食物中毒樣品中金黃色葡萄球菌及腸毒素檢測(cè)分析

【摘要】 目的 分析食物中毒樣品中金黃色葡萄球菌及腸毒素的檢測(cè)方法。 方法 選取40種可疑食物中毒樣品作為研究分析對(duì)象行相應(yīng)的致病菌檢測(cè)。 結(jié)果 凍魚片及鹽漬魚片的金葡菌腸毒素檢出率最高，分別為89.1%和78.5%（P<0.05），RPIA法檢測(cè)金葡菌腸毒素的整體效率優(yōu)于ELFA法，但檢測(cè)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。 結(jié)論 加強(qiáng)金葡菌致病機(jī)理的研究，對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)方法進(jìn)行改良，才可有效提高SE的檢測(cè)效率。

【關(guān)鍵詞】 金黃色葡萄球菌；腸毒素；食物中毒；檢測(cè)

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.03.705 文章編號(hào)：1004-7484（2014）-03-1746-02

金黃色葡萄球菌，簡(jiǎn)稱金葡菌，普遍存在于自然界的空氣、塵埃及人及動(dòng)物的糞便中，是人畜生病的重要致病菌，同時(shí)也是導(dǎo)致食物中毒的重要病菌[1]。相關(guān)研究數(shù)據(jù)表明，有32%左右的金葡菌存在于各類食品中，且在一定條件下，其可產(chǎn)生大量繁殖活動(dòng)，進(jìn)而產(chǎn)生腸毒素[2]。腸毒素（SE）為金葡菌的主要毒素之一，可引起嚴(yán)重的食物中毒。因此，對(duì)金葡菌及SE進(jìn)行相應(yīng)的檢測(cè)分析，對(duì)食物中毒事件的處理、預(yù)防具有重要意義和價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 流行病學(xué)調(diào)查 2013年長(zhǎng)春市一餐廳出現(xiàn)數(shù)十人食物中毒事件。用餐后顧客均出現(xiàn)不同程度的腹痛、惡心、嘔吐等癥狀。經(jīng)過流行病學(xué)調(diào)查，該事故被定為一起由金葡菌引起的食物中毒事件。

1.2 樣品來源 食物中毒樣品選取長(zhǎng)春市疾病預(yù)防控制中心送檢的可疑食物進(jìn)行腸毒素檢測(cè)。分別為凍魚片、鹽漬魚片等。標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)菌分別為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希氏等。

1.3 儀器設(shè)備 實(shí)驗(yàn)設(shè)備主要選用微型自動(dòng)熒光酶標(biāo)免疫分析儀、凝膠成像系統(tǒng)、多參數(shù)免疫分析儀等。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 酶聯(lián)熒光免疫分析法（ELFA） 將血漿凝固酶呈陽性顯示的菌株置入36±l℃的營(yíng)養(yǎng)湯進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)持續(xù)時(shí)間為24h，同時(shí)嚴(yán)格按照mini-VIDAS的操作規(guī)范，通過全自動(dòng)酶標(biāo)免疫測(cè)試系統(tǒng)行ELFA技術(shù)檢測(cè)，對(duì)腸毒素的強(qiáng)弱變化規(guī)律及程度進(jìn)行測(cè)定。

1.4.2 反向被動(dòng)乳膠凝集法（RPIA） 葡萄球菌腸毒素免疫血清經(jīng)純化出路之后與聚苯乙烯乳膠顆粒相互結(jié)合，當(dāng)一定量的腸毒存在于素乳膠顆粒中時(shí)，該顆粒會(huì)發(fā)生相應(yīng)的凝集反應(yīng)，發(fā)生陰性質(zhì)控。使用該種檢測(cè)方法進(jìn)行于V型微孔板之中，首先在5排V型微孔板中對(duì)對(duì)食品抽提物或菌落濾液進(jìn)行相應(yīng)的稀釋處理，然后取適量的乳膠懸液摻入各V型板，并保證板中液體均勻混合。當(dāng)液體中存在金葡菌腸毒素時(shí)，微孔板中的液體將會(huì)發(fā)生凝集反應(yīng)，顯現(xiàn)出相應(yīng)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，然后發(fā)生擴(kuò)散，使微孔液體底層出現(xiàn)一層沉積物。

