高效液相色譜法鑒別及測定中藥吳茱萸中的生物胺

孫艷妮　張寧等

摘 要 建立了高效液相色譜法（HPLC）測定中藥吳茱萸中生物胺的方法。以丹磺酰氯為柱前衍生試劑，采用島津高效液相色譜儀（LC10A），色譜柱SHIMADZUC18 （150 mm × 4.6 mm× 5 μm）進行測定， 確定了最佳色譜條件：乙腈和水為流動相，梯度洗脫，DAD檢測器，檢測波長為334 nm，流速為0.8 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量20 μL。10種常見生物胺在45 min內得到良好的分離，在給定的濃度范圍內，各生物胺呈現良好的線性相關（R2>0.999），精密度RSD<2%，回收率在91.87%～101.35%之間，重現性RSD<8%。結果表明，吳茱萸葉中含有7種生物胺，枝中含有4種，果中含有5種。這是首次發現在中藥吳茱萸中存在生物胺類成分。

關鍵詞 生物胺； 吳茱萸；衍生化分析； 高效液相色譜

1 引 言

吳茱萸是蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa （Juss.） Benth.、石虎 Evodia rutaecarpa （Juss.） Benth.var.officinalis （Dode） Huang 或疏毛吳茱萸 Evodia rutaecarpa （Juss.） Benth.var.bodinieri （Dode） Huang 的干燥近成熟果實[1]，始載于《神農本草經》，列為中品。具有散寒止痛、降逆止嘔、助陽止瀉之功效，臨床常用于治療厥陰頭痛、寒疝腹痛、寒濕腳氣、經行腹痛、脘腹脹痛、嘔吐吞酸、五更泄瀉等。現代藥理研究表明， 吳茱萸具有舒張血管、降壓、強心、止瀉、收縮子宮、殺蟲、抗炎鎮痛、抗菌等活性[2，3]。吳茱萸屬植物化學成分共計約240多種，其主要分為生物堿、香豆素、黃酮、萜類、酰胺等。生物堿類成分共計有104種，其中喹諾酮類59種、吲哚類36種、異喹啉類7和其它2種[4]。從生源關系分析吲哚類36種生物堿中至少有17種是由色胺衍生的，即此類成分在植物體內是由色胺和非色胺部分反應生成的。因此，在吳茱萸中色胺的存在是很有可能的，可能因為含量小而未被鑒別出來。同時，其它的生物胺類成分也可能存在。生物胺根據其結構可分為3類：脂肪族，包括腐胺、尸胺、精胺、亞精胺等，它們是生物活性細胞必不可少的組成部分，在調節核酸與蛋白質的合成及生物膜穩定性方面起著重要作用；芳香族，包括酪胺、苯乙胺等；雜環胺，包括組胺、色胺等[5]。也可根據胺基數目分為單胺和多胺兩類。單胺主要有酪胺、組胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、色胺等。一定量的單胺類化合物對血管和肌肉有明顯的舒張和收縮作用，對精神活動和大腦皮層有重要的調節作用；多胺主要包括精胺和亞精胺，其在生物體的生長過程中能促進DNA、RNA和蛋白質的合成，加速生物體的生長發育。微量生物胺是生物體（包括人體）內的正常活性成分，在生物細胞中具有重要的生理功能。生物胺類成分活性很強，它們的存在也應該對吳茱萸的作用有貢獻，因此很有必要搞清楚它們存在的種類和含量。

由于大部分生物胺既沒有紫外吸收又無熒光，因此目前對生物胺的研究主要是進行衍生化后分析。生物胺的衍生試劑主要有丹磺酰氯（Dansylchloride）[6]、4二甲胺基苯基偶氮苯磺酰（Dabsyl chloride）[7]、2Chloroethylnitrosourea等[8]。丹磺酰氯應用最為普遍，生物胺的丹磺酰氯衍生物較為穩定， 并同時具有熒光特性和特異的紫外吸收，既可以用熒光檢測，也可以用紫外檢測[9]，生物胺與丹磺酰氯的反應式如下：

HPLC是檢測生物胺的常用方法，簡單有效。為此，本研究以丹磺酰氯為衍生試劑，衍生化色譜法鑒別和測定吳茱萸中的生物胺類成分。本研究在樣品的前處理過程中采用液液萃取步驟對樣品進行純化和富集，適用于測定成分復雜，生物胺含量更低的樣品。本方法具有通用性廣、靈敏度高、測定結果準確、穩定性好等優點。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

