胃癌組織中Her－2／neu基因的表達及其臨床意義＊

劉春娜 趙承梅 馬菲菲 李衛東

1 天津醫學高等專科學校，天津市 300222； 2 天津醫科大學總醫院

Her－2／neu基因位于17q21染色體上，毗鄰拓撲異構酶Ⅱa基因，作為癌基因表達在細胞膜上［1，2］。最近研究表明多種惡性腫瘤中都有Her－2／neu基因的表達，如乳腺癌中陽性表達百分比10%～34%，并與預后以及化療和內分泌治療的效果關系密切［3］。目前，Her－2／neu基因已成為乳腺癌選擇應用曲妥珠單抗（Herceptin）治療重要的生物分子靶點。Herceptin是一種單克隆抗體，通過影響Her－2／neu基因的結構進行靶向治療，對于Her－2／neu基因表達陽性的乳腺癌及其轉的患者，曲妥珠單抗可以提高患者的生存率［4］。而目前關于Her－2／neu基因與胃癌關系的研究較少，因此，深入研究Her－2／neu基因在胃癌組織中的表達，不僅有助于進一步了解胃癌的發生與發展，更為胃癌的分子靶向治療提供了新的可能。

1 對象與方法

1.1 實驗材料和對象

1.1.1 標本資料：收集天津醫科大學總醫院2006年1月－2011年12月外科手術切除且經病理科明確診斷并存檔的蠟塊標本342例及全部臨床病例資料，所有病例術前均未行放療化療。男236例（占69.01%），女106例（占30.99%）。患者年齡19～85歲，平均年齡60.07歲。

1.1.2 抗體及主要試劑：鼠抗人c－erbB－2單克隆抗體（ZM－0065，北京中杉公司）；二抗HRP（辣根過氧化物酶）（北京中杉公司）；DAB顯色試劑盒（ZLI－9032，北京中杉公司）。

1.2 實驗方法 免疫組織化學SP法染色。脫蠟、水化，3%過氧化氫孵育10min，以消除內源性過氧化物酶的活性。抗原修復，滴加5%BSA封閉液，室溫30min。甩去血清，不洗，每張切片滴加抗體50μl（抗體按1∶200經PBS稀釋），置4℃冰箱中過夜，孵育18h。取出置于室內復溫30min，用PBS（pH 7.2～7.6）洗5min×3次。甩去PBS液，滴加生物素標記的羊抗鼠IgG 50μl，37℃恒溫箱孵育30min，PBS洗3min×3次。DAB顯色，適時以蒸餾水充分沖洗以中止反應。蘇木素復染2min，沖洗返藍。脫水、封片，中性樹膠封片、鏡檢。

1.3 結果判定 以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗設為陰性對照。在200倍光鏡下隨機選擇5～10個視野，計數100～200個癌細胞，計算出陽性細胞百分率。染色結果判定：染色陽性者可見細胞膜和／或胞漿黃染。采用二級計分法，陽性細胞百分率及計分：＜5%，0分；5%～25%，1分；26%～50%，2分；51%～75%，3分；＞75%，4分。染色強度分類及計分：淡黃色，1分；黃或深黃色，2分；褐或棕褐色，3分。兩者計分相乘≥2為染色陽性。

1.4 統計學分析 Her－2／neu基因與胃癌臨床特征和病理參數關系的評估采用卡方檢驗或fisher精確概率法檢驗。Kaplan－Meier法描繪生存曲線，組間生存率比較用Log－Rank（Mantel－Cox）檢驗。所有數據均應用SPSS15.0統計軟件進行分析，P＜0.05表示有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組織中Her－2／neu基因的表達 Her－2／neu基因蛋白主要定位于胃癌細胞胞膜和胞漿中（圖1）。342例胃癌中，Her－2／neu基因表達陽性90例（26.32%），陰性252例（73.68%）。