1.4.3 熒光PCR檢測(cè)法 熒光PCR檢測(cè)法通過利用PCR反應(yīng)對(duì)核酸進(jìn)行高效和擴(kuò)增，并在反應(yīng)過程中將SYBR Green I熒光染料合理引入，通過對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)表現(xiàn)出來的熒光信號(hào)的檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量、定性進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 金葡菌的檢測(cè)情況 在接受檢測(cè)的樣品食物中，凍魚片及鹽漬魚片的金葡菌腸毒素檢出率最高，分別為89.1%和78.5%（P<0.05），而部分食物樣品的金葡菌腸毒素檢出率為0。

2.2 兩種檢測(cè)方法的比較 RPIA法檢測(cè)金葡菌腸毒素的整體效率優(yōu)于ELFA法，但檢測(cè)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，見表1。

2.3 熒光PCR法與ELISA法比較 與ELISA法相比，熒光PCR法的靈敏度為100%，特異度為97.9%，見表2。

熒光PCR法靈敏度：陽性符合率=A/（A+B）×100%=95/（95+0）×100%=100%；熒光PCR法特異度：陰性符合率=D/（C+D）×100%=94/（2+94）×100%=97.9%。

3 討 論

金葡菌腸毒素是目前被檢測(cè)出的導(dǎo)致食物中毒的最主要病菌之一，嚴(yán)重威脅人體健康狀況，其檢測(cè)方式的研究備受世界衛(wèi)生組織關(guān)注。金葡菌引發(fā)的食物中毒事件一般發(fā)生于人體進(jìn)食2-5h后[3]。發(fā)病癥狀主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等。患者中毒后往往因大量吐瀉而出現(xiàn)虛脫、失水、肌肉痙攣等嚴(yán)重病癥。部分中毒者還同時(shí)伴有不同程度的肢體麻木、頭暈、發(fā)熱、盜汗等癥狀。金葡菌引起的食物中毒發(fā)病急、病癥復(fù)雜嚴(yán)重，嚴(yán)重威脅人體健康。

目前，由金葡菌引發(fā)的食物中毒在診斷方面，主要是以人體進(jìn)食的疑似中毒食品、集體發(fā)病規(guī)模、發(fā)病癥狀及癥狀嚴(yán)重程度等對(duì)中毒事件進(jìn)行初步診斷。在處理食物中毒事件的中，往往會(huì)遇到疑似有毒標(biāo)本無法檢測(cè)出相應(yīng)的致病菌的情況。這是因?yàn)椴糠纸鹌暇谑称分邪l(fā)生繁殖后形成腸毒素，但往往在食品的相應(yīng)貯存處理中被殺滅。而腸毒素是一種耐熱性極強(qiáng)的病菌，其同時(shí)也具有極強(qiáng)的活性，如人體食入此類食物便有可能出現(xiàn)食物中毒。在葡萄球菌腸毒素的檢測(cè)方法中，目前應(yīng)用得較為普遍的是動(dòng)物試驗(yàn)法、血清學(xué)試驗(yàn)法及酶聯(lián)熒光免疫分析法（ELFA）和反向被動(dòng)乳膠凝集法（RPIA）等，RPIA法檢測(cè)金葡菌腸毒素的效率優(yōu)于ELFA法，但時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，如對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的離心重力加速度改變可有效提高檢測(cè)時(shí)間。如利用磁性顆粒、磁力來提高乳膠顆粒沉降的速度，RPIA法檢測(cè)葡萄球菌腸毒素將具有更好的效果。ELFA法檢測(cè)葡萄球菌腸毒素的優(yōu)點(diǎn)在于快速、方便、靈敏、準(zhǔn)確且自動(dòng)化操作程度相對(duì)較高，但目前所用VIDAS檢測(cè)金葡菌還不能實(shí)現(xiàn)分型操作，具有一定局限性。熒光PCR檢測(cè)方法有效克服了常規(guī)PCR凝膠電泳檢測(cè)的缺陷，如易污染、假陽性率高等。其具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、自動(dòng)化操作程度高等優(yōu)點(diǎn)，在腸毒素檢測(cè)過程中可有效實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)檢測(cè)，是快速檢測(cè)腸毒素的重要工具。

綜上所述，金葡菌存在普遍，是院內(nèi)感染及食物中毒的主要病菌之一，致病力強(qiáng)，對(duì)人體健康危害大。因此需加強(qiáng)金葡菌致病機(jī)理的研究，并研制科學(xué)有效的快速檢測(cè)方法，提高SE的檢測(cè)效率，才能有效實(shí)現(xiàn)及時(shí)對(duì)食物中毒事件進(jìn)行診斷、治療及預(yù)防。

參考文獻(xiàn)

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