IL—10啟動子基因在云南傣族、哈尼族人群中的遺傳多態性

[摘要] 目的 分析云南省西雙版納地區傣族和哈尼族人群IL-10啟動子基因多態性的分布情況。 方法 運用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜技術檢測傣族和哈尼族人群IL-10啟動子rs1800871和rs1800896位點基因型及等位基因頻率。結果 傣族與哈尼族人群rs1800871和rs1800896位點基因型與等位基因分布頻率顯著不同，差異有統計學意義（rs1800871：χ2分別為7.023和7.373，P分別為0.030和0.007；rs1800896：χ2分別為6.184和5.870，P分別為0.013和0.015）。 結論 IL-10啟動子rs1800871和rs1800896多態性位點基因型和等位基因分布頻率具有民族、種族差異。

[關鍵詞] 白細胞介素10；啟動子；基因多態性；少數民族

[中圖分類號] RQ343.12 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）20-0034-03

不同人群具有不同的遺傳背景，人類基因多態性造成了不同人群對疾病易感性的差異。白細胞介素10（interleukin-10，IL-10）是由Th2細胞產生的一種具有多效性的免疫調節性細胞因子，對機體的免疫調節具有免疫促進和免疫抑制雙重作用。其啟動子區域rs1800871和rs1800896位點的多態性可影響IL-10基因的轉錄活性和血漿IL-10水平[1，2]，與多種疾病的發病率、臨床進展和預后密切相關。本文以運用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜技術 （Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF-MS）檢測了西雙版納地區傣族和哈尼族人群這兩個SNP位點的基因型和等位基因分布頻率，為尋找疾病易感基因提供了群體遺傳學數據。

1 對象與方法

1.1 研究對象

在知情同意的原則下，采集云南省西雙版納地區健康、純系且無親緣關系傣族、哈尼族人群血樣600份，其中傣族300例，男117例，女183例，年齡（37.3±17.1）歲；哈尼族300例（男127例，女173例），年齡（33.6±17.4）歲。所有觀察人員均靜脈抽取EDTA-K2抗凝靜脈血3 mL， 充分混勻后-20℃保存備用。

1.2 Il-10 rs1800871和rs1800896位點多態性分析

全血標本用全血基因組提取試劑盒（百泰克DP1801）提取基因組DNA作為模板，采用MALDI-TOF-MS技術 對IL-10啟動子rs1800871和rs1800896位點進行基因分型。首先進行PCR擴增，其中引物濃度為0.1 μmol/L，HotStar Taq 1 U，dNTP濃度為0.5 μmol/L，MgCl2 濃度為1.625 mmol/L，DNA 模板10 ng。PCR 反應的條件為94℃ 15 min；94℃20秒，56℃30秒，72℃ 1 min，45 個循環；72 ℃延伸3 min。隨后將擴增后的產物進行SAP純化后進行延伸反應，其中伸反應引物0.84mol/L，iPlex酶1U，反應條件為94 ℃ 30秒 ；94℃5 秒 ，52℃ 5 秒，40個循環；80℃ 5 秒，5 個循環；72℃延伸3 min。反應結束后每個延伸反應產物經樹脂純化后于芯片上點樣，MassARRAY Analyzer質譜檢測相應位點的基因型。PCR引物和延伸引物見表1。

1.3統計學分析

采用SPSS11.7統計軟件處理，組間比較采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 IL-10啟動子rs1800871和rs1800896位點飛行時間質譜檢測

經χ2檢驗所調查的人群基因型頻率分布均符合 Hardy-Weinberg 平衡（P > 0.05），樣本具有代表性。rs1800871三種基因型均有檢出，而rs1800896位點只有AA和GA基因型，結果見圖1。

2.2 不同種族人群IL-10啟動子rs1800871和rs1800896位點基因型和等位基因分布頻率比較

傣族人群兩SNP位點基因型與等位基因分布頻率均與哈尼族顯著不同，差異有統計學意義（P均<0.05）。與國內外不同種族人群相關報道比較，rs1800871位點：哈尼族人群C等位基因頻率最低，僅為26.2%，，其基因型和等位基因除與韓國人群接近外（P>0.05），與日本人群有顯著性差異（P<0.05），與漢族、意大利人、芬蘭人和哥斯達黎加人群差別極其顯著（ P<0.01）；而傣族人群與漢族、日本人和韓國人群接近（P>0.05），而與意大利人、芬蘭人和哥斯達黎加人群差別極其顯著（（P<0.01）；rs1800896位點：哈尼族人群與漢族、日本人和韓國人群接近（P>0.05），與意大利人、西班牙人和突尼斯人群差別極其顯著（（P<0.01）；而傣族與漢族人群接近（P=0.05），與日本人和韓國人群差別有顯著性（P<0.05），與意大利人、西班牙人和突尼斯人群差異極其顯著（P<0.01）。結果見表2。

3討論

人類IL-10基因定位于1q31-32，含有5個外顯子和4個內含子，全長4891bp，所編碼的IL-10具有廣泛的生物學效應，在機體免疫調節中發揮著重要的作用。其啟動子區域rs1800871和rs1800896位于Ets轉錄子和正調控序列結合位點，因此其多態性可以影響IL-10基因的轉錄活性和血漿IL-10水平[1，2]并與多種疾病如自身免疫疾病、感染性疾病[3]、精神性疾病[4]和腫瘤等密切相關。rs1800896G和rs1800871C相對于rs1800896A和rs1800871T為高表達等位基因，它們的IL-10產量是低表達基因型的2～3倍。

很多疾病的發生、發展和轉歸存在明顯的人群和地域差異，這與人群遺傳背景密切相關。SNP作為第三代遺傳標志，其在不同人群中的分布及與疾病的相關性研究有助于我們認識疾病易感性差異的原因。云南西雙版納是一個多民族雜居的地區，由于地理環境的特殊、交通的不便以及民族習慣和文化的差異，民族間極少通婚，因此形成了遺傳學上的原生態隔離種群，是非常好的人群基因結構與疾病認識的地區。我們的研究以傣族和哈尼族這兩個原生態隔離種群為研究對象，從分子遺傳學角度認識了IL-10啟動子rs1800871和rs1800896位點多態性的分布：發現這兩個SNP位點多態性在傣族和哈尼族人群中的分布有顯著性差異，結合國內外相關文獻進行比較，發現哈尼族與傣族人群rs1800896位點均未檢出GG基因型，哈尼族人群rs1800871位點C等位基因頻率最低。同時傣族和哈尼族人群兩個SNP位點多態性多與亞洲人群如中國漢族、日本和韓國等相接近，而與歐洲、美洲人群如意大利人、芬蘭人、哥斯達黎加人、西班牙人和突尼斯人等顯著不同。這些遺傳學上的差異可能是造成不同人群對某些疾病易感性異同的重要原因。

總而言之，我們的研究豐富了中國少數民族人群IL-10啟動子rs1800871和rs1800896位點的群體遺傳學數據，提示IL-10啟動子rs1800871和rs1800896位點多態性存在種族、民族差異，有助于我們從基因水平更深刻地理解不同疾病在不同人群中易感性差異的內在機制，為尋找疾病易感基因提供了群體遺傳背景資料。

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（收稿日期：2013-03-28）