鈣調(diào)磷酸酶類免疫抑制劑大鼠模型尿液中尿酸、肌酐及葡萄糖的變化

何綠茵，陳林強(qiáng)，陳業(yè)輝，仉 智，林華欣，李淼沅，徐邦牢

(1.廣州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科廣東省臨床分子醫(yī)學(xué)及分子診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510180，2.廣州市第一人民醫(yī)院泌尿外科，廣東 廣州 510180)

腎移植是終末期腎病的有效治療手段。鈣調(diào)磷酸酶類免疫抑制劑[包括環(huán)孢素A(cyclosporine A，CsA)、他克莫司(tacrolimus，F(xiàn)K506)]是腎移植術(shù)后最常用的免疫抑制藥物，但其對機(jī)體多個(gè)器官系統(tǒng)及功能代謝有不同程度的影響[1-3]。有報(bào)告稱地爾硫卓(diltiazem，Dil)可防止鈣調(diào)磷酸酶類免疫抑制劑的腎毒性，并能提高該類藥物的血濃度[2-3]，已在臨床推廣應(yīng)用。但腎移植術(shù)后首劑治療劑量鈣調(diào)磷酸酶類免疫抑制劑對尿液的尿量、蛋白、尿酸(UA)、肌酐(Cr)、葡萄糖(Glu)等多個(gè)指標(biāo)的影響國內(nèi)外文獻(xiàn)鮮有報(bào)告。為此，我們開展了這方面的研究。

材料和方法

一、實(shí)驗(yàn)動物及分組

中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物試驗(yàn)中心提供清潔級近交系雄性SD大鼠24只，每只體重200～250 g，隨機(jī)分為對照組、CsA組、FK506組和FK506+Dil組共4組，每組6只。

二、試劑和儀器

CsA由杭州中美華東制藥有限公司生產(chǎn)，F(xiàn)K506由日本大坂藤澤公司生產(chǎn)，地爾硫卓由浙江亞太藥業(yè)股分有限公司生產(chǎn)。采用OLYMPUS AU2700全自動生化分析儀(日本Olympus公司)及配套試劑。

三、給藥方法

參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-4]建立各組大鼠模型，依照公式DW1=[(R1×W21/3)/(R2×W11/3)]×DW2將腎移植術(shù)后患者服藥的首劑劑量換算為大鼠給藥劑量，其中DW是藥物的劑量、R是體型指數(shù)(大鼠和人的 R 值分別為0.09 和0.1～0.11)、W是標(biāo)準(zhǔn)體重(大鼠和人的W值分別是200 g和60 kg)。腎移植術(shù)后首劑治療劑量[4～5]:CsA 為5 mg·kg－1·d－1、FK506 為 0.15 mg·kg－1·d－1、Dil為 1.5 mg·kg－1·d－1;換算成大鼠的劑量分別為25、0.8、8 mg·kg－1·d－1。應(yīng)用大鼠專用圓頭金屬灌胃針進(jìn)行灌胃方式給藥，每天1次。大鼠每周稱重2次，并根據(jù)體重調(diào)整藥物劑量，用藥4周即可建立起各組大鼠模型，然后處死并獲取血標(biāo)本。

四、觀察指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)觀察2周及4周，用大鼠專用代謝籠收集各組大鼠的尿量，并檢測尿UA、Cr、Glu含量。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)2周時(shí)，CsA組尿量明顯多于FK506組、FK506+Dil組合對照組(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)4周時(shí)，4組尿量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)2周及4周各組之間尿UA含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)2周時(shí)，F(xiàn)K506組尿Cr含量高于對照組和CsA組(P＜0.05)，但與FK506+Dil組無明顯差異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)4周時(shí)，CsA組、FK506組和 FK506+Dil組尿Cr含量均明顯低于對照組(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)2周及實(shí)驗(yàn)4周時(shí)，CsA組的尿Glu含量明顯高于其他3組(P＜0.05)。見表1、2。

