大葉小檗體外對細菌抑菌活性的研究

中圖分類號：R37 文獻標識碼：A 文章編號：1005-0515（2013）10-030-02

大葉小檗（Berberis amurensis Rupr.）為小檗科小檗屬植物，又名三顆針。主要分布在我國東北，是東北地區重要的藥用植物[1-3]。中藥主要以其根和根皮入藥，是長白山區民間的常用藥材[4]。具有消炎止痛， 解毒清火等功效。果實可健胃，根皮也可以外用[5]。本實驗通過研究大葉小檗體外抑菌活性實驗，觀察其消炎抗菌[6]作用及對革蘭氏陽性菌敏感情況[7]。為開發其藥用價值提供依據。

1材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1供試菌種 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、沙門氏菌，實驗所用菌種均來自吉林農業大學食品科學學院。

1.1.2儀器與試劑 DHG-9140A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精密實驗設備有限公司）；SHZ-Ⅲ循環水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）YXQ-LS-5OSⅡ 立式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅實業有限公司醫療設備廠）HH·CP-01W二氧化碳細胞培養箱（上海博迅實業有限公司醫療設備廠）大葉小檗采集于長白山，由吉林農業大學包海英教授鑒定為大葉小檗根。供試陽性藥阿米卡星（批號為070905），江蘇吳中醫藥集團有限公司蘇州第六制藥廠；氯霉素（批號為0806092），天津藥業集團新鄭股份有限公司；硫酸慶大霉素（批號為0709302），天津藥業集團新鄭股份有限公司；供試陽性藥均于福百草藥房內購買。

1.2方法

1.2.1提取物配制：取大葉小檗塊根2.0kg粉碎成粗粉，用適量體積的75%乙醇浸漬提取三次，每次10h，合并提取液過濾，減壓濃縮后置水浴鍋上至浸膏狀，取適量浸膏密封保存備用。將剩余的浸膏用2% 鹽酸將溶解，靜置24h后取，取其上清液用與酸水等體積的氯仿重復萃取，至完全除去雜質，再用氨水調pH值至10，之后用等體積的氯仿萃取，使樣品與生物堿化學檢識均呈陰性。收集氯仿層并濃縮蒸干至浸膏狀，即得總生物堿。分別稱取定量的大葉小檗75%乙醇提取物、總生物堿于研缽中，用適量的生理鹽水及少量的吐溫-80研磨，至樣品與生理鹽水充分混合成混懸液，并以生理鹽水及吐溫-80混合液為空白對照，以上樣品配置好后均需密封低溫保存。

1.2.2供試陽性藥的篩選 在無菌條件下精確分別吸取200μl菌液滴于平板培養基上。采用紙片擴散法，做3個平行，密封好后置于CO2恒溫培養箱中，在37℃下培養16～18小時后觀察每個平板上的抑菌圈，并用十字交叉法測量其直徑。

通過表1-1的數據可知，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、沙門氏菌抑菌效果最佳陽性藥均為阿米卡星，濃度為1.28 mg/mL。

1.2.3 受試樣品抑菌實驗方法 精確吸取上述四種供試菌液滴于平板培養基上。采用紙片擴散法，做3個平行，密封好后置于CO2恒溫培養箱中，在37℃下培養16～18小時后觀察并測量各抑菌圈直徑，記錄數據。

1.2.4統計學處理：結果要根據抑菌圈直徑（mm）以及抑菌率（%）來判定藥物的抑菌活性，抑菌率計算公式為：

所得數據均要用 ±s表示，并通過SPSS18.0進行統計分析。

2 結果

如表1-2所示，通過實驗證明大葉小檗75%提取物，大葉小檗總生物堿對各受試菌種有較好的抑菌效果，且隨著受試樣品濃度的增加，抑菌率呈上升趨勢。

4討論

本論文采用紙片法對大葉小檗75%乙醇提取物及總生物堿對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌及沙門氏菌的抑菌活性進行了研究，結果顯示受試樣品對四種菌均有較好的抑菌效果，且隨著受試樣品濃度的增加，抑菌率呈上升趨勢。

根據實驗數據推測大葉小檗75%乙醇提取物中有類似生物堿某個或幾個單體具有抗菌作用。大葉小檗全株含生物堿， 根皮含大量小檗堿[8]。小檗堿能抑制核因子B（ NF- kB ）激活[9]， 越來越多的研究結果證實了NF- kB 具有調節炎性細胞因子轉錄的作用[10]。大葉小檗確實表現出一定的消炎抗菌作用。但大葉小檗的消炎抗菌作用的具體機制尚不清楚， 可進一步對其進行研究。

參考文獻：

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