島津高效液相色譜儀（LC10A），配備二級管陣列檢測器； SHIMADZUC18色譜柱（150 mm × 4.6 mm × 5μm）；Milli Q Biocel超純水機（美國MilliPoreco公司）；移液槍（德國 Eppendorf公司）；粉碎機（黃驊市中興儀器有限公司）；SHAC恒溫振蕩器（國華企業）；Anke TDL40B離心機（Anke公司），Filter Unit濾膜（0.45 μm）。

乙腈 （色譜純）；丙酮、三氯乙酸、HClO4、丹磺酰氯（分析純）；甲胺，色胺，苯乙胺，腐胺，尸胺，組胺，5羥色胺，酪胺，亞精胺，精胺，均購于Aladdin公司。實驗用水為超純水，

吳茱萸樣品：果、葉、枝采自西安植物園，經西安植物園張瑩鑒定。

2.2 色譜條件

SHIMADZUC18色譜柱（150 mm × 4.6 mm× 5μm）； 檢測波長：334 nm； 流速：0.8 mL/min； 進樣量：20 μL； 柱溫：30 ℃。流動相：水（A）乙腈（B），采用梯度洗脫：0～7 min，45%～50% B； 7～25 min，50%～90% B； 25～35 min，90% B； 35～40 min，90%～45% B； 40～45 min，45% B。

2.3 標準溶液的配制

生物胺混合標準儲備液：準確稱取10種生物胺標準品各10 mg，用0.1 mol/L HCl溶解，定容至10 mL， 制成標準品儲備液備用。取10種生物胺單標儲備液各5 mL于100 mL棕色容量瓶中，用0.1 mol/L HCl定容，于4 ℃儲存備用。

衍生化試劑：精確稱取50 mg丹磺酰氯溶于丙酮，置于10 mL棕色容量瓶中，加入丙酮定容，于4 ℃儲存備用。

2.4 樣品的制備

吳茱萸葉、枝、果在60 ℃下烘干至恒重，粉碎，過50目篩（粒徑0.36 mm）。 分別準確稱取5.000 g于100 mL錐形瓶中， 加入30 mL 1 mol/L HCl，振蕩提取1 h，過濾上清液（提取3次，后兩次每次15 mL），合并濾液，4000 r/min離心8 min，上清液定容至50 mL。取20 mL提取液至50 mL離心管，用2 mol/L NaOH調至pH 12，加入正丁醇二氯甲烷（1 ∶ 1， V/V），渦旋1 min，4000 r/min離心8 min，萃取3次，每次10 mL，合并有機相，氮氣吹干，加1 mL 0.1 mol/L HCl溶解，取0.5 mL至5 mL棕色容量瓶，進行衍生化分析； 取0.4 mL至5 mL棕色容量瓶，作為空白對照。

0.5 mL 樣品液以及標準胺混合液，加入1 mL NaHCO3/Na2CO3（pH 10.5），0.5 mL丹磺酰氯，在空白對照組中加入0.5 mL丙酮代替丹磺酰氯。混勻后，60 ℃水浴45 min，加100 μL氨水除去多余的丹磺酰氯，停止反應[10]。室溫放置30 min后，以乙腈定容至5 mL，過0.45 μm濾膜，待測。

3 結果與討論

3.1 樣品的提取與衍生化

采用三氯乙酸[11]、HClO3 [12]、HCl [10]分別提取吳茱萸葉中的生物胺，結果見表1，綜合比較，HCl提取效果最好。因此本方法選擇HCl作為生物胺的提取溶劑。衍生溫度、時間和衍生劑用量是影響丹磺酰氯衍生效果的主要因素。反復實驗確定的優化條件為： 0.5 mL丹磺酰氯（5 g/L），60 ℃水浴45 min。

3.2 色譜條件的選擇

在190～800 nm波段對生物胺標準溶液衍生化后進行紫外掃描，最大吸收峰為251 nm，在334 nm處也有吸收，但是吳茱萸樣品在251 nm處干擾比較大，因此選取334 nm。

