紹興地區0～14歲兒童纖維結合蛋白參考區間建立

葛國興， 鐘亞萍， 梁美春

(紹興市人民醫院浙江大學紹興醫院，浙江紹興 312000)

纖維結合蛋白(fibronectin，Fn)是一種具有廣泛生物學功能的雙鏈糖蛋白，與纖維膠原系統有特別的親和力，能與衰老破壞的細胞組織碎片、膠原碎片、纖維蛋白、纖維蛋白原、細菌等物質結合，促進巨噬細胞吞噬這些免疫復合物［1］。我們對本地區0～14歲健康兒童作了Fn參考區間統計。

材料和方法

一、調查對象

收集紹興市人民醫院門診求診或體檢兒童，有兒內科醫生協助篩選，按美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)C28-A2文件要求［2］，收集652名，年齡0～14歲，其中，男童439名，女童213名。納入對象為既往營養狀況正常、無肝腎心肺功能損害，近期無重大創傷或用藥史，檢查項目包括:(1)肝功能:總膽紅素、直接膽紅素、丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、總蛋白、白蛋白、球蛋白、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰基轉移酶;(2)腎功能:尿素氮、肌酐、尿酸;(3)血糖;(4)血脂:甘油三酯、膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇;(5)電解質:K+、Na+、Cl-、Ca2+、Mg2+、P-。

二、儀器與試劑

使用美國雅培公司Abbott Aeroset型全自動生化分析儀進行檢測，質控品為美國Beckman coulter公司生產的兩水平質控。質控靶值按室內質控要求自行測定、s，該值作為該批號質控品相應靶值(批號 M102411，靶值 141.0，s 7.5;M102412，靶值 253.0，s 10.0)。

三、樣本測定方法

年齡稍大兒童檢測前一天晚餐即不進高脂膳食，受檢者空腹12 h，清晨坐位前臂靜脈取血3 mL;年齡較小嬰兒抽血前空腹3～6 h，平躺手臂或頭皮靜脈抽血，離心，分離血清，上機檢測。檢測方法:利用配套校準品進行校準后，分別測定，同時將質控品作為常規標本隨機加入測定序列中，按質控規則判斷質控結果，確保結果在控。

四、參考區間建立

按CLSI C28-A2要求，根據對原始數據Fn水平升高影響因素的分析，建立排除標準，再根據數據分布類型，選擇使用傳統統計法或穩健統計技術剔除離群值，得到Fn參考范圍建立的數據，確定參考區間。

五、統計學方法

采用描述性統計分析對參考兒童的Fn值利用SPSSfor windows 17.0分別進行男女標本測定結果分布頻度分析與判斷，不同性別、年齡組間的比較采用方差分析(一般線性模型單變量分析，組間兩兩比較采用Bonferroni)，分別用百分位數法和正態近似法制定參考區間，α雙側=0.05。

結 果

Fn參考區間的建立:將0～14歲658名男性和女性兒童原始數據先進行資料正態性檢驗。

圖1 658例健康兒童反趨勢正態QQ曲線圖

從男性和女性兒童Fn原始數據反趨勢正態QQ圖可以看出，均有3點數據明顯高于+0.4標準偏差，明顯偏離群值，因此需要刪除后再進行資料數據統計，得到652例符合要求數據。

圖2 658名健康兒童帶正態性曲線直方圖

652名兒童分別按特性分為3組:0～1歲、2～3歲、4～14歲統計學參考區間。

由表1可見，方差分析男性兒童和女性兒童組P均＞0.05，表明同性別不同年齡段兒童統計學差異不明顯，因此數據可以合并處理;而同年齡段男女性別比較P＞0.05，說明男女兒童差異不明顯。僅個別不同年齡段男女兒童比較有差異，從數據上看各兒童組正態近似法所得范圍的上下限均略低于百分位數法，由于資料是近似正態分布，故用百分位數較合適。

從圖3觀察各年齡段男性和女性兒童Fn水平趨勢可見，女性兒童高于其男性兒童期，男性兒童在總體均數線下側，女性兒童在上側，由于同性別各年齡段方差基本一致(P＞0.05)因此其參考區間男童和女童相應各年齡段可以分別合并統計。

表1 紹興地區0～14歲兒童Fn參考區間(μg/mL)

圖3 男性、女性兒童各年齡段Fn水平變化趨勢

討 論

Fn廣泛存在于細胞表面、血漿、細胞外液、結締組織及大部分基底膜，Fn可在細胞表面形成一個堅固的網狀結構，在伸展和新生細胞及其鄰近的下層組織間起橋梁黏附作用，使細胞與細胞之間以及細胞與其他基質間相互黏附，從而具有調節細胞附著、移行和分化的作用［3-4］。因此，Fn對保持人體內環境的穩定起重要的作用;Fn、腺苷脫氨酶(ADA)在肝硬化診斷中有應用價值，Fn是一組高分子蛋白，以可溶解形式存在于血漿和體液中，主要反映在肝硬化和肝纖維化，如酒精性肝炎其Fn明顯降低［5］。很多研究表明Fn在感染、腫瘤、腎病、肝病、結締組織病等多種疾病中Fn均會發生變化。

參考區間是解釋檢驗結果正常與否的依據。受生物學特性的影響，如年齡、性別、種族、居住地及妊娠等;受檢驗方法的影響，不同方法的參考區間可不同［6］。因此，各臨床實驗室有必要驗證自己的參考范圍，簡單地引用文獻或直接采用廠商給定的參考區間是不可取的。

我們對本地區652名0～14歲健康兒童做了統計分析，按年齡段0～1歲、2～3歲、4～14歲分3組，得到健康兒童Fn參考范圍，男童為131.9～270.8 μg/mL、132.9～284.8 μg/mL、132.5～270.3 μg/mL ，合并后為132.8～272.2 μg/mL;女童為142.6.5～306.4 μg/mL、135.6～284.2 μg/mL、136.0～264.0 μg/mL，合并后為137.5～285.4 μg/mL。數據上看同年齡段不同性別兒童統計學差異不明顯，而個別年齡段(男童0～1歲，女童2～3歲相互比較，P＜0.01)，因此對0～14歲男女兒童作了分開報道，理論上嬰幼兒性別均未發育，Fn指標與性激素并無關聯，我們分析個別不同年齡段有差異可能是抽樣誤差造成或不同年齡組間由于嬰幼兒器官系統發育未成熟而造成，有待更多文獻研究。本試劑產品說明書的參考區間為180～280μg/mL，無性別與年齡分組，從我們數據上觀察兒童參考區間下限明顯低于說明書，若沿用原廠家參考區間可能使部分健康兒童被誤判。本研究發現，原始數據Fn水平呈偏態分布，推薦使用百分位數法計算結果;若推薦臨床使用，則Fn參考區間在試行一段時間后，需做進一步驗證和評價［2］。

［1］梁海珊，陳海花，李瑛強.消化道腫瘤患者血清纖維結合蛋白的測定［J］.山東醫藥，2007，47(32):109-110.

［2］National Committee for Clinical Laboratory Standards.How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory［S］.C28-A2，NCCLS，2000.

［3］崔玉寶，周 鷹，朱巨錦，等.血漿冷沉淀制品佐治肛瘺的臨床觀察［J］.中華現代全科醫學雜志，2002，2(4):10-12.

［4］劉薇娜，崔玉寶，周 鷹，等.冷沉淀用于肛腸疾病外科術后的創面愈合［J］.中國輸血雜志，2002，15(6):385-386.

［5］鄭曉豐.m-AST、RBP、PA、ADA和FN在肝臟疾病診斷中的臨床評價［J］.檢驗醫學，2009，24(12):886-888.

［6］馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎［M］.上海:上海科學技術文獻出版社，2007:212.