T-cadherin在脂聯(lián)素抑制缺氧/復(fù)氧導(dǎo)致的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡中的作用*

孫亞麗， 邊云飛， 孫 旭， 劉改珍， 白 瑞， 肖傳實(shí)

(山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科，山西 太原 030001)

T-cadherin在脂聯(lián)素抑制缺氧/復(fù)氧導(dǎo)致的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡中的作用*

孫亞麗， 邊云飛△， 孫 旭， 劉改珍， 白 瑞， 肖傳實(shí)

(山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科，山西 太原 030001)

目的通過腺病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)沉默一種新的脂聯(lián)素(APN)受體T-cadherin的表達(dá)，并建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(H/R)模型, 觀察T-cadherin對(duì)H/R所致心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法選用原代培養(yǎng)72 h的心肌細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分為5組:(1)空白對(duì)照組:心肌細(xì)胞正常培養(yǎng);(2)H/R組;(3)APN+H/R組;(4)Ad-T-cadherin-siRNA+APN+H/R組;(5)Ad-HK(腺病毒陰性對(duì)照)+APN+H/R組。首先,確定最適合的腺病毒感染滴度，RT-PCR和Western blotting檢測(cè)腺病毒介導(dǎo)的干擾RNA對(duì)T-cadherin表達(dá)的影響效果；其次,通過流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL檢測(cè)心肌細(xì)胞的凋亡。結(jié)果原代培養(yǎng)獲得高純度的乳鼠心肌細(xì)胞。腺病毒感染的最佳MOI值為100，48 h后腺病毒的感染效率和紅色熒光蛋白表達(dá)最強(qiáng),其效率高于90%。RT-PCR和Western blotting證實(shí)腺病毒介導(dǎo)的siRNA轉(zhuǎn)染的心肌細(xì)胞T-cadherin mRNA和蛋白水平均明顯下降(P<0.05)。Ad-T-cadherin-siRNA+APN+H/R組心肌細(xì)胞凋亡率與APN+H/R組相比顯著升高(P<0.05)，與H/R組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論重組腺病毒Ad-T-cadherin-siRNA能夠在體外高效感染原代心肌細(xì)胞,并成功降低T-cadherin在心肌細(xì)胞的表達(dá)；低表達(dá)的T-cadherin阻斷了脂聯(lián)素對(duì)缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的抑制作用。

脂聯(lián)素; T-鈣黏蛋白; 心肌細(xì)胞; RNA干擾; 缺氧/復(fù)氧

脂聯(lián)素(adiponectin，APN)是由脂肪組織分泌的一種激素，且在體內(nèi)代謝平衡中發(fā)揮著重要的作用，近年多項(xiàng)研究顯示脂聯(lián)素有抗炎、抗動(dòng)脈硬化、抗胰島素抵抗的作用[1-2]。另外，脂聯(lián)素還參與了缺血/再灌注 (ischemia/reperfusion，I/R)損傷的心肌保護(hù)[3]。目前多數(shù)研究認(rèn)為，脂聯(lián)素可能是與其特異性受體(adiponectin receptor,AdipoR;分為AdipoR1和AdipoR2)結(jié)合后發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)的。但是2004年Hug用分子克隆技術(shù)發(fā)現(xiàn)T-鈣黏蛋白(T-cadherin，T-cad)是脂聯(lián)素的一種新受體,屬于鈣黏蛋白家族，且T-cad是脂聯(lián)素六聚體和高分子量多聚體的受體，不與脂聯(lián)素球狀結(jié)構(gòu)域和脂聯(lián)素三聚體結(jié)合[4]。繼Yamauchi等[5]克隆了脂聯(lián)素受體AdipoR1與AdipoR2后，AdipoR又成為研究熱點(diǎn)。經(jīng)典的鈣黏蛋白分子由細(xì)胞外鈣結(jié)合區(qū)及跨膜區(qū)兩部分組成，但T-cad缺失跨膜區(qū)而經(jīng)糖基磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidylinositol，GPI)附著于細(xì)胞膜上，其組織分布非常廣泛，在心血管系統(tǒng)表達(dá)水平最高[6]。我實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞缺氧、復(fù)氧(hyposia/reoxygenation,H/R)后，APN 受體T-cad 的mRNA和蛋白水平明顯降低；而APN 預(yù)處理后再進(jìn)行H/R，上述改變均能得到較大程度的逆轉(zhuǎn)，并且呈現(xiàn)一定的劑量依賴效應(yīng)[7]。因此我們猜想：在脂聯(lián)素對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用中，T-cad可能起著關(guān)鍵性的作用。

材 料 和 方 法

1動(dòng)物

健康Sprague-Dawley (SD) 乳鼠，1～3日齡，雌雄不限，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2主要試劑

3主要方法

3.1乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng) 取1～3日齡SD大鼠乳鼠，75%乙醇消毒，在劍突上一肋沿胸骨左緣剪開皮膚，彎鑷取出心臟，置于預(yù)冷的D-Hanks液中洗凈血污，剝離心房及大血管，剔除結(jié)締組織及脂肪，用眼科剪剪成1 mm×1 mm×1 mm小塊，加入含0.0625%胰酶消化3 min，靜置，自然沉淀后去上清液，再加入1%Ⅱ型膠原酶消化吹打3 min，自然沉淀，留取上清液，加入含20%胎牛血清的DMEM中止消化，重復(fù)Ⅱ型膠原酶的消化2～3次,將收集的細(xì)胞懸液1 000 r/min離心10 min，棄上清，沉淀中加入含20%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)液將細(xì)胞接種于6孔板中并置培養(yǎng)箱(5%CO2、37 ℃)培養(yǎng)90 min后，差速貼壁去除成纖維細(xì)胞。48 h后換液，倒置顯微鏡觀察。