表1 實(shí)驗(yàn)2周時(shí)各組大鼠尿量及尿UA、Cr、Glu含量比較

表2 實(shí)驗(yàn)4周時(shí)各組大鼠尿量及尿UA、Cr、Glu含量比較

討 論

本研究結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)2周時(shí)，CsA組大鼠尿量明顯多于其他3組;而在實(shí)驗(yàn)4周時(shí)，CsA組大鼠尿量與其他3組大鼠比較無明顯差異，而且與其他3組大鼠的尿量相比較而言，反而呈減少趨勢。CsA組大鼠尿量這種先增多再減少的變化趨勢是由什么原因引起尚未明確。推測可能在應(yīng)用首劑治療劑量CsA的第2周，CsA已經(jīng)導(dǎo)致腎小管的功能出現(xiàn)損傷，可能使尿濃縮功能下降和濾過鈉分?jǐn)?shù)增加等，導(dǎo)致尿量增多。早期尿酶如丙氨酸氨肽酶(AAP)和 N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)等反映腎小管功能損傷的早期指標(biāo)的檢測對明確診斷可能有一定作用。在實(shí)驗(yàn)第4周時(shí)，CsA組大鼠腎小管濁腫明顯，有明顯的空泡變性，腎間質(zhì)可見片狀的纖維組織增生，腎皮髓質(zhì)交界處可見到鈣化現(xiàn)象，證明CsA已經(jīng)使大鼠的腎臟出現(xiàn)慢性腎毒性的改變，腎功能已經(jīng)出現(xiàn)明顯的損傷，健存腎單位日漸減少，故此時(shí)該組大鼠的尿量明顯減少，反而低于其他3組大鼠。前期實(shí)驗(yàn)顯示[4]在實(shí)驗(yàn)4周時(shí)，CsA組大鼠CsA組腎小管細(xì)胞腫脹(濁腫)、腎小球系膜細(xì)胞增生，與腎小球囊壁層細(xì)胞多處粘連。腎小球系膜細(xì)胞增生，與腎小球囊壁層細(xì)胞多處粘連。

FK506組大鼠和FK506+Dil組大鼠的尿量始終與正常對照組大鼠的尿量相似，盡管該2組大鼠的病理切片均已證實(shí)存在著不同程度的腎臟損傷[4]，但腎功能損傷的程度可能尚未導(dǎo)致該2組大鼠出現(xiàn)尿量的明顯改變。

實(shí)驗(yàn)2周時(shí)及實(shí)驗(yàn)4周時(shí)，各組大鼠之間尿UA含量無明顯差異。因此本研究初步認(rèn)為UA在大鼠腎毒性模型研究中的意義不大。

實(shí)驗(yàn)2周時(shí)，CsA組尿Cr含量與正常對照組相似，F(xiàn)K506組和FK506+Dil組尿Cr含量較高，其中FK506組尿Cr含量明顯高于正常對照組和CsA組(P＜0.05)。推測該2組大鼠在實(shí)驗(yàn)2周時(shí)可能處于腎臟儲備功能的代償狀態(tài)，故尿中排出的Cr較多。Cr含量增高的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究明確。實(shí)驗(yàn)4周時(shí)，CsA組、FK506組和FK506+Dil組大鼠的尿Cr含量明顯低于對照組(P＜0.05)。表明這3組大鼠的腎臟已經(jīng)出現(xiàn)不同程度的腎毒性損傷。

微穿刺實(shí)驗(yàn)證明，尿中Glu重吸收的部位以近球小管為主，尤其在近球小管的前半段。在正常的生理狀態(tài)下，Glu幾乎是全部被重吸收，所以即使腎小球?yàn)V過液中的Glu濃度與血糖相同，但尿中幾乎不含Glu。本研究實(shí)驗(yàn)2周和實(shí)驗(yàn)4周時(shí)CsA組尿Glu含量明顯高于其他3組(P＜0.05)。提示CsA組大鼠腎小管重度損傷，腎小管重吸收功能重度受損，導(dǎo)致尿 Glu增多。FK506組和FK506+Dil組的尿Glu含量與對照組相似，提示腎臟損傷程度較CsA組輕。

綜上所述，治療劑量鈣調(diào)磷酸酶類免疫抑制劑可致大鼠尿Cr、Glu代謝紊亂。

[1]陳業(yè)輝，陳立中，鄭克立，等.腎移植術(shù)后早期應(yīng)用他克莫司的效果[J].廣東醫(yī)學(xué)，2002，23(11):1209-1210.

[2]陳業(yè)輝，梁顏笑，陳林強(qiáng)，等.恬爾心對大鼠FK506腎毒性的防治作用[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2007，87(32):2235-2237.

[3]唐江濤，王蘭蘭，白楊娟，等.應(yīng)用尿微量蛋白檢測評價(jià)鈣調(diào)磷酸酶抑制劑類抗排異藥物對肝移植受者的腎毒性損傷[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2008，23(6):646-650.

[4]黃赤兵，張銀甫，馮嘉瑜，等.用地爾硫卓提高他克莫司在腎移植中的應(yīng)用效能[J].重慶醫(yī)學(xué)，2008，37(14):1522-1524.

[5]陳業(yè)輝，梁顏笑，陳林強(qiáng)，等.治療劑量他克莫司對大鼠腎臟病理及超微結(jié)構(gòu)變化的影響[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2009，89(10):704-708.