流動相的選擇對于生物胺的測定非常重要，本實驗采用水（A）乙腈（B）為流動相， 梯度洗脫：

摘 要 建立了高效液相色譜法（HPLC）測定中藥吳茱萸中生物胺的方法。以丹磺酰氯為柱前衍生試劑，采用島津高效液相色譜儀（LC10A），色譜柱SHIMADZUC18 （150 mm × 4.6 mm× 5 μm）進行測定， 確定了最佳色譜條件：乙腈和水為流動相，梯度洗脫，DAD檢測器，檢測波長為334 nm，流速為0.8 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量20 μL。10種常見生物胺在45 min內得到良好的分離，在給定的濃度范圍內，各生物胺呈現良好的線性相關（R2>0.999），精密度RSD<2%，回收率在91.87%～101.35%之間，重現性RSD<8%。結果表明，吳茱萸葉中含有7種生物胺，枝中含有4種，果中含有5種。這是首次發現在中藥吳茱萸中存在生物胺類成分。

關鍵詞 生物胺； 吳茱萸；衍生化分析； 高效液相色譜

1 引 言

吳茱萸是蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa （Juss.） Benth.、石虎 Evodia rutaecarpa （Juss.） Benth.var.officinalis （Dode） Huang 或疏毛吳茱萸 Evodia rutaecarpa （Juss.） Benth.var.bodinieri （Dode） Huang 的干燥近成熟果實[1]，始載于《神農本草經》，列為中品。具有散寒止痛、降逆止嘔、助陽止瀉之功效，臨床常用于治療厥陰頭痛、寒疝腹痛、寒濕腳氣、經行腹痛、脘腹脹痛、嘔吐吞酸、五更泄瀉等。現代藥理研究表明， 吳茱萸具有舒張血管、降壓、強心、止瀉、收縮子宮、殺蟲、抗炎鎮痛、抗菌等活性[2，3]。吳茱萸屬植物化學成分共計約240多種，其主要分為生物堿、香豆素、黃酮、萜類、酰胺等。生物堿類成分共計有104種，其中喹諾酮類59種、吲哚類36種、異喹啉類7和其它2種[4]。從生源關系分析吲哚類36種生物堿中至少有17種是由色胺衍生的，即此類成分在植物體內是由色胺和非色胺部分反應生成的。因此，在吳茱萸中色胺的存在是很有可能的，可能因為含量小而未被鑒別出來。同時，其它的生物胺類成分也可能存在。生物胺根據其結構可分為3類：脂肪族，包括腐胺、尸胺、精胺、亞精胺等，它們是生物活性細胞必不可少的組成部分，在調節核酸與蛋白質的合成及生物膜穩定性方面起著重要作用；芳香族，包括酪胺、苯乙胺等；雜環胺，包括組胺、色胺等[5]。也可根據胺基數目分為單胺和多胺兩類。單胺主要有酪胺、組胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、色胺等。一定量的單胺類化合物對血管和肌肉有明顯的舒張和收縮作用，對精神活動和大腦皮層有重要的調節作用；多胺主要包括精胺和亞精胺，其在生物體的生長過程中能促進DNA、RNA和蛋白質的合成，加速生物體的生長發育。微量生物胺是生物體（包括人體）內的正常活性成分，在生物細胞中具有重要的生理功能。生物胺類成分活性很強，它們的存在也應該對吳茱萸的作用有貢獻，因此很有必要搞清楚它們存在的種類和含量。

由于大部分生物胺既沒有紫外吸收又無熒光，因此目前對生物胺的研究主要是進行衍生化后分析。生物胺的衍生試劑主要有丹磺酰氯（Dansylchloride）[6]、4二甲胺基苯基偶氮苯磺酰（Dabsyl chloride）[7]、2Chloroethylnitrosourea等[8]。丹磺酰氯應用最為普遍，生物胺的丹磺酰氯衍生物較為穩定， 并同時具有熒光特性和特異的紫外吸收，既可以用熒光檢測，也可以用紫外檢測[9]，生物胺與丹磺酰氯的反應式如下：

HPLC是檢測生物胺的常用方法，簡單有效。為此，本研究以丹磺酰氯為衍生試劑，衍生化色譜法鑒別和測定吳茱萸中的生物胺類成分。本研究在樣品的前處理過程中采用液液萃取步驟對樣品進行純化和富集，適用于測定成分復雜，生物胺含量更低的樣品。本方法具有通用性廣、靈敏度高、測定結果準確、穩定性好等優點。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

