說明在臨床早期進行UrRBP檢測的必要性。

【關鍵詞】 視黃醇結合蛋白；酶聯免疫吸附試驗；腎臟疾病

視黃醇結合蛋白（Retinol binding protein，RBP）為血漿中一種分子量蛋白質，分子質量為21200，由于其分子量較小，可經腎小球自由濾過，并由腎近端小管重吸收。當腎近端小管受損害時，尿液視黃醇結合蛋白濃度（UrRBP）會明顯增高，我們應用ELISA法對UrRBP進行檢測，判斷其在腎臟病中腎小管功能是否有損害程度以及其在腎臟病診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 對象選擇 正常對照組，健康成年40例，男性25例，女性15例，平均年齡27.9歲。通過該組UrRBP的檢測來建立UrRBP的正常值，同時也與腎臟病組進行比較對照。腎臟病患者選自我院腎臟科住院患者，依其臨床診斷分為急性腎功能衰竭（ARF）組35例，男性20例，女性15例，平均年齡43.1歲；慢性腎功能衰竭（CRF）組40例，男性25例，女性15例，平均年齡42.5歲；慢性腎小球腎炎（CGN）組40例，男性21例，女性19例，平均年齡37.3歲IgA腎病（IgAN）組40例，男性28例，女性12例，平均年齡28.6歲；腎病綜合征（NS）組40例，男性25例，女性15例，平均年齡33.2歲；狼瘡性腎炎（LN）組40例，男性8例，女性32例，平均年齡32.0歲；過敏性紫癜（HSP）組24例，男性14例，女性10例，平均年齡27.0歲；糖尿病腎病（DN）組24例，男性15例，女性9例，平均年齡55.2歲。所有尿標本均為留取的隨機尿標本。（尿液標本也可先冷藏于-70°檢測時取出不受影響[1]。

1.2 ELISA檢測步驟 UrRBP的ELI SA檢測試劑盒購自北京北方生物技術有限公司。檢測前應將尿液標本混勻并短暫高速離心，取其上清進行檢測，按照試劑盒說明和在預實驗的基礎上，將待檢尿標本分別按1：50，1：500，1：000，1：2000進行稀釋，試劑盒內的標準品按照說明進行稀釋。將稀釋好的標準品和待檢樣本加入酶標微孔內，37°溫育最適時間為90-120min，酶標單抗溫育時間為60min，OPD顯色時應隨時觀察并適時終止反應，于酶標儀（RAT600型）490nm測吸光度，比較波長為630nm，根據標準品曲線所得公式計算各待測樣本稀釋所對應的RBP濃度。

1.3 正常值建立 對40名健康成人的檢測結果進行分析，在預實驗的基礎上選擇對其在1：50稀釋度的結果用幾何均數法求其平均值及標準差，按95%單側可信度求得UrRBP的正常值上限濃度為0.5mg/L，擬定大于此值者為異常，即可反映腎近端小管的功能受損。

1.4 統計學處理 各組間的比較行配伍間X2檢驗。

2 結 果

不同腎臟疾病組的UrRBP測定結果與正常組比較見表1。

各腎臟病組與正常對照組比較，差異非常顯著（P<0.01）；在各型腎臟病組間以IgAN組的UrRBP的異常例數所占該組總例數的百分數小（25%），與其它腎臟病組相比較差異有統計學意義（P<0.01）；而ARF，CRF組UrRBP異常例數所占本組總例數的百分數最高，分別為82.86%和87.75%。與其它各組相比較差異有統計學意義（P<0.01）。

3 討 論

本研究由于所選患者，在診斷上相互間可能存在一定程度的交叉。所以，UrRBP異常較難判斷對某一腎臟病的意義。但本結果至少可以說明在腎臟病中開展UrRBP臨床檢測是必要的。各腎病組與正常對照組比較，發現UrRBP結果和腎小管的損害程度間存在著一定的聯系，同時也說明早期進行UrRBP檢測的必要性，在亞臨床期就有可能發現一些潛在的病變。視黃醇結合蛋白是由肝臟合成的低分子量蛋白質，并主要在腎臟中進行代謝；在血漿中主要以結合形式存在，與前白蛋白和維生素A結合成三體復合物，參與維生素A的轉運，也有一部分與一種名為transthyretin的轉運T4的蛋白質結合，同時也有一部分游離形式的RBP存在[2]，正常生理狀況下血漿里游離形式的RBP可自由濾過腎小球，約99.97%被腎近端小管重吸收。當腎小管繼發于腎小球病變后而受累或由于化學試劑、氨基甙類抗生素、化工重金屬等直接損害腎小管的因素作用下，腎小管功能發生改變，導致其重吸收功能降低，以致UrRBP的濃度水平出現異常[3-4]。我們認為有必要進一步深入探索UrRBP在腎病診療及預后中的價值。

參考文獻

[1] Mao J.Frozen storage of urine sample before ELISA measurement of retinol binding protein [J]ClinChem，1996，42（3）：466-467.

[2] Goodman D S.Plasma retinol binding protein [J].Ann N Y Acad Sci，1980，348：378-390.

[3] Lybarger J A，Lichtveld M Y，Amler R W.Biomedical of the kidney for persons exposed to hazardous substances the environment [J].Een，Fail，1999，21（3）：263-274.

[4] Lapsley M.Sensitive assays for urinary Retinol binding protein and beta2 glycoprotein 1 based on commercially available standards [J].Ann Chin Biochem，1998，35（pt 1）：115-119.