穿心蓮藥材貯藏期有效成分穩定性考察

摘要：目的 考察穿心蓮藥材貯藏期內穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量的動態變化。方法 采用高效液相色譜法，分別考察0、3、6、9、12、15、18個月貯藏期的穿心蓮藥材中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量。結果 隨貯藏期的延長，穿心蓮內酯呈遞減趨勢，而脫水穿心蓮內酯有升高趨勢。結論 穿心蓮藥材在0～12個月貯藏期內，穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量變化相對明顯，在12～18個月內，穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量趨于穩定。

關鍵詞：穿心蓮 貯藏期 穿心蓮內酯 脫水穿心蓮內酯

穿心蓮內酯（Andrographolide）和脫水穿心蓮內酯（Dehydroandrographolide）是傳統中藥穿心蓮的主要活性成分，二者因化學結構相近，在藥理活性如解熱、抗菌消炎、抗病毒等方面有很多相似之處。但二者又不完全相同，一方面[1]表現在體外藥理活性，如抗腫瘤 （穿心蓮內酯有抗腫瘤活性，脫水穿心蓮內酯無抗腫瘤活性）、抗炎能力的強弱（脫水穿心蓮內酯抗炎活性強，穿心蓮內酯抗炎活性弱）；另一方面表現在生物利用度方面，如穿心蓮內酯靜注或灌胃給藥， 在動物體內達峰快， 半衰期長，生物利用度高[2] ，而脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯單鉀鹽口服給藥其生物利用度極低，測不到血藥[3]。本文考察了穿心蓮藥材在貯藏過程中，其內部活性成分穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的動態含量變化，以期為臨床用藥和質量控制提供科學依據。

1儀器與試劑

Agilent 1200高效液相色譜儀；Sartorius 十萬分之一電子天平；甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純；穿心蓮內酯（110797-200307）及脫水穿心蓮內酯對照品（110854-200306）由中國藥品生物制品檢定所提供；穿心蓮藥材來源于廣東湛江遂溪穿心蓮基地，經鑒定為為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata （Burm.f_）Nees。

2方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamsonsil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm， 5μm），甲醇一水（60：40）為流動相，流速1.0 mL/min，柱溫25℃；檢測波長：225.8nm（用于檢測穿心蓮內酯），254.8 nm （用于檢測脫水穿心蓮內酯） ；進樣量10μl；理論塔板數按穿心蓮內酯計算應不低于3000。穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的保留時間分別為5.8min和14.5 min，并且與其他組分分離良好。對照品和樣品的高效液相色譜圖見圖1。

2.2 線性關系考察 精密稱取穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對照品適量，加甲醇溶解并定容至25ml，分別制備成濃度為1.02mg/ml和0.98 mg/ml的對照品儲備液。分別精密吸取上述對照品儲備液各50、100、200、400、800、1600μl加甲醇定容至10ml，得穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對照品的系列標準液。依選定的色譜條件，分別吸取10μl進樣測定，以峰面積（A）對進樣量（X）進行線性回歸，回歸方程分別為：穿心蓮內酯，A=1377.67 X一8.1167，r=0.9999，線性范圍為0.051μg～1.632μg；脫水穿心蓮內酯，A=598.67 X+2.079，r=0.9999，線性范圍為0.049μg～1.568μg。

2.3 對照品的制備 分別精密吸取上述對照品儲備液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，得穿心蓮內酯對照品0.102mg/ml，脫水穿心蓮內酯對照品0.098mg/ml，備用。

2.4 樣品的制備 參考2010版藥典[4]方法，取穿心蓮藥材粉末（過四號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40%甲醇25ml，稱定重量，浸泡1h，超聲處理（25W，頻率33kHz）30min，放冷，再稱定重量，用40%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液10ml，置中性氧化鋁柱（200～300目，5g，內徑為1.5cm）上，用甲醇15ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.5 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液10μl，重復進樣6次，穿心蓮內酯的RSD=0.85% ，脫水穿心蓮內酯的RSD=0.93% 。

2.6 穩定性試驗 精密吸取樣品溶液10μl，分別于0，2，4，8，12，24h進行測定，穿心蓮內酯的RSD=1.08% ，脫水穿心蓮內酯的RSD=0.76% 。結果表明樣品溶液放置24h內穩定。

2.7 重復性試驗 取同批次穿心蓮藥材樣品6份，按2.3項下操作，進樣10 μl，測定峰面積，結果穿心蓮內酯的RSD=2.89% ，脫水穿心蓮內酯的RSD=2.57% 。

2.8 回收率試驗 精密稱取6份同一已知穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量的穿心蓮藥材0.25g，分別準確加入穿心蓮內酯對照品3mg和脫水穿心蓮內酯對照品1mg，余同2.3項下操作，進樣測定峰面積，見表1，2。

2.9 樣品含量測定 考察穿心蓮在不同貯藏期的性狀（包括色澤、氣味、霉變、蟲蛀等），未見異常。取不同貯藏期的穿心蓮藥材0.5g，按2.3項下操作，取10μl注入高效液相色譜儀。以外標一點法計算穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量（對照品同2.2項下，進樣10μl），見表3。

3討論

通過對不同貯藏期穿心蓮藥材中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量的測定，結果表明：穿心蓮藥材在貯藏過程中，穿心蓮內酯含量逐漸減少，而脫水穿心蓮內酯含量逐漸增加。且0～12個月內，穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量變化相對明顯；而12～18個月內，穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量趨于穩定。

參考文獻：

[1]曾超.穿心蓮而萜內酯類化合物的合成與活性研究[D].河南：河南大學，2007：39-42.

[2]汪寶琪，龐志功，汪叢瑩，等.間接化學發光法監測家兔血中穿心蓮內酯的血藥濃度[J].化學通報，1994，7：50-52.

[3]張志勇，廖工鐵，王炳南等.脫水穿新蓮內酯琥珀酸半酯單鉀鹽在家兔俸內的藥代動力學研究[J].華西藥學雜志，1991，6（3）：129.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

編輯/王海靜