島津高效液相色譜儀（LC10A），配備二級管陣列檢測器； SHIMADZUC18色譜柱（150 mm × 4.6 mm × 5μm）；Milli Q Biocel超純水機（美國MilliPoreco公司）；移液槍（德國 Eppendorf公司）；粉碎機（黃驊市中興儀器有限公司）；SHAC恒溫振蕩器（國華企業）；Anke TDL40B離心機（Anke公司），Filter Unit濾膜（0.45 μm）。

乙腈 （色譜純）；丙酮、三氯乙酸、HClO4、丹磺酰氯（分析純）；甲胺，色胺，苯乙胺，腐胺，尸胺，組胺，5羥色胺，酪胺，亞精胺，精胺，均購于Aladdin公司。實驗用水為超純水，

吳茱萸樣品：果、葉、枝采自西安植物園，經西安植物園張瑩鑒定。

2.2 色譜條件

SHIMADZUC18色譜柱（150 mm × 4.6 mm× 5μm）； 檢測波長：334 nm； 流速：0.8 mL/min； 進樣量：20 μL； 柱溫：30 ℃。流動相：水（A）乙腈（B），采用梯度洗脫：0～7 min，45%～50% B； 7～25 min，50%～90% B； 25～35 min，90% B； 35～40 min，90%～45% B； 40～45 min，45% B。

2.3 標準溶液的配制

生物胺混合標準儲備液：準確稱取10種生物胺標準品各10 mg，用0.1 mol/L HCl溶解，定容至10 mL， 制成標準品儲備液備用。取10種生物胺單標儲備液各5 mL于100 mL棕色容量瓶中，用0.1 mol/L HCl定容，于4 ℃儲存備用。

衍生化試劑：精確稱取50 mg丹磺酰氯溶于丙酮，置于10 mL棕色容量瓶中，加入丙酮定容，于4 ℃儲存備用。

2.4 樣品的制備

吳茱萸葉、枝、果在60 ℃下烘干至恒重，粉碎，過50目篩（粒徑0.36 mm）。 分別準確稱取5.000 g于100 mL錐形瓶中， 加入30 mL 1 mol/L HCl，振蕩提取1 h，過濾上清液（提取3次，后兩次每次15 mL），合并濾液，4000 r/min離心8 min，上清液定容至50 mL。取20 mL提取液至50 mL離心管，用2 mol/L NaOH調至pH 12，加入正丁醇二氯甲烷（1 ∶ 1， V/V），渦旋1 min，4000 r/min離心8 min，萃取3次，每次10 mL，合并有機相，氮氣吹干，加1 mL 0.1 mol/L HCl溶解，取0.5 mL至5 mL棕色容量瓶，進行衍生化分析； 取0.4 mL至5 mL棕色容量瓶，作為空白對照。

0.5 mL 樣品液以及標準胺混合液，加入1 mL NaHCO3/Na2CO3（pH 10.5），0.5 mL丹磺酰氯，在空白對照組中加入0.5 mL丙酮代替丹磺酰氯。混勻后，60 ℃水浴45 min，加100 μL氨水除去多余的丹磺酰氯，停止反應[10]。室溫放置30 min后，以乙腈定容至5 mL，過0.45 μm濾膜，待測。

3 結果與討論

3.1 樣品的提取與衍生化

采用三氯乙酸[11]、HClO3 [12]、HCl [10]分別提取吳茱萸葉中的生物胺，結果見表1，綜合比較，HCl提取效果最好。因此本方法選擇HCl作為生物胺的提取溶劑。衍生溫度、時間和衍生劑用量是影響丹磺酰氯衍生效果的主要因素。反復實驗確定的優化條件為： 0.5 mL丹磺酰氯（5 g/L），60 ℃水浴45 min。

3.2 色譜條件的選擇

在190～800 nm波段對生物胺標準溶液衍生化后進行紫外掃描，最大吸收峰為251 nm，在334 nm處也有吸收，但是吳茱萸樣品在251 nm處干擾比較大，因此選取334 nm。