3.2心肌細(xì)胞H/R模型的建立 采用Esumi等改進(jìn)的方法，配制缺氧液和復(fù)氧液。缺氧液組成(mmol/L)： 137 NaCl, 12 KCl, 0.49 MgCl2, 0.9 CaCl2, 4.0 HEPES, 10脫氧葡萄糖,20乳酸鈉，pH 6.2；復(fù)氧液組成(mmol/L): 137 NaCl, 3.8 KCl, 0.49 MgCl2, 0.9 CaCl2, 4.0 HEPES, 10脫氧葡萄糖,pH 7.4。實(shí)驗(yàn)時(shí)用缺氧液換去原培養(yǎng)液，放入缺氧孵箱中(5% CO2、95%N2、37 ℃)培養(yǎng)6 h。再換入復(fù)氧液，將細(xì)胞置入正常孵箱(5% CO2、37℃)下孵育6 h。

3.3感染復(fù)數(shù)(multiply of infection, MOI)值測(cè)定 取原代培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞，以5×108cells/L的密度接種至6孔板，培養(yǎng)2 d至細(xì)胞融合度達(dá)到70%。分為4個(gè)不同梯度的MOI值。在無糖無血清培養(yǎng)基中加入含有Ad-T-cad-siRNA的上清液，對(duì)照組僅含紅色熒光報(bào)告基因的陰性對(duì)照腺病毒載體上清，感染6 h后，換新鮮含20%胎牛血清培養(yǎng)基。感染后每天倒置熒光顯微鏡下觀察各組細(xì)胞紅色熒光表達(dá)情況，并計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞的百分比。

3.4原代心室肌細(xì)胞的鑒定 采用免疫熒光法，針對(duì)胞漿α-肌動(dòng)蛋白，采用鼠單克隆α-肌動(dòng)蛋白Ⅰ抗及FITC-羊抗鼠熒光Ⅱ抗鑒定心肌細(xì)胞。

3.5實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)72 h原代心肌細(xì)胞。(1)空白對(duì)照組:心肌細(xì)胞正常培養(yǎng);(2)H/R組;(3)APN+H/R組:30 mg/L脂聯(lián)素與心肌細(xì)胞孵育24 h后，進(jìn)行缺氧/復(fù)氧干預(yù);(4)Ad-T-cad-siRNA+APN+H/R組:加入腺病毒介導(dǎo)的siRNA與心肌細(xì)胞孵育48 h后，再加入30 mg/L的脂聯(lián)素與心肌細(xì)胞孵育24 h，進(jìn)行缺氧/復(fù)氧干預(yù);(5)Ad-HK+APN+H/R組：加入腺病毒介導(dǎo)的空質(zhì)粒與心肌細(xì)胞孵育48 h后，再加入30 mg/L的脂聯(lián)素與心肌細(xì)胞孵育24 h，進(jìn)行缺氧/復(fù)氧干預(yù)。

3.6RT-PCR測(cè)定 按RNA抽提試劑盒說明提取總RNA，微量分光光度計(jì)測(cè)定RNA量，A260/A280均在1.8～2.0。將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增。目的基因T-cad上游引物5’-GGCAGAGCTTTGAGATCCAC-3’，下游引物5’-GACTGGTCCCTCGTTGACAT-3’，擴(kuò)增片段產(chǎn)物長(zhǎng)度206 bp。β-actin上游引物5’-GTCAGGTCATCACTATCGGCAAT -3’，下游引物5’-AGAGGTCTTTACGGATGTCAACGT -3’， 擴(kuò)增片段產(chǎn)物長(zhǎng)度184 bp。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性2 min，94 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共28個(gè)循環(huán)，72 ℃ 10 min。擴(kuò)增片段通過凝膠成像分析儀系統(tǒng)分析。

工程量清單計(jì)價(jià)方法目前并不十分完善，而且相關(guān)的法律規(guī)范也不明確，這就導(dǎo)致電力單位內(nèi)部的體系松散。這種情況的結(jié)果非常嚴(yán)重，不但會(huì)造成工作效率低下的情況 而且給貪污腐敗等違法亂紀(jì)行為提供土壤。而且其中很多部分的管理并不透明，難以調(diào)動(dòng)內(nèi)部工作人員的熱情，而且很難進(jìn)行及時(shí)調(diào)整，無法發(fā)揮實(shí)際效用。沒有完善的管理體系，相關(guān)人員也會(huì)放松警惕，難以嚴(yán)格要求自己，嚴(yán)重的話甚至可能會(huì)造成非常大的經(jīng)濟(jì)損失造成不利影響。

3.7Western blotting檢測(cè) 收集細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白，用BCA法檢測(cè)蛋白濃度。取樣品蛋白質(zhì)50 μg，SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離、轉(zhuǎn)膜、5%BSA封閉2 h后，依次加入兔抗鼠T-cadⅠ抗(1∶500)和兔抗鼠β-actin抗體(1∶500)4 ℃孵育過夜，羊抗兔Ⅱ抗(1∶2 000)孵育2 h后，ECL發(fā)光液孵育2 min。使用Bio-Rad圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析，β-actin作為內(nèi)參照。

3.8流式心肌細(xì)胞凋亡率的測(cè)定 按照流式凋亡檢測(cè)試劑盒說明制備單細(xì)胞懸液，用Annexin V/PI雙染色標(biāo)記法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡百分率。

3.9TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡 收集各組細(xì)胞爬片，采用TUