銀藍調脂膠囊對實驗性高脂血癥大鼠的調血脂作用研究*

★ 陳玉興 黃雪君 杜鐵良 曾曉會 姚楠 黃丹娥 (廣東省中醫研究所 廣州 510095)

銀藍調脂膠囊對實驗性高脂血癥大鼠的調血脂作用研究*

★ 陳玉興**黃雪君 杜鐵良 曾曉會 姚楠 黃丹娥 (廣東省中醫研究所 廣州 510095)

目的:觀察銀藍調脂膠囊對高脂血癥模型大鼠血脂的影響,為臨床用藥提供實驗依據。方法: 給予大鼠高脂飼料8周，制造高脂血癥大鼠模型。造模4周后測定甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)含量，按血脂水平分組給藥，測定灌服銀藍調脂膠囊4周后高脂血癥模型大鼠甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)、載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白脂酶(LPL)、肝酯酶(HL)、游離脂肪酸(FFA)等指標的變化。結果:銀藍調脂膠囊能明顯降低高脂飼料飲食所致實驗性高脂血癥大鼠血清TC、TG含量，升高HDL-c 、ApoA1含量和LPL、HL、總酯酶活性，降低LDL-c、ApoB、FFA含量，提高ApoA1/ApoB比值。結論:銀藍調脂膠囊具有明確的調節高脂血癥的作用。

銀藍調脂膠囊；高脂血癥大鼠

銀藍調脂膠囊為中藥六類新藥，經臨床十余年應用篩選形成，由銀杏葉、絞股藍等中藥組成，具有益氣健脾、活血化瘀、祛痰利濕等功效，主要適用于氣虛痰瘀阻痹型高脂血癥的治療。銀藍調脂膠囊處方及制劑工藝申請了專利1項，申請號2009100419601；獲得國家食品藥品監督管理局藥物臨床試驗批件1項，批件號2012L01011。本實驗主要對其調血脂作用進行了動物實驗觀察，為銀藍調脂膠囊臨床治療高脂血癥提供實驗依據。

1 材料與儀器

1.1 藥品與試劑

銀藍調脂膠囊，由廣東省中醫研究所制劑室制備提供，批號090402；非諾貝特膠囊，法國利博福尼制藥公司，批號93640；血脂康膠囊，北京北大維信生物科技有限公司，批號20090210；膽固醇，廣州合達生物科技有限公司，批號20090512；豬油，市售豬板油煉制，臨用現煉；丙基硫氧嘧啶，廣州康和藥業有限公司，批號20090211；膽固醇試劑盒，上海科欣生物技術研究所，批號20090602；甘油三酯試劑盒，上海科欣生物技術研究所，批號20090602；直接高密度脂蛋白膽固醇試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司，批號090162；直接低密度脂蛋白膽固醇試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司，批號090191；LPL/HL測試盒，南京建成生物工程研究所，批號20090812；載脂蛋白A1測定試劑盒，上海榮盛生物藥業有限公司，批號20090514；載脂蛋白B測定試劑盒，上海榮盛生物藥業有限公司，批號20090514；游離脂肪酸FFA測試盒，南京建成生物工程研究所，批號20090812。

1.2 實驗動物

SPF級SD大鼠，雌雄各半，體重180～220g，由廣東省醫學實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號SCXK(粵)2008-0002，實驗動物質量合格證號№0051076。實驗環境，廣東省中醫研究所SPF級動物實驗室，SYXK(粵)2005-0059。

1.3 儀器

JJ3000動物電子秤，Gamp;G公司產品；BS224S電子天平(1/萬)，德國SARTORIUS產品； HH-6數顯恒溫水浴鍋，金壇市富華儀器有限公司產品；3K30離心機，SIGMA公司產品；752N型紫外分光光度計，上海精密科學儀器有限公司產品。

2 方法

2.1 大鼠高脂飼料配制 參照文獻方法[1]進行配制，大鼠高脂飼料組成：2%膽固醇，10%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶，87.8%基礎飼料，由廣東省醫學實驗動物中心加工配制。

2.2動物分組與模型建立[2]取SPF級SD大鼠84只，雌雄各半，按體重隨機分為7組，分別為正常對照組、高脂模型組，非諾貝特組、血脂康組、銀藍調脂膠囊高、中、低劑量組，每組12只，雌雄分籠飼養，每籠6只。除正常對照組給予正常飼料外，其余各組大鼠每天上午9時左右每籠給予高脂飼料200g，下午5時左右換成正常飼料100g，自由飲水，連續8周。第4周末下午5時各組大鼠均禁食不禁水15小時，第2天8時各組大鼠均從眼眶靜脈叢采血1mL，離心分離血清，按膽固醇試劑盒、甘油三酯試劑盒說明書測定大鼠血清中TC、TG含量作為大鼠給藥前血脂水平。測定血脂水平后各給藥組大鼠每天上午按劑量灌胃給予相應藥物10mL/kg，正常對照組、高脂模型組給予等量蒸餾水，每天1次，連續給藥4周。末次給藥前各組大鼠均禁食不禁水15小時，末次給藥1小時后取血，離心分離血清，分別按各試劑盒說明書測定各組大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB、LPL、HL和FFA含量。

2.3 血脂及相關指標測定 血清總膽固醇(TC)測定采用膽固醇氧化酶法；甘油三酯(TG)測定采用甘油磷酸氧化酶法；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定采用磷鎢酸-鎂沉淀法；低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)采用聚乙烯硫酸沉淀法；載脂蛋白A (ApoA1)、載脂蛋白B (ApoB)測定采用免疫透射比濁法；脂蛋白脂酶(LPL)及肝脂酶(HL)試劑盒采用銅試劑比色法；游離脂肪酸(FFA)測定采用銅試劑比色法。均按試劑盒說明書步驟測定。

2.4 統計分析方法 所有計量資料以均數加減標準差( )表示。多組間均數的比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)，組間均數兩兩比較，方差齊時采用SNK法；方差不齊時采用Dunnett's T3法。由SPSSl5.0軟件完成。

3 結果

3.1 對進食高脂飼料所致實驗性高脂血癥大鼠血清TC、TG含量的影響

在造模4周后(給藥前)各組造模大鼠與正常對照組大鼠相比，血清TC、TG含量均顯著升高(Plt;0.01)。給藥4周后，與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清TC、TG含量仍明顯升高(Plt;0.01)；與模型對照組相比，銀藍調脂膠囊5.148、2.574、1.287g生藥·kg-13個劑量均能使高脂飼料飲食所致實驗性高脂血癥大鼠血清TC、TG含量明顯降低(Plt;0.05或Plt;0.01)。詳見表1。

表1 對實驗性高脂血癥大鼠血清TC、TG含量的影響

3.2 對進食高脂飼料所致實驗性高脂血癥大鼠血清HDL-c、LDL-c含量的影響

給藥4周后，與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清HDL-c、LDL-c含量均明顯升高(Plt;0.01)；與模型對照組相比，銀藍調脂膠囊5.148g生藥·kg-1劑量能使高脂飼料飲食所致實驗性高脂血癥大鼠血清HDL-c含量顯著升高(Plt;0.01)、LDL-c含量明顯下降(Plt;0.01)。詳見表2。

表2 對實驗性高脂血癥大鼠血清HDL-c、LDL-c含量的影響

3.3 對進食高脂飼料所致實驗性高脂血癥大鼠血清ApoA1、ApoB含量的影響

給藥4周后，與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清ApoB含量明顯升高(Plt;0.01)、ApoA1/ApoB比值顯著下降(Plt;0.01)；與模型對照組相比，銀藍調脂膠囊5.148、2.574、1.287g生藥·kg-13個劑量均能顯著升高實驗性高脂血癥大鼠ApoA1含量和ApoA1/ApoB比值(Plt;0.05或Plt;0.01)，明顯降低ApoB含量(Plt;0.01)。詳見表3。

表3 對實驗性高脂血癥大鼠血清ApoA1、ApoB含量的影響

3.4 對進食高脂飼料所致實驗性高脂血癥大鼠血清LPL、HL、總酯酶活性的影響

給藥4周后，與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清LPL、HL和總酯酶活性顯著下降(Plt;0.05或Plt;0.01)；與模型對照組相比，銀藍調脂膠囊5.148、2.574、1.287g生藥·kg-13個劑量均能使高脂飼料飲食所致實驗性高脂血癥大鼠血清HL、總酯酶活性顯著升高(Plt;0.01)，在一定程度上升高血清LPL活性。詳見表4。

表4 對實驗性高脂血癥大鼠血清LPL、HL、總酯酶活性的影響

3.5 對進食高脂飼料所致實驗性高脂血癥大鼠血清FFA含量的影響

給藥4周后，與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清FFA含量顯著升高(Plt;0.01)；與模型對照組相比，銀藍調脂膠囊5.148、2.574、1.287g生藥/kg 3個劑量均能顯著降低實驗性高脂血癥大鼠血清FFA含量(Plt;0.05或Plt;0.01)。詳見表5。

表5 對實驗性高脂血癥大鼠血清清FFA含量的影響

4 討論

高脂血癥(hyperlipidemia，HLP)是誘發動脈粥樣硬化、高血壓、冠心病或其它心腦血管疾病的首要危險因素，動脈粥樣硬化所致的心腦血管疾病是當前危及人類生命健康的主要疾病之一，有效防治HLP 已成為防治心腦血管疾病的重要環節。

2002年全國第四次營養調查數據顯示全國血脂異常的人群約1.6億，血膽固醇≥6.24 mmol/L人群在不同性別、年齡及地區35-74歲人群中的高膽固醇血癥總患病率為(9.0±0.3)%。面臨著嚴峻的血脂異常高發情況，我國對于血脂異常的知曉率、控制率及達標率卻較低[3]，對于經濟快速發展的中國來說，高血脂在整個21世紀，將會成為中國人健康的重大威脅。

西醫對高脂血癥的研究和治療取得了較大的成果，臨床常用的調血脂西藥主要有[4,5]：(1)貝特類，該類藥物通過激動PPARα，增加LPL酶活性，降低甘油三酯和膽固醇，但常有惡心、腹脹、腹瀉、白細胞減少等不良反應；(2)他汀類，作用靶標為HMG-COA，主要降低膽固醇，降脂作用強，起效快，但有頭痛、失眠、惡心等不良反應；(3)煙酸類，降低血清甘油三酯的作用較強，但易產生皮膚紅斑、熱感、瘙癢；(4)多烯不飽和脂肪酸類，該類藥物與膽固醇結合成酯，促進其降解為膽汁酸，使血漿膽固醇濃度下降，該類藥物具有抗血小板凝集作用，故需謹慎使用；(5)膽固醇吸收抑制劑，代表藥物Ezetimibe，該藥通過與膽汁酸結合，阻斷膽汁酸重吸收，促進膽固醇轉化為膽汁酸，從而降低體內膽固醇，常見不良反應有腹脹、惡心、便秘，不適合患有胃腸道疾病病人使用。此外，近年來他汀類、貝特類與他汀類合用引起的橫紋肌溶解這一副作用受到了越來越多的關注，這嚴重影響了當前兩大降血脂藥物在臨床上長期應用的安全性[6]。高脂血癥臨床需長期用藥，西藥長期用藥所引起的肝腎功能、肌肉損害及停藥后血脂反跳一直是西醫治療本病的難題[7]。

當前，降血脂藥物研究策略及靶標主要有影響膽固醇合成、干擾脂質代謝和轉運過程、促進高密度脂蛋白的形成、抑制低密度脂蛋白的形成以及抑制膽固醇的吸收等[8,9]。高脂血癥病因病機較為復雜，由多因素引起并呈現多器官、多靶點同時病變的趨勢，與西藥單組分、單靶標的作用模式相比，中藥的多組分、多靶點、毒副小、整體調節的作用特點更具優勢。充分發揮中醫藥的特色和優勢治療高脂血癥具有廣闊的應用前景[10]。

中醫學認為，脂質代謝紊亂乃由臟氣虧虛、氣化功能失調所致。因血脂為水谷精微物質所化，參與機體的營養與代謝。若臟氣虧虛，氣化功能失調，不能運化輸布水谷精微至全身，多余之脂質則會滯留沉淀于血脈肌肉之中形成脂濁，進而影響血脈津液之運行以致痰濁、瘀血內著，終成臟氣虧虛，痰瘀互結之錯綜復雜之病理變化[11]。是故痰濁瘀血阻滯是高脂血癥的重要的病理基礎，高脂血癥的發生主要歸結于脾、腎，脾腎虛弱為本，痰瘀互結為標[12]。

銀藍調脂膠囊功能益氣健脾、活血化瘀、祛痰利濕，對氣虛痰瘀阻痹型高脂血癥有較好療效。本實驗研究證實，銀藍調脂膠囊能夠顯著降低外源性飲食性高脂血癥大鼠TC、TG含量，升高HDL-c含量，降低LDL-c含量。其作用機理是通過提高ApoA1水平促進CE利用合成HDL-c，從而促進TC轉化CE，降低了TC水平；通過降低ApoB水平，減少了LDL-c的合成；通過升高LPL、HL和總酯酶活性促進TG的水解代謝；通過降低FFA含量促進了TG的代謝活動。

實驗提示銀藍調脂膠囊具有整體調節脂質代謝的作用，在高脂血癥的防治方面具有良好的應用前景。

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廣州市科技計劃立項資助項目(項目編號：2012J4100043)。

**作者簡介：陳玉興(1971-)，男，漢族，海南儋州人，主任中藥師，主要從事中藥配方顆粒和中藥新藥的研發工作，Tel:020-83576735, E-mail: cyx89333@qq.com 。

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2013-07-29)