阿托伐他汀預處理對SD大鼠局部腦缺血再灌注損傷保護作用的研究

王永超高 政*

（1 大連市第二人民醫院，遼寧 大連 116011；2 大連醫科大學附屬第二醫院，遼寧 大連 116031）

阿托伐他汀預處理對SD大鼠局部腦缺血再灌注損傷保護作用的研究

王永超1高 政2*

（1 大連市第二人民醫院，遼寧 大連 116011；2 大連醫科大學附屬第二醫院，遼寧 大連 116031）

目的研究阿托伐他汀預處理對SD大鼠局部腦缺血再灌注損傷的保護作用。方法120只雄性健康SD大鼠隨機分成阿托伐他汀組（A組）、對照組（C組）、假手術組（S組），每組40只。A組和C組均按缺血2 h，再灌注0、2、6、12、24 h五個時間點（8只/組）分別制備腦缺血再灌注模型，進行神經功能缺損評分，測量腦梗死體積，觀察腦組織病理形態。結果再灌注12、24 h，A組較C組神經功能缺損評分降低（P＜0.05）、腦梗死體積減小（P＜0.05）。A組與C組比較，缺血側腦組織間水腫減輕，變性、壞死的神經元數量減少，空泡樣改變減輕。結論阿托伐他汀預處理對SD大鼠局部腦缺血再灌注損傷具有保護作用。

阿托伐他汀；腦缺血再灌注

阿托伐他汀屬3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A（HMG-COA）還原酶抑制劑，能有效降低血中低密度脂蛋白和膽固醇水平，并能增高高密度脂蛋白水平和中度降低三酰甘油，故臨床上主要用于調脂治療。大量證據顯示包括阿托伐他汀在內的他汀類藥物有不依賴于其降脂作用的血管和神經保護作用[1]。本實驗對大鼠進行阿托伐他汀預處理，觀察其局部腦缺血再灌注后神經功能缺損評分、腦組織病理形態、腦梗死體積等，從動物實驗角度研究預防性應用阿托伐他汀是否對腦缺血再灌注損傷具有神經保護作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組：雄性健康SD大鼠120只（由大連醫科大學實驗動物中心提供），鼠齡在4個月，體質量220～260 g，隨機分成3組：阿托伐他汀組（A組）、對照組（C組）、假手術組（S組），每組40只，各組分別包括缺血2 h再灌注0、2、6、12、24 h各5個亞組，每亞組8只。

1.2 給藥方法：A組于術前14 d開始給予阿托伐他汀10mg/（kg·d），（生理鹽水配制成0.5 mg/mL混懸液）灌胃，C組和S組則每天予等容量生理鹽水灌胃。

1.3 腦缺血再灌注模型制備：大鼠大腦中動脈閉塞模型（MCAO）的制備采用改良longa-Zea氏線栓法，A組和C組大鼠均栓塞右側大腦中動脈。模型成功的標志是動物蘇醒后出現對側以前肢為重的偏癱和同側的Horner征（眼裂變小，眼球內陷）。S組只暴露血管，不結扎、不插栓線。

1.4 神經功能缺損評分：采用Longa 5分制法分別于再灌注0、2、6、12、24 h進行神經功能缺損評分。

1.5 腦梗死體積測定：10%水合氯醛處死大鼠后即刻取腦，速凍15 min后經冠狀面由視交叉水平切A、B、C、D、E 5個腦片，厚度約1.5 mm，C片石蠟包埋后做HE染色，余四個腦片行TTC染色、溫育30min并用福爾馬林固定。腦組織梗死部位不會著色。正反面拍照各腦片，采用MIAS圖像分析軟件計算出梗死比率。

1.6 觀察腦組織病理形態：光鏡下觀察經HE染色的腦組織切片，觀察腦組織神經細胞形態、結構，神經元受損等特征。

1.7 統計學分析：應用SPSS13.0統計軟件進行分析。計量資料以（xˉ±s）表示；腦梗死體積的比較采用t檢驗；神經功能缺損評分采用秩和檢驗；各指標在兩組的動態變化采用單因素方差分析。

2 結 果

2.1 神經功能缺損評分：C組較S組在相同再灌注時點神經功能缺損癥狀明顯（P＜0.01）；A組較C組神經功能缺損評分在再灌注12 h及24 h時點降低 （P＜0.05）。見表1。

