超高效液相色譜串聯質譜法測定雞肉與雞蛋中6種他汀類藥物殘留

陳吉漢等

摘 要 建立了超高效液相色譜串聯質譜法（UPLCMS/MS）測定雞肉與雞蛋中6種他汀類藥物殘留量的方法。采用BEH C18色譜柱， 以甲醇0.1%甲酸5 mmol乙酸銨為流動相， 梯度洗脫分離， 在電噴霧正負離子模式下以多反應監測（MRM）方式檢測， 外標法定量。6種他汀類藥物檢出限（LOD， S/N=3）和定量限（LOD， S/N=10）分別為0.1～0.5 μg/kg和0.3～2.0 μg/kg， 在1.0～100 μg/kg濃度范圍內線性良好， 相關系數大于0.9910；雞肉和雞蛋樣品中20 μg/kg水平的加標回收率分別為80.9%～97.2%和79.0%～87.2%， 相對標準偏差分別為1.3%～10.2%和1.5%～10.7%。本方法應用于市場實際樣品檢測， 尚未檢出陽性樣品。

關鍵詞 液相色譜串聯質譜； 他汀類藥物； 藥物殘留； 雞肉； 雞蛋

1 引 言

他汀類藥物泛指羥甲基戊二酰輔酶A（HMGCoA）還原酶抑制劑， 此類藥物通過競爭性抑制內源性膽固醇合成限速酶（HMGCoA）還原酶， 阻斷細胞內羥甲戊酸代謝途徑， 使細胞內膽固醇合成減少， 從而反饋性刺激細胞膜表面（主要為肝細胞）低密度脂蛋白受體數量和活性增加， 降低血清膽固醇水平。因為他汀類藥物具有降低血清、肝臟、主動脈中膽固醇功效， 近幾年， 他汀類藥物開始用于降低家禽肌肉和蛋中膽固醇含量， 研究表明， 喂食他汀類藥物能顯著降低家禽血漿和蛋中膽固醇的含量 [1～4 ]。相比較β內酰胺類、大環內酯類抗生素和氟喹諾酮類抗菌素這些經常使用并且殘留檢測也很成熟的獸藥而言 [5，6 ]， 他汀類藥物在動物生產方面的應用較少， 國內外對于他汀類藥物在動物源性食品中殘留的情況也鮮有報道。動物體內試驗與人類臨床試驗表明， 服用他汀類藥物后， 該類藥物可以較長時間以原藥形式存在于血漿之中 [7 ]， 且他汀類藥物在高溫、光照情況下也不易分解 [8，9 ]， 因此在食用含有他汀類藥物的禽類產品后， 有可能導致他汀類藥物在人體內富集， 由于他汀類藥物在降脂的同時， 使用不當也可能會影響肝腎功能，也可能引發橫紋肌溶解癥等 [10～14 ]， 甚至會有導致腎衰竭的風險 [15 ]， 這使得建立起一套對肉蛋制品中他汀類藥物的檢測技術勢在必行。

本研究以雞肉與雞蛋為基質， 建立超高效液相色譜串聯質譜法（UPLCMS/MS）同時檢測雞肉和雞蛋中辛伐他汀Simvastatin（SIM）、洛伐他汀Lovastatin（LOV）、西立伐他汀Cerivastatin（CER）、氟伐他汀Fluvastatin（FLV）、普伐他汀Pravastatin（PRA）以及阿托伐他汀Atorvastatin（ATO）6種他汀類藥物殘留的方法。本方法簡便、快速， 可滿足其它家禽肉蛋制品中他汀類藥物的檢測， 可為建立其它動物源性食品中他汀類藥物殘留檢測提供參考。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

TQS超高效液相色譜串聯四極桿質譜聯用儀（美國Waters公司）；MilliQ純水儀（美國Millipore公司）；高速冷凍離心機（美國Sigma公司）；R205旋轉蒸發儀（瑞士BCHI公司）；辛伐他汀、洛伐他汀、西立伐他汀鈉、氟伐他汀鈉鹽、普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣（德國Dr.Ehrenstorfer公司）。

2.2 標準工作配制

將各標準品用甲醇配制成質量濃度為1 mg/L的標準儲備液， 并根據需要用甲醇稀釋成適當質量濃度的混合標準工作溶液， 于棕色儲存瓶中保存。

2.3 樣品前處理

稱取切碎勻漿過的雞肉樣品或者是100 ℃水煮5 min固態雞蛋碎末2.000 g 于50 mL 離心管中， 加入10 mL 5%氨化甲醇。渦旋振蕩5 min至充分混勻， 超聲提取10 min， 10000 r/min離心10 min。吸取5 mL上清液， 35 ℃下旋蒸至干。用1 mL乙腈5 mmol乙酸銨（1 ∶ 9， V/V）溶液溶解并稀釋， 用聚四氟乙烯過濾器進行過濾， 供UPLCMS/MS測定。

2.3 色譜條件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18液相色譜柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：A為甲醇， B為5 mmol乙酸銨0.1%甲酸； 梯度洗脫：0～14 min， 90%～5%B；14～17 min， 5%B；17～18 min， 5%～90%B；18～20 min， 90%B。流速0.3 mL/min；進樣體積10 μL。