流動相的選擇對于生物胺的測定非常重要，本實驗采用水（A）乙腈（B）為流動相， 梯度洗脫：

摘 要 建立了高效液相色譜法（HPLC）測定中藥吳茱萸中生物胺的方法。以丹磺酰氯為柱前衍生試劑，采用島津高效液相色譜儀（LC10A），色譜柱SHIMADZUC18 （150 mm × 4.6 mm× 5 μm）進行測定， 確定了最佳色譜條件：乙腈和水為流動相，梯度洗脫，DAD檢測器，檢測波長為334 nm，流速為0.8 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量20 μL。10種常見生物胺在45 min內得到良好的分離，在給定的濃度范圍內，各生物胺呈現良好的線性相關（R2>0.999），精密度RSD<2%，回收率在91.87%～101.35%之間，重現性RSD<8%。結果表明，吳茱萸葉中含有7種生物胺，枝中含有4種，果中含有5種。這是首次發現在中藥吳茱萸中存在生物胺類成分。

關鍵詞 生物胺； 吳茱萸；衍生化分析； 高效液相色譜

1 引 言

吳茱萸是蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa （Juss.） Benth.、石虎 Evodia rutaecarpa （Juss.） Benth.var.officinalis （Dode） Huang 或疏毛吳茱萸 Evodia rutaecarpa （Juss.） Benth.var.bodinieri （Dode） Huang 的干燥近成熟果實[1]，始載于《神農本草經》，列為中品。具有散寒止痛、降逆止嘔、助陽止瀉之功效，臨床常用于治療厥陰頭痛、寒疝腹痛、寒濕腳氣、經行腹痛、脘腹脹痛、嘔吐吞酸、五更泄瀉等。現代藥理研究表明， 吳茱萸具有舒張血管、降壓、強心、止瀉、收縮子宮、殺蟲、抗炎鎮痛、抗菌等活性[2，3]。吳茱萸屬植物化學成分共計約240多種，其主要分為生物堿、香豆素、黃酮、萜類、酰胺等。生物堿類成分共計有104種，其中喹諾酮類59種、吲哚類36種、異喹啉類7和其它2種[4]。從生源關系分析吲哚類36種生物堿中至少有17種是由色胺衍生的，即此類成分在植物體內是由色胺和非色胺部分反應生成的。因此，在吳茱萸中色胺的存在是很有可能的，可能因為含量小而未被鑒別出來。同時，其它的生物胺類成分也可能存在。生物胺根據其結構可分為3類：脂肪族，包括腐胺、尸胺、精胺、亞精胺等，它們是生物活性細胞必不可少的組成部分，在調節核酸與蛋白質的合成及生物膜穩定性方面起著重要作用；芳香族，包括酪胺、苯乙胺等；雜環胺，包括組胺、色胺等[5]。也可根據胺基數目分為單胺和多胺兩類。單胺主要有酪胺、組胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、色胺等。一定量的單胺類化合物對血管和肌肉有明顯的舒張和收縮作用，對精神活動和大腦皮層有重要的調節作用；多胺主要包括精胺和亞精胺，其在生物體的生長過程中能促進DNA、RNA和蛋白質的合成，加速生物體的生長發育。微量生物胺是生物體（包括人體）內的正常活性成分，在生物細胞中具有重要的生理功能。生物胺類成分活性很強，它們的存在也應該對吳茱萸的作用有貢獻，因此很有必要搞清楚它們存在的種類和含量。

由于大部分生物胺既沒有紫外吸收又無熒光，因此目前對生物胺的研究主要是進行衍生化后分析。生物胺的衍生試劑主要有丹磺酰氯（Dansylchloride）[6]、4二甲胺基苯基偶氮苯磺酰（Dabsyl chloride）[7]、2Chloroethylnitrosourea等[8]。丹磺酰氯應用最為普遍，生物胺的丹磺酰氯衍生物較為穩定， 并同時具有熒光特性和特異的紫外吸收，既可以用熒光檢測，也可以用紫外檢測[9]，生物胺與丹磺酰氯的反應式如下：

HPLC是檢測生物胺的常用方法，簡單有效。為此，本研究以丹磺酰氯為衍生試劑，衍生化色譜法鑒別和測定吳茱萸中的生物胺類成分。本研究在樣品的前處理過程中采用液液萃取步驟對樣品進行純化和富集，適用于測定成分復雜，生物胺含量更低的樣品。本方法具有通用性廣、靈敏度高、測定結果準確、穩定性好等優點。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

島津高效液相色譜儀（LC10A），配備二級管陣列檢測器； SHIMADZUC18色譜柱（150 mm × 4.6 mm × 5μm）；Milli Q Biocel超純水機（美國MilliPoreco公司）；移液槍（德國 Eppendorf公司）；粉碎機（黃驊市中興儀器有限公司）；SHAC恒溫振蕩器（國華企業）；Anke TDL40B離心機（Anke公司），Filter Unit濾膜（0.45 μm）。

乙腈 （色譜純）；丙酮、三氯乙酸、HClO4、丹磺酰氯（分析純）；甲胺，色胺，苯乙胺，腐胺，尸胺，組胺，5羥色胺，酪胺，亞精胺，精胺，均購于Aladdin公司。實驗用水為超純水，

吳茱萸樣品：果、葉、枝采自西安植物園，經西安植物園張瑩鑒定。

2.2 色譜條件

SHIMADZUC18色譜柱（150 mm × 4.6 mm× 5μm）； 檢測波長：334 nm； 流速：0.8 mL/min； 進樣量：20 μL； 柱溫：30 ℃。流動相：水（A）乙腈（B），采用梯度洗脫：0～7 min，45%～50% B； 7～25 min，50%～90% B； 25～35 min，90% B； 35～40 min，90%～45% B； 40～45 min，45% B。

2.3 標準溶液的配制

生物胺混合標準儲備液：準確稱取10種生物胺標準品各10 mg，用0.1 mol/L HCl溶解，定容至10 mL， 制成標準品儲備液備用。取10種生物胺單標儲備液各5 mL于100 mL棕色容量瓶中，用0.1 mol/L HCl定容，于4 ℃儲存備用。

衍生化試劑：精確稱取50 mg丹磺酰氯溶于丙酮，置于10 mL棕色容量瓶中，加入丙酮定容，于4 ℃儲存備用。

2.4 樣品的制備

吳茱萸葉、枝、果在60 ℃下烘干至恒重，粉碎，過50目篩（粒徑0.36 mm）。 分別準確稱取5.000 g于100 mL錐形瓶中， 加入30 mL 1 mol/L HCl，振蕩提取1 h，過濾上清液（提取3次，后兩次每次15 mL），合并濾液，4000 r/min離心8 min，上清液定容至50 mL。取20 mL提取液至50 mL離心管，用2 mol/L NaOH調至pH 12，加入正丁醇二氯甲烷（1 ∶ 1， V/V），渦旋1 min，4000 r/min離心8 min，萃取3次，每次10 mL，合并有機相，氮氣吹干，加1 mL 0.1 mol/L HCl溶解，取0.5 mL至5 mL棕色容量瓶，進行衍生化分析； 取0.4 mL至5 mL棕色容量瓶，作為空白對照。

0.5 mL 樣品液以及標準胺混合液，加入1 mL NaHCO3/Na2CO3（pH 10.5），0.5 mL丹磺酰氯，在空白對照組中加入0.5 mL丙酮代替丹磺酰氯。混勻后，60 ℃水浴45 min，加100 μL氨水除去多余的丹磺酰氯，停止反應[10]。室溫放置30 min后，以乙腈定容至5 mL，過0.45 μm濾膜，待測。

3 結果與討論

3.1 樣品的提取與衍生化

采用三氯乙酸[11]、HClO3 [12]、HCl [10]分別提取吳茱萸葉中的生物胺，結果見表1，綜合比較，HCl提取效果最好。因此本方法選擇HCl作為生物胺的提取溶劑。衍生溫度、時間和衍生劑用量是影響丹磺酰氯衍生效果的主要因素。反復實驗確定的優化條件為： 0.5 mL丹磺酰氯（5 g/L），60 ℃水浴45 min。

3.2 色譜條件的選擇

在190～800 nm波段對生物胺標準溶液衍生化后進行紫外掃描，最大吸收峰為251 nm，在334 nm處也有吸收，但是吳茱萸樣品在251 nm處干擾比較大，因此選取334 nm。

流動相的選擇對于生物胺的測定非常重要，本實驗采用水（A）乙腈（B）為流動相， 梯度洗脫：