地中海貧血產前篩查及基因診斷的研究

陳文麗

（廣東省惠州市惠東縣稔山衛生院，廣東 惠州 516347）

地中海貧血產前篩查及基因診斷的研究

陳文麗

（廣東省惠州市惠東縣稔山衛生院，廣東 惠州 516347）

目的調查分析本地區孕婦地中海貧血發病率、基因類型，探尋地中海貧血產前可靠的診斷證據。方法對2009年3月至2013年2月4250例在我院所有進行產前檢查的孕婦中開展廣泛的血液學檢查，對檢測陽性的患者進行基因檢查，并對孕婦的配偶進行篩查。對夫妻雙方都患有同種類型地中海貧血的進行產前診斷，懷疑為β地中海貧血的夫妻進行β基因突變測序、比對，探究未知的突變基因。結果4250例孕婦中確診地中海貧血有248例，發病率為5.8%，其中α地中海貧血有130例，發病率3.05%；β地中海貧血患者有118例，發病率2.73%。產前診斷重型地中海貧血患兒8例。血液學檢測RBC、Hb、MCV、RDW、HbA2在α、β、α/β和β/β間差異有統計學意義（P＜0.05）。結論本地區α地中海貧血發病率比α地中海貧血高，血液學指標中的紅細胞參數以及血紅蛋白定量檢測是篩查本病的重要指標。通過對孕婦進行地中海貧血的產前篩查，可以確診重癥患兒來及時終止妊娠，避免重癥患兒的出生。

地中海貧血；產前篩查；基因診斷；治療研究

地中海貧血（Thalassemia）是一種嚴重影響人類健康和患兒出生質量的溶血性疾病。其病理基礎為珠蛋白基因缺陷從而造成珠蛋鏈合成受限，使得血紅蛋白四聚體的α-鏈/α-鏈失衡，從而導致紅細胞破裂，發生溶血[1]。全球約有隱形攜帶者18億，每出生100萬/年基因缺陷患兒中，表現為重癥溶血性貧血重癥患兒占20萬以上[2,3]。為提高我院及本地區新生兒圍生期出生質量，探討以預防主的防治方案，實現優生，我們對本院篩查的結果進行了分析總結，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2009年3月至2013年2月在我院所有進行產前檢查的孕婦4250例，紅細胞指標異常并排除缺鐵及其他貧血疾病。對孕婦進行血常規和血紅蛋電泳分析，并對248例地貧表型陽性者進基因檢測。

1.2 研究方法用日本System KX-21自動血細胞分析儀及其配套的稀釋液和溶血素試劑測定，實驗前嚴格按照操作規程進行質控，標本為枸椽酸鈉靜脈抗凝血1 mL。應用美國Helena公司的Spifecombo血紅蛋白電泳儀，使用與儀器配套的Spife ALKAL I NE（pH816）Hb瓊脂凝膠板。掃描儀是Epson公司Quick2scan2000。篩查血紅蛋白（Hb）、平均血紅蛋白（MCH）、紅細胞數（RBC）、平均紅細胞體積（MCV）、紅細胞體積分布寬度（RDW），測定血清鐵蛋白、血紅蛋白A2（HbA2）及抗堿血紅蛋白（HbF）的含量。Hb＜110 g/L、MCH＜25 pg、MCV＜80 fl、RBC/MCV＞6、RBC/Hb＞27.7、RDW＞15.0%，血清鐵蛋白正常，示地中海貧血篩查陽性。血紅蛋白電泳HbA2＜2.5%，示A地貧表型陽性；HbA2/3.5%或/和HbF＞2%，示β地貧表型陽性；2.5%＜HbA2＜3.5%。

1.3 基因診斷

采用益生堂生物企業有限公司提供α、β地貧基因診斷試劑盒，按說明檢測正常α基因和-SEA、-A3.7、-A4.23種常見缺失型α地中海貧血和HbCS、HbQS、HbWS、AvCD30、AvCD31和AvCD596種非缺失型α地貧以及17種β地中海貧血：CD41-42（-TCTT）、IVS-2-654（CyT）、TATAbox-28（AyG）、CD71-72（+A）、CD17（AyT）、CD26（GyA）、CD31（-C）、CD27-28（+C）、IVS-?-1（GyT）、CD43（GyT）、TATAbox-32（CyA）、TATAbox-30（TyC）、CD14-15（+G）、CAP+40～+43（-AACC）、TATAbox-29（AyG）、起始密碼子Int（TyG）、IVS-?-5（GyC）；試劑盒未診斷的篩查指標疑似β-地中海貧血的病例，進行β基因的突變熱點測序，設計引物Beg-F1：5c-CAGGTACGGCTGTCATCA-3c；IV654-R1：5c-AGCGAGCTTAGTGATACTTGTG-3c，按96 e 3 miny（96e30s，60e45s，72e2min）@30循環y72e10min擴增β基因的3個外顯子和2個內含子共1613 bp，送上海英駿公司進行正、反向測序，Accelrys License Pack進行核酸序列比對。

1.4 統計學分析

采用SPSS16.0進行統計分析。

2 結 果

4250例孕婦中確診地中海貧血有248例，發病率為5.8%，其中α地中海貧血有130例，發病率3.05%；β地中海貧血患者有118例，發病率2.73%。產前診斷重型地中海貧血患兒8例。血液學檢測RBC、Hb、MCV、RDW、HbA2在α、β、α/β和β/β間差異有統計學意義（P＜0.05）。對248例地中海貧血患者或基因攜帶者進行基因診斷，其中α地中海貧血130例β地中海貧血118例，檢出β基因IVS-2nt654（CyT）基因突變50例，CD41-42（-CTTT）基因突變41例，TATAboxnt-28（AyG）突變14例，CD17（AyT）突變13例，CD71-72（+A）突變2例，CD27-28（+C）突變2例，CD43（GyT）突變2例，TATAboxnt-29（AyG）突變1例，IVS-1nt1（GyT）突變1例，BE2例，結果不明6例。

3 討 論

地中海貧血按受累血紅蛋白鏈的位置分α、β型地中海貧血，篩查指標RBC、MCV、RDW、HbA2能反映基因型與表型之間的關系。MCV＜80f，l80%為缺鐵性貧血與地中海貧血，是篩查首選指標[3-5]。

地中海貧血目前尚沒有很好的治療方法，因而避免重癥地中海貧血患兒的出生是控制本病的最佳方法。預防計劃早已在地中海地區（意大利、希臘、塞浦路斯和撒丁尼亞島等）取得了較好成績[6]。由于地中海貧血在深圳市發病率高，開展有關地中海貧血的宣傳教育和孕婦篩查對指導優生。本研究中調查了地中海貧血有248例，發病率為5.8%，其中α地中海貧血有130例，發病率3.05%；β地中海貧血患者有118例，發病率2.73%。產前診斷重型地中海貧血患兒8例。血液學檢測RBC、Hb、MCV、RDW、HbA2在α、β、α/β和β/β間差異有統計學意義（P＜0.05）。對指導本地區地中海貧血篩查及避免重癥患兒出生有重要意義。

[1] Sivestrom E,Bianco I.A highly cost effective method of mass screening for thalassaemia [J].Br Med J,1983,286(6370):1007-1009.

[2] 王永才.血液病確診化驗診斷[M].大連:大連出版社,1994:173.

[3] 鄧家棟,楊崇禮,楊天楹.血液病實驗室診斷[M].天津:天津科技出版社,1985:312.

[4] 張之南.血液病診斷標準及療效標準[M].天津:天津科技出版社,1991:44.

[5] Zhang JZ,Xu XM,Ma WF,et al.Arapid reverse dotblot assay for all 18B-thalassemia in Chinese population[J].J Med Coll PLA,1993, 8(3):213.

[6] 廣東省血液病協作組.廣東省253267人的血紅蛋白病調查研究[J].廣東醫學,1985,6(1):4.

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B

1671-8194（2014）13-0277-02