大理酸木瓜中齊墩果酸的提取及其降血糖、血脂作用的體內(nèi)研究

摘要：目的 通過提取大理酸木瓜中的齊墩果酸，利用SD大鼠對其降血糖、降血脂的藥用價值進行體內(nèi)評價。方法 采用氯仿熱回流法提取酸木瓜中的齊墩果酸，對高脂模型SD大鼠進行體內(nèi)實驗，血糖測定采用G-425S血糖測試儀，血脂測定采用三氯化鐵-硫酸反應法，實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果 服用齊墩果酸的SD大鼠，血糖、血脂和體重與對照組相比，均有一定的下降，降血糖作用具有明顯的統(tǒng)計學意義，但降血脂作用不具有統(tǒng)計學意義。結(jié)論 大理酸木瓜中的齊墩果酸有明顯的降血糖作用。

關(guān)鍵詞：酸木瓜；齊墩果酸；血糖

酸木瓜是一種藥食兩用瓜果，據(jù)\"本草綱目\"記載，其具有舒筋絡(luò)、和脾胃等藥理作用，故在我國很早就有研究和應用。齊墩果酸（oleanolic acid，簡稱OA）[1]是一種齊墩果烷型五環(huán)三萜類化合物，廣泛分布于自然界，是酸木瓜的主要藥效成分之一。據(jù)報道，齊墩果酸具有抗氧化、抗炎、抗菌和抗癌等活性[2]。近年來，國內(nèi)外利用酸木瓜加工成各種保健食品投放市場，但對酸木瓜中齊墩果酸的提取及其降血糖血脂的作用尚缺乏了解。我們的研究結(jié)果為開發(fā)和更有效的利用大理酸木瓜提供了科學實驗依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1藥品與試劑 干木瓜片（購于大理市干貨市場），無水乙醇、氯仿（青島集峰化工公司），鹽酸二甲雙胍片（深圳中聯(lián)制藥有限公司），辛伐他汀（上海信誼萬象藥業(yè)股份有限公司），高脂飼料（自配），硫酸鐵顯色劑、膽固醇標準應用液（上海云峰集團化工有限公司）。

1.1.2動物 SPF級成年雄性SD 大鼠12只，體質(zhì)量185g～216.3g，由大理學院動物實驗中心提供。

1.1.3儀器 粉碎機（DFY-500D 溫嶺市林大機械有限公司），電熱恒溫水浴鍋（HW326 上海一恒科技有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（RE-2000A 上海亞榮生化儀器廠），722型分光光度儀（UV2500 日本島津），離心機（LC-4012 科大創(chuàng)新股份有限公司），血糖測試儀（G-425S 愛奧樂醫(yī)療器械有限公司）。

1.2方法

1.2.1高脂 SD大鼠模型的建立 參照文獻[3]進行，將12只SD 大鼠喂以高糖高脂飼料2w后，斷尾測空腹血糖血脂，其血糖值與實驗前的血糖值對比平均升高1mmol/L為造模成功（高糖高脂飼料的制備由10.0%豬油、20.0%蔗糖、10.0%蛋黃、0.5%膽酸鈉和59.5%常規(guī)飼料組成）。將模型大鼠，隨機分為實驗組、藥物對照組和正常對照組。三組均給予等量高糖高脂飼料，實驗組喂服齊墩果酸[50mg/（kg·d）]；藥物對照組喂服鹽酸二甲雙胍片降糖藥[11.25mg/（kg·d）][4]+辛伐他汀降脂藥[2.5mg/（kg·d）][5]；正常對照組不作處理。

1.2.2齊墩果酸的提取 參照文獻[6]進行，用熱回流法提取齊墩果酸。稱取25g木瓜粉碎物加入500mL 95%的乙醇，在85℃的電熱恒溫水浴鍋回流6h，相同條件提取3次，收集3次濾液。用氯仿萃取齊墩果酸，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器于61℃提純，除去其中所含氯仿。

1.2.3血糖、血脂的測定 參照文獻[7]進行，每隔1w進行體重測定及斷尾采血測定血糖、血脂。先用天平測量每只SD 大鼠的體重；再用G-425S血糖測試儀測定血糖；最后采用三氯化鐵-硫酸反應法測血脂（用硫酸鐵作顯色劑在560nm下測定膽固醇含量）；并記錄相應數(shù)據(jù)。

1.2.4統(tǒng)計學處理 以SPSS 12.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，各組之間比較采用t檢驗，P<0.05，P<0.01為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1血糖變化分析 見圖1。

圖1 高脂SD大鼠血糖變化

圖1 n=4， 正常對照組， 實驗組（齊墩果酸[50mg/（kg.d）]）， 藥物對照組（鹽酸二甲雙胍片[11.25mg/（kg.d）]+辛伐他汀[2.5mg/（kg.d）]）；（* P<0.05；** P<0.01）

圖1顯示，正常對照組血糖平均值一直呈上升趨勢。實驗組血糖平均值一直呈下降趨勢，從第4w開始，與正常對照組相比，出現(xiàn)統(tǒng)計學差異（P<0.05 *）。藥物對照組血糖平均值亦一直呈下降趨勢，且從第3w開始，與正常對照組相比，出現(xiàn)統(tǒng)計學差異（P<0.05*）。實驗組和藥物對照組，從4w以后兩組的統(tǒng)計學差異更明顯（P<0.01 **），說明服用齊墩果酸和鹽酸二甲雙胍片的降糖效果一致。

2.2體重變化分析 見圖2。

圖2 高脂SD大鼠體重變化

圖2 n=4， 正常對照組， 實驗組（齊墩果酸[50mg/（kg.d）]）， 藥物對照組（鹽酸二甲雙胍片[11.25mg/（kg.d）]+辛伐他汀[2.5mg/（kg.d）]）；（* P<0.05；** P<0.01）

圖2顯示，三組高脂SD 大鼠的體重從第1～7w一直呈上升趨勢，經(jīng)統(tǒng)計學分析，各組差異無顯著性。

2.3血脂變化分析 見圖3。

圖3 高脂SD大鼠血脂變化

圖3 n=4， 正常對照組， 實驗組（齊墩果酸[50mg/（kg.d）]）， 藥物對照組（鹽酸二甲雙胍片[11.25mg/（kg.d）]+辛伐他汀[2.5mg/（kg.d）]）；（* P<0.05；** P<0.01）

圖3顯示，正常對照組SD 大鼠的血脂變化不明顯。實驗組和藥物對照組前3w血脂呈上升趨勢，3w后呈下降趨勢，經(jīng)統(tǒng)計學分析，各組差異無顯著性。

3 討論

隨著經(jīng)濟的發(fā)展，人民生活水平不斷提高，高血糖、高血脂的發(fā)生率逐年增加。糖尿病、高脂血癥患者需要長期甚至終生服用西藥來控制，但長時間服用西藥對心、腦、肝、腎均有較大毒副作用。因此研制高效、低毒的藥物，在醫(yī)藥界已顯得尤為迫切。本實驗為尋找高效低毒的藥物源頭提供參考依據(jù)，同時也為指導高血糖、高血脂患者選擇合理的飲食提供科學依據(jù)。

實驗組與藥物對照組的血糖值，在模型大鼠體內(nèi)試驗中，出現(xiàn)同樣的降糖效果，經(jīng)統(tǒng)計學分析，齊墩果酸的降糖作用有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（圖1）。而模型大鼠體重，經(jīng)統(tǒng)計學分析，無明顯差異，故體重變化與實驗無明顯相關(guān)性（圖2）。同時血脂變化無一定規(guī)律，與預期不合，表現(xiàn)為藥物對照組對模型大鼠的血脂亦無影響，因此不能說明齊墩果酸對SD 大鼠無降脂作用（圖3）；分析其原因，可能是實驗過程中用藥劑量不足，但具體原因有待研究。

本實驗結(jié)果表明，從大理酸木瓜中提取的齊墩果酸，有明顯的降血糖作用。因此可利用大理豐富的酸木瓜資源，進一步開發(fā)其保健食品，并作為天然齊墩果酸提取的良好原料，進而研制高效低毒的降糖藥，但食用應該科學合理，尤其是高血糖患者。

參考文獻：

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[2]Hao J，Liu J，Wen X，et al. Synthesis and cytotoxicity evaluation of oleanolic acid derivatives [J]. Bioorg Med ChemLett，2013，23（7）：2074-2077.

[3]藺美玲，陳紅梅，張小郁，等. 齊墩果酸抑制高脂飲食肥胖大鼠體重的實驗研究[J].成都醫(yī)學院學報，2010，5（1）：16-20.

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編輯/哈濤