高效液相色譜概述及其在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

曲學(xué)偉

摘 要：高效液相色譜技術(shù)以其高效、快速、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，使其在藥品的主成分含量及雜質(zhì)檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用，隨著該技術(shù)的不斷探索與發(fā)展，高效液相色譜法的作用將越來(lái)越重要。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；藥品檢驗(yàn)；主成分含量

高效液相色譜法是20世紀(jì)70年代開(kāi)始發(fā)展起來(lái)的高效、快速、準(zhǔn)確度高、適用范圍廣的一項(xiàng)化學(xué)分析及分離的技術(shù)，高效液相色譜具有高壓、高速、高效、高靈敏度、應(yīng)用范圍廣、柱子可反復(fù)使用以及樣品量少、容易回收等特點(diǎn)，受到人們廣泛的關(guān)注及重視[1-3]。該檢測(cè)方法也越來(lái)越成熟，得到各行業(yè)的認(rèn)可及利用，已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用[4-6]。高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗(yàn)中也被廣泛的應(yīng)用，其對(duì)于藥品中的主成分含量、藥品中的雜質(zhì)檢測(cè)等藥物分析中有著快速、準(zhǔn)確、高效的檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)及效果[7-9]。

1 概述

1.1高效液相色譜定義

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又稱(chēng)“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析[10，11]。

高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相） 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。高效液相色譜應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。

1.2 特點(diǎn)：

高相液相色譜具有高壓的特點(diǎn)，流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過(guò)色譜柱，必須對(duì)載液加高壓；高速的特點(diǎn)，分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時(shí)；高效的特點(diǎn)，分離效能高。可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍；高靈敏度的特點(diǎn)，紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，進(jìn)樣量在μL數(shù)量級(jí)；應(yīng)用范圍廣的特點(diǎn)，百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)；柱子可反復(fù)使用的特點(diǎn)，用一根柱子可分離不同化合物；樣品量少、容易回收的特點(diǎn)。樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備[12]。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜相比各有所長(zhǎng)，相互補(bǔ)充。高效液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等）中，如果流動(dòng)相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會(huì)顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。

2在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

高效液相色譜技術(shù)與很多先進(jìn)的檢測(cè)儀器融合在一起，在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。目前采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)相結(jié)合的方式去檢驗(yàn)藥品的主成分含量及相關(guān)雜質(zhì)等，大大提高了藥品檢驗(yàn)的效率和準(zhǔn)確性。

2.1 藥品主成分含量的測(cè)定

藥品的主成分含量可以通過(guò)高效液相色譜法得到高效準(zhǔn)確的檢測(cè)。原理為該物質(zhì)（的官能團(tuán)）在某一特定波長(zhǎng)下有吸收，并且，該物質(zhì)濃度和峰面積成正比。利用高效液相色譜法可以避免藥品輔料對(duì)主成分檢測(cè)的干擾，使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。

例如：使用高效液相色譜技術(shù)對(duì)米諾磷酸片中主成分米諾膦酸含量進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定方法簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。主要方法為將片劑研碎，取一定量用相應(yīng)試劑進(jìn)行溶解、過(guò)濾、上樣檢測(cè)。使用流動(dòng)相為焦磷酸鈉-四丁基溴化銨-甲醇，檢測(cè)波長(zhǎng)為226nm，結(jié)果顯示在0.104～31.283μg/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性良好，樣品檢測(cè)中重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定。

2.2 藥品中雜質(zhì)的測(cè)定

高效液相色譜法要求要正確地選擇色譜分離方法，首先必須盡可能多的了解樣品的有關(guān)性質(zhì)，其次必須熟悉各種色譜方法的主要特點(diǎn)及其應(yīng)用范圍[13]。選擇色譜分離方法的主要根據(jù)是樣品的相對(duì)分子質(zhì)量的大小，在水中和有機(jī)溶劑中的溶解度，極性和穩(wěn)定程度以及化學(xué)結(jié)構(gòu)等物理、化學(xué)性質(zhì)。