2.2 腦梗死體積：A組與C組均在腦缺血2h時開始出現梗死灶，C組腦梗死灶隨再灌注時間的延長逐漸增大，組內各時間點比較差異有統計學意義（P＜0.01）；A組梗死灶則在再灌注6 h達高峰，此后呈下降趨勢，但24 h時其腦梗死體積仍大于再灌注2 h時，組內各時間點比較差異有統計學意義（P＜0.01）；C組較S組相同時間點腦梗死體積明顯增大（P＜0.01）；A組較C組在再灌注12h及24h時腦梗死體積減小（P＜0.05）。見表2。

表1 神經功能缺損評分（）

注：組間比較，▲表示P＜0.05，■表示P＜0.01

組別 再灌注0 h 再灌注2 h 再灌注6 h 再灌注12 h 再灌24 h S組 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 C組 1.81±0.40■ 2.16±0.40■ 2.81±0.39■ 3.15±0.73■ 3.18±0.42■A組 1.49±0.56 1.66±0.49 2.49±0.56 2.16±0.40▲ 2.00±0.61▲

表2 腦梗死體積比率（腦梗死體積/總體積， ）

2.3 腦組織病理形態：C組缺血側腦組織神經元數目明顯減少，神經細胞皺縮、核固縮，組織間水腫明顯，可見空泡樣化，且神經元損害隨著時間延長而漸加重，大多數神經細胞變性壞死；A組神經元受損程度也隨再灌注時間延長而加重，但A組較C組變性、壞死的神經元少，組織間水腫及空泡化均輕。見圖1。

圖1 HE染色示各組腦組織病理形態（10×40倍光鏡）

3 討 論

近幾年大量循證醫學證據證實他汀類藥物具有抗動脈硬化、預防腦卒中作用[2]，且無論患者血清膽固醇水平高低，都能明顯降低缺血性卒中的發病率[1]。該類藥物除了通過其傳統的降脂作用減少心腦血管事件的發生外，還具有不依賴于其降脂作用的血管和神經保護作用[3-4]。阿托伐他汀為3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A（HMG-COA）還原酶抑制劑，是一種強效他汀類調脂藥。除本身的調脂作用外，該藥尚具有獨立于降脂作用外的多向性效應，包括影響細胞信號轉導及細胞增殖、抑制炎性反應、穩定斑塊等多項非調脂作用[5-6]，抑制平滑肌細胞增殖和新生內膜增生、抑制血小板聚集及改善內皮功能[7-8]。

有研究表明，分別服用阿托伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、普伐他汀及洛伐他汀這幾種目前臨床上常用的他汀類藥物治療后5年的效果，阿托伐他汀降低腦卒中發病率效果最好，能明顯提高患者預期壽命，改善健康狀況[9]。強化降低膽固醇預防腦卒中的SPARCL研究發現，近期腦卒中或一過性缺血發作患者，服用阿托伐他汀80 mg/d可降低腦卒中16%[10]。黃方等[11]報道分析15例＞80歲抗磷脂綜合征患者的臨床資料，經常發生心腦血管缺血事件，在抗血小板、抗凝等治療的基礎上，每晚加服阿托伐他汀鈣20 mg后，心腦血管缺血事件的發生明顯減少。國內亦有研究報道，阿托伐他汀能明顯降低神經功能缺損癥狀，縮小腦梗死體積[12]。

本研究顯示腦缺血2 h后，對照組較假手術組神經功能缺損癥狀明顯，腦組織損傷病理形態嚴重，腦梗死體積明顯。再灌注24 h內，隨著再灌注時間的延長，對照組神經功能缺損癥狀、腦梗死體積均有明顯加重趨勢。這不僅表明缺血本身可引起腦損傷，且隨著再灌注時間延長呈加重趨勢。而阿托伐他汀組同比對照組可見在應用阿托伐他汀后各再灌注時間點神經功能缺損癥狀減輕，腦梗死體積減小。進一步觀察阿托伐他汀組缺血側腦組織發現，再灌注24 h內，腦梗死體積并不是隨著再灌注時間的延長持續擴大，而是于再灌注6 h達高峰并出現拐點，隨后逐漸縮小，腦組織損傷病理形態亦有所減輕。但具體機制尚需進一步研究。

綜上所述，預防性應用阿托伐他汀可減輕腦缺血再灌注后神經功能缺損癥狀，減輕腦組織損傷病理形態，減小腦梗死體積。這充分證明了阿托伐他汀預處理對于腦缺血再灌注損傷的保護作用，為缺血性腦血管病的臨床防治提供可行方法。

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1671-8194（2014）13-0082-02

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