摘 要 建立了超高效液相色譜串聯質譜法（UPLCMS/MS）測定雞肉與雞蛋中6種他汀類藥物殘留量的方法。采用BEH C18色譜柱， 以甲醇0.1%甲酸5 mmol乙酸銨為流動相， 梯度洗脫分離， 在電噴霧正負離子模式下以多反應監測（MRM）方式檢測， 外標法定量。6種他汀類藥物檢出限（LOD， S/N=3）和定量限（LOD， S/N=10）分別為0.1～0.5 μg/kg和0.3～2.0 μg/kg， 在1.0～100 μg/kg濃度范圍內線性良好， 相關系數大于0.9910；雞肉和雞蛋樣品中20 μg/kg水平的加標回收率分別為80.9%～97.2%和79.0%～87.2%， 相對標準偏差分別為1.3%～10.2%和1.5%～10.7%。本方法應用于市場實際樣品檢測， 尚未檢出陽性樣品。

關鍵詞 液相色譜串聯質譜； 他汀類藥物； 藥物殘留； 雞肉； 雞蛋

1 引 言

他汀類藥物泛指羥甲基戊二酰輔酶A（HMGCoA）還原酶抑制劑， 此類藥物通過競爭性抑制內源性膽固醇合成限速酶（HMGCoA）還原酶， 阻斷細胞內羥甲戊酸代謝途徑， 使細胞內膽固醇合成減少， 從而反饋性刺激細胞膜表面（主要為肝細胞）低密度脂蛋白受體數量和活性增加， 降低血清膽固醇水平。因為他汀類藥物具有降低血清、肝臟、主動脈中膽固醇功效， 近幾年， 他汀類藥物開始用于降低家禽肌肉和蛋中膽固醇含量， 研究表明， 喂食他汀類藥物能顯著降低家禽血漿和蛋中膽固醇的含量 [1～4 ]。相比較β內酰胺類、大環內酯類抗生素和氟喹諾酮類抗菌素這些經常使用并且殘留檢測也很成熟的獸藥而言 [5，6 ]， 他汀類藥物在動物生產方面的應用較少， 國內外對于他汀類藥物在動物源性食品中殘留的情況也鮮有報道。動物體內試驗與人類臨床試驗表明， 服用他汀類藥物后， 該類藥物可以較長時間以原藥形式存在于血漿之中 [7 ]， 且他汀類藥物在高溫、光照情況下也不易分解 [8，9 ]， 因此在食用含有他汀類藥物的禽類產品后， 有可能導致他汀類藥物在人體內富集， 由于他汀類藥物在降脂的同時， 使用不當也可能會影響肝腎功能，也可能引發橫紋肌溶解癥等 [10～14 ]， 甚至會有導致腎衰竭的風險 [15 ]， 這使得建立起一套對肉蛋制品中他汀類藥物的檢測技術勢在必行。

本研究以雞肉與雞蛋為基質， 建立超高效液相色譜串聯質譜法（UPLCMS/MS）同時檢測雞肉和雞蛋中辛伐他汀Simvastatin（SIM）、洛伐他汀Lovastatin（LOV）、西立伐他汀Cerivastatin（CER）、氟伐他汀Fluvastatin（FLV）、普伐他汀Pravastatin（PRA）以及阿托伐他汀Atorvastatin（ATO）6種他汀類藥物殘留的方法。本方法簡便、快速， 可滿足其它家禽肉蛋制品中他汀類藥物的檢測， 可為建立其它動物源性食品中他汀類藥物殘留檢測提供參考。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

TQS超高效液相色譜串聯四極桿質譜聯用儀（美國Waters公司）；MilliQ純水儀（美國Millipore公司）；高速冷凍離心機（美國Sigma公司）；R205旋轉蒸發儀（瑞士BCHI公司）；辛伐他汀、洛伐他汀、西立伐他汀鈉、氟伐他汀鈉鹽、普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣（德國Dr.Ehrenstorfer公司）。

2.2 標準工作配制

將各標準品用甲醇配制成質量濃度為1 mg/L的標準儲備液， 并根據需要用甲醇稀釋成適當質量濃度的混合標準工作溶液， 于棕色儲存瓶中保存。

2.3 樣品前處理

稱取切碎勻漿過的雞肉樣品或者是100 ℃水煮5 min固態雞蛋碎末2.000 g 于50 mL 離心管中， 加入10 mL 5%氨化甲醇。渦旋振蕩5 min至充分混勻， 超聲提取10 min， 10000 r/min離心10 min。吸取5 mL上清液， 35 ℃下旋蒸至干。用1 mL乙腈5 mmol乙酸銨（1 ∶ 9， V/V）溶液溶解并稀釋， 用聚四氟乙烯過濾器進行過濾， 供UPLCMS/MS測定。

2.3 色譜條件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18液相色譜柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：A為甲醇， B為5 mmol乙酸銨0.1%甲酸； 梯度洗脫：0～14 min， 90%～5%B；14～17 min， 5%B；17～18 min， 5%～90%B；18～20 min， 90%B。流速0.3 mL/min；進樣體積10 μL。

摘 要 建立了超高效液相色譜串聯質譜法（UPLCMS/MS）測定雞肉與雞蛋中6種他汀類藥物殘留量的方法。采用BEH C18色譜柱， 以甲醇0.1%甲酸5 mmol乙酸銨為流動相， 梯度洗脫分離， 在電噴霧正負離子模式下以多反應監測（MRM）方式檢測， 外標法定量。6種他汀類藥物檢出限（LOD， S/N=3）和定量限（LOD， S/N=10）分別為0.1～0.5 μg/kg和0.3～2.0 μg/kg， 在1.0～100 μg/kg濃度范圍內線性良好， 相關系數大于0.9910；雞肉和雞蛋樣品中20 μg/kg水平的加標回收率分別為80.9%～97.2%和79.0%～87.2%， 相對標準偏差分別為1.3%～10.2%和1.5%～10.7%。本方法應用于市場實際樣品檢測， 尚未檢出陽性樣品。

關鍵詞 液相色譜串聯質譜； 他汀類藥物； 藥物殘留； 雞肉； 雞蛋

1 引 言

他汀類藥物泛指羥甲基戊二酰輔酶A（HMGCoA）還原酶抑制劑， 此類藥物通過競爭性抑制內源性膽固醇合成限速酶（HMGCoA）還原酶， 阻斷細胞內羥甲戊酸代謝途徑， 使細胞內膽固醇合成減少， 從而反饋性刺激細胞膜表面（主要為肝細胞）低密度脂蛋白受體數量和活性增加， 降低血清膽固醇水平。因為他汀類藥物具有降低血清、肝臟、主動脈中膽固醇功效， 近幾年， 他汀類藥物開始用于降低家禽肌肉和蛋中膽固醇含量， 研究表明， 喂食他汀類藥物能顯著降低家禽血漿和蛋中膽固醇的含量 [1～4 ]。相比較β內酰胺類、大環內酯類抗生素和氟喹諾酮類抗菌素這些經常使用并且殘留檢測也很成熟的獸藥而言 [5，6 ]， 他汀類藥物在動物生產方面的應用較少， 國內外對于他汀類藥物在動物源性食品中殘留的情況也鮮有報道。動物體內試驗與人類臨床試驗表明， 服用他汀類藥物后， 該類藥物可以較長時間以原藥形式存在于血漿之中 [7 ]， 且他汀類藥物在高溫、光照情況下也不易分解 [8，9 ]， 因此在食用含有他汀類藥物的禽類產品后， 有可能導致他汀類藥物在人體內富集， 由于他汀類藥物在降脂的同時， 使用不當也可能會影響肝腎功能，也可能引發橫紋肌溶解癥等 [10～14 ]， 甚至會有導致腎衰竭的風險 [15 ]， 這使得建立起一套對肉蛋制品中他汀類藥物的檢測技術勢在必行。

本研究以雞肉與雞蛋為基質， 建立超高效液相色譜串聯質譜法（UPLCMS/MS）同時檢測雞肉和雞蛋中辛伐他汀Simvastatin（SIM）、洛伐他汀Lovastatin（LOV）、西立伐他汀Cerivastatin（CER）、氟伐他汀Fluvastatin（FLV）、普伐他汀Pravastatin（PRA）以及阿托伐他汀Atorvastatin（ATO）6種他汀類藥物殘留的方法。本方法簡便、快速， 可滿足其它家禽肉蛋制品中他汀類藥物的檢測， 可為建立其它動物源性食品中他汀類藥物殘留檢測提供參考。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

TQS超高效液相色譜串聯四極桿質譜聯用儀（美國Waters公司）；MilliQ純水儀（美國Millipore公司）；高速冷凍離心機（美國Sigma公司）；R205旋轉蒸發儀（瑞士BCHI公司）；辛伐他汀、洛伐他汀、西立伐他汀鈉、氟伐他汀鈉鹽、普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣（德國Dr.Ehrenstorfer公司）。

2.2 標準工作配制

將各標準品用甲醇配制成質量濃度為1 mg/L的標準儲備液， 并根據需要用甲醇稀釋成適當質量濃度的混合標準工作溶液， 于棕色儲存瓶中保存。

2.3 樣品前處理

稱取切碎勻漿過的雞肉樣品或者是100 ℃水煮5 min固態雞蛋碎末2.000 g 于50 mL 離心管中， 加入10 mL 5%氨化甲醇。渦旋振蕩5 min至充分混勻， 超聲提取10 min， 10000 r/min離心10 min。吸取5 mL上清液， 35 ℃下旋蒸至干。用1 mL乙腈5 mmol乙酸銨（1 ∶ 9， V/V）溶液溶解并稀釋， 用聚四氟乙烯過濾器進行過濾， 供UPLCMS/MS測定。

2.3 色譜條件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18液相色譜柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：A為甲醇， B為5 mmol乙酸銨0.1%甲酸； 梯度洗脫：0～14 min， 90%～5%B；14～17 min， 5%B；17～18 min， 5%～90%B；18～20 min， 90%B。流速0.3 mL/min；進樣體積10 μL。