利用高效液相色譜技術(shù)對(duì)藥品中的雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，由于靈敏度高，相對(duì)比較小的可能一般檢測(cè)方法難以檢測(cè)出的雜質(zhì)，高效液相色譜可以定性及定量的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確，更接近真實(shí)值，簡(jiǎn)便、可靠、重復(fù)性高、線(xiàn)性關(guān)系良好、回收率理想，對(duì)藥品中的雜質(zhì)可以更好的反饋，對(duì)藥品的藥代及藥效動(dòng)力學(xué)的后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。進(jìn)而更好的保證藥品的使用安全，保證人民的生命安全[14]。

3結(jié)束語(yǔ)

高效液相色譜技術(shù)具有很大的應(yīng)用空間及發(fā)展前景，在藥品檢驗(yàn)的領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，它以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，大大提高了檢測(cè)的時(shí)效性及準(zhǔn)確性。高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗(yàn)中起著越來(lái)越重要的作用，尤其是在藥品主成分含量檢測(cè)、及藥品雜質(zhì)檢測(cè)[15，16]。高效液相色譜技術(shù)應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，具有很大的發(fā)展?jié)摿ΓS著該技術(shù)的不斷改進(jìn)與發(fā)展，高效液相色譜法的作用將越來(lái)越重要。

參考文獻(xiàn)

[1]張良曉.高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古石油化工，2005（7）：3-5.

[2]王緒明，白林.高效液相色譜及其聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用新進(jìn)展[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2004，20（6）：457-459.

[3]楊更亮，劉海燕.高效液相色譜整體柱在藥物分離分析中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)科學(xué)，2010，40（6）：631-640.

[4]周萍，李英華，鈕靈玲，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)蜂王漿中27種藥物殘留的同時(shí)測(cè)定[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2010，29（6）：539-543.

[5]王媛，張文韜，李斯特，等.固相萃取-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定減肥功能食品中五種違禁藥物[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，41（5）：873-876.

[6]陳麗芳. 高效液相色譜技術(shù)在食品藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理， 2016， 7（6）：115-116.

[7]田祥學(xué). 超高效液相色譜法在藥物檢驗(yàn)分析中的應(yīng)用[J]. 臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志， 2015（28）：5961-5962.

[8]郭倩倩. 采用反相高效液相色譜法測(cè)定降糖類(lèi)保健食品非法添加降糖化學(xué)藥品 檢驗(yàn)方法的研究[J]. 醫(yī)藥衛(wèi)生：文摘版， 2016（3）：00093-00093.

[9]李湛君， 范慧紅， 楊昭鵬，等. 高效液相色譜在生化藥質(zhì)控中的應(yīng)用（一）高效凝膠滲透色譜在多糖類(lèi)藥物質(zhì)控中的應(yīng)用（二）高效液相色譜代替生物測(cè)定對(duì)基因工程藥物的質(zhì)量控制[C]// 中國(guó)分析測(cè)試協(xié)會(huì)科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)發(fā)展回顧. 2015.

[10]楊建冬， 李存金. 高效液相色譜法定性檢測(cè)抗風(fēng)濕及鎮(zhèn)痛類(lèi)中成藥中氨基比林成分的研究[J]. 中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析， 2015（5）：609-611.

[11]羅達(dá)龍， 王華. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定輔助改善記憶類(lèi)保健食品中非法添加的17種化學(xué)藥物[J]. 中國(guó)食品衛(wèi)生雜志， 2015， 27（5）：546-549.

[12]熊亞群， 劉雁鳴. 高效液相色譜技術(shù)在藥用輔料檢測(cè)中的應(yīng)用新進(jìn)展[J]. 中南藥學(xué)， 2015（1）：61-64.

[13]鄔偉魁， 嚴(yán)倩茹. 超高效液相色譜法在藥物有關(guān)物質(zhì)分析中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)藥物評(píng)價(jià)， 2015（5）：277-279.

[14]王艷紅， 李冰， 陳真. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定止咳平喘類(lèi)中成藥中違規(guī)添加的磺胺嘧啶等7種化學(xué)抗菌物質(zhì)[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志， 2014， 49（8）：683-687.

[15]王琰， 薛晶， 王悅，等. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液中聚氧乙烯二硬脂酰磷脂酰乙醇胺與氫化大豆磷脂酰膽堿的含量[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志， 2015， 50（15）：1341-1346.

[16]梁慧敏， 歐妮. 高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法測(cè)定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷含量[J]. 中國(guó)藥業(yè)， 2016， 25（5）：55-57.