低溫對大鼠黃體細胞與顆粒細胞功能的影響及人參多糖的調節作用

摘要：目的 探討不同冷強度多次低溫暴露對大鼠卵巢功能的影響及人參多糖的調節作用。方法 采用體外細胞培養法分離培養大鼠卵巢黃體、顆粒細胞， 設人參多糖組和實驗組，進行37、0、-10℃環境溫度多次暴露，觀察黃體與顆粒細胞分泌孕酮的變化，采用放免分析方法測定孕酮生成含量。結果 0℃第1次低溫暴露，基礎孕酮生成量升高，第2次和第3次低溫暴露均顯著下降（P<0.05、P<0.01）；-10℃第一次低溫暴露，基礎孕酮生成量下降，第2次和第3次低溫暴露均顯著下降（P<0.01）。人參多糖組增高和下降幅度明顯減少，第2次和第3次0℃冷暴露后，基礎孕酮生成量顯著高于實驗組（ P<0.05、P<0.01）。結論 低溫暴露強度、次數對大鼠卵巢黃體細胞與顆粒細胞分泌孕酮功能有影響，人參多糖對其具有適應性調節作用。

關鍵詞：冷暴露；人參多糖；孕酮

低溫因素是應激源之一，作用機體將引起一系列冷應激反應，由于低溫作用的方式不同反應也不同[1]。已知冷應激可導致下丘腦- 垂體- 性腺軸分泌功能發生變化[2]。人參具有“適應原”樣作用，人參多糖是是人參中具有重要生理活性的有效成份[3]，為探討人參多糖對卵巢在不同冷強度、不同暴露時間功能變化的影響，本文采用體外細胞培養方法檢測大鼠卵巢黃體與顆粒細胞分泌孕酮的含量。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1動物 Wistar大鼠，體重250～300g，健康雌性，分籠飼養，自由飲水進食。適應性飼養1w后進行實驗。

1.1.2 細胞 黃體細胞與顆粒細胞取自大鼠卵巢。

1.1.3分組 黃體細胞分為Ⅰ組和Ⅱ組，顆粒細胞分為Ⅲ組和Ⅳ組，Ⅰ組和Ⅲ組分別進行37℃、0℃ 、-10℃環境溫度暴露，Ⅱ組和Ⅳ組經人參多糖干預后再分別進行37℃、0℃ 、-10℃環境溫度暴露。

1.2 方法[4]。

1.3統計分析 采用SPSS13.0統計軟件進行t檢驗。

2 結果

低溫對黃體與顆粒細胞基礎孕酮生成量的影響及人參多糖的調節作用實驗結果如表1所示，Ⅰ組黃體細胞，0℃重復3次低溫暴露，其基礎孕酮生成量與37℃暴露比較，第1次低溫暴露為升高，無統計學差異；第2次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）；第3次低溫暴露明顯降低，差異非常顯著（P<0.01）。-10℃重復3低溫冷暴露，其基礎孕酮生成量與37℃暴露比較呈降低趨勢，第1次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）；第2次和第3次低溫暴露繼續降低，差異非常顯著（P<0.01）。Ⅱ組黃體細胞，0℃重復3次低溫暴露，第1次和第2次低溫暴露出現上下波動，無統計學差異；第3次低溫暴露，與37℃暴露比較明顯降低（P<0.05），但數值明顯高于Ⅰ組（P<0.05）。-10℃重復3低溫冷暴露，其基礎孕酮生成量與37℃暴露比較呈降低趨勢，第2次和第3次降低差異顯著（P<0.05）；第3次數值明顯高于Ⅰ組（P<0.05）。

Ⅲ組顆粒細胞，0℃重復3次低溫暴露，基礎孕酮生成量與37℃暴露比較，第1次低溫暴露為升高，無統計學差異；第2次和第3次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）。-10℃重復3次低溫暴露，其基礎孕酮生成量與37℃暴露比較呈降低趨勢，第1次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）；第2次和第3次低溫暴露繼續降低，差異非常顯著（P<0.01）。Ⅳ組顆粒細胞，0℃重復3次低溫暴露，基礎孕酮生成量與37℃暴露比較，第1次低溫暴露為升高，無統計學差異；第2次和第3次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）。-10℃重復3次低溫暴露，其基礎孕酮生成量與37℃暴露比較呈降低趨勢，第1次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）；第2次和第3次低溫暴露繼續降低，差異非常顯著（P<0.01），見表1。

3 討論

低溫因素可引起機體內環境穩定性、生理和行為等發生改變，產生非特異性應答反應。人參具有提高機體抗應激的作用，可以抗缺氧，耐高溫和低溫[5]。本實驗結果表明，低溫暴露對黃體與顆粒細胞孕酮生成量產生作用，出現了升高與降低的變化，而人參多糖在波動變化中發揮了“適應原”樣作用。

本實驗黃體與顆粒細胞的孕酮生成量，0℃環境重復低溫暴露出現了先高后低的變化，這可能由于隨著冷暴露強度和時間的增加，應激增強反應出現逐步減弱及下降的變化，也可能由于反饋作用抑制了促黃體生成素（LH）的分泌[6]的結果。-10℃環境重復低溫暴露，初次出現了基礎孕酮生成量的降低，表現出冷應激抑制hCG刺激的孕酮生成，當連續低溫暴露后孕酮生成量顯著降低。離體細胞培養的適宜溫度為37℃，而與-10℃暴露溫度差異很大，加之重復的低溫作用，致使細胞分泌功能明顯受到抑制。

人參多糖可影響低溫暴露的黃體細胞和顆粒細胞的孕酮生成量，在0℃和-10℃環境重復暴露后，人參多糖組孕酮生成量顯著高于實驗組，對低溫誘導的孕酮生成量明顯下降有干預作用。本研究表明人參多糖具有顯著的抗冷應激作用，調節低溫暴露條件下卵巢細胞孕酮生成量，保護生殖細胞功能。

參考文獻：

[1]楊煥民，李士澤.動物冷應激的研究進展[J].黑龍江畜牧獸醫，1999，3：42-44.

[2]楊明，李慶芬.哺乳動物冷應激的主要神經內分泌反應[J].動物學研究，2002，23 （4）：335-340.

[3]張惠，馬洪林.人參多糖的活性成份及藥理作用[J].中醫藥研究，1989；12（15：38-40.

[4]孫艷，劉建茹，王洪軍，等.冷應激對人絨毛膜促性腺激素誘導大鼠黃體與顆粒細胞功能的影響[J].環境與健康雜志，2008，25（4）：340-342.

[5]劉郁，劉連新.人參功效再認識[J].時珍國醫國藥.2006；17（2）：289.

[6]Jones SR，Kunz SE.Effects of cold stress on survival and reproduction of Haematobia irritans（Diptera：Muscidae）[J].J Med Entomol，1998，35：725-731.

編輯/王敏