圖1 胃癌Her－2／neu基因免疫組化染色結果

2.2 Her－2／neu基因表達水平與胃癌臨床特征和病理參數的關系 在組織類型來源、分化程度、浸潤程度的不同組別之間，胃癌組織中Her－2／neu基因陽性表達均無統計學意義（P＞0.05）。而在有無淋巴結轉移和遠處轉移的兩組間比較，Her－2／neu基因在胃癌組織的表達具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.3 胃癌組織中Her－2／neu基因染色與預后（生存期）的關系 病例資料完整的342例隨訪截至2013年3月，失訪26例，失訪率7.6%，術后1年、3年、5年生存率分別為76.02%、54.67%、46.22%，中位生存時間45個月。Her－2／neu基因染色陰性患者的中位生存時間為57個月，陽性患者為32個月。Log－Rank（Mantel－Cox）檢驗結果顯示：兩組間生存時間的差異具有統計學意義（χ2＝45.310，P＝0.000，見圖2）。

表1 Her－2／neu基因表達與胃癌臨床病理指標的關系

圖2 不同組別患者Her－2／neu基因表達生存曲線圖

3 討論

3.1 Her－2／neu基因在胃癌中的表達 本研究中利用免疫組化SP法檢測342例胃癌標本，Her－2／neu表達陽性率為26.32%，與文獻報道的結果相近［5～8］，提示Her－2／neu與胃癌發生與發展密切相關［9］。胃癌組織中Her－2／neu基因陽性表達在組織學類型、分化程度、浸潤程度的不同組別之間差異均無統計學意義（P＞0.05）。而在有無淋巴結轉移和遠處轉移兩組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05）。上述結果表明，Her－2／neu基因在胃癌淋巴結轉移及遠處轉移過程中被激活，并在腫瘤的侵襲過程中具有一定的促進作用。其參與胃癌的淋巴結轉移及遠處轉移的機制，可能是由于Her－2／neu基因可以激活STAT3，并且Her－2／neu基因可以促進HRG引發MMP－7轉錄水平的上調和蛋白分泌的增加，而MMP－7又可激活Her－2／STAT3，更進一步加強了Her－2／neu基因促進腫瘤浸潤作用［10］。

3.2 Her－2／neu基因在胃癌中的表達與胃癌預后的相關性 本研究表明，Her－2／neu基因表達陰性組與陽性組比較，患者的生存時間顯著延長，具有統計學意義（P＜0.05）。Her－2／neu基因表達與不良預后相關［11～13］，這可能與其抑制腫瘤凋亡有關，Her－2／neu基因主要通過PI3K／Akt途徑抑制腫瘤細胞的凋亡，使定位于胞核的p21（WAF1／CIP1）的145位蘇氨酸磷酸化，磷酸化的p21（WAF1／CIP1）易于在胞漿中定位，且能抑制細胞凋亡。Her－2／neu基因通過上調抑制凋亡蛋白bcl－2和生存素的表達，腫瘤細胞凋亡受抑制，通過該途徑還可使NFκB、p53結合蛋白（Mdm－2）、原凋亡蛋白－9等磷酸化，進而介導細胞抗凋亡［14］。

3.3 Her－2／neu基因作為胃癌治療靶點的展望

近年來，隨著抗Her－2單克隆抗體曲妥珠單抗（Herceptin）在乳腺癌分子靶向治療中的成功應用，人們開始探討分子靶向藥物治療胃癌的價值，有研究報道應用曲妥珠單抗聯合化療藥物對伴有Her－2／neu基因擴增的胃癌細胞具有明顯抑制其生長的作用［15］。Roukos［16］等認為，Her－2應該作為進展期胃癌的一個診斷指標，他們還發現Trastuzumab聯合化療能夠提高胃癌患者的總生存率，這可作為治療Her－2／neu基因陽性表達疾病的一個新的標準化方案。因此，Her－2／neu基因有望成為治療胃癌的有效分子生物靶點，從而使Her－2／neu基因在胃癌分子靶向治療領域顯示出良好的臨床應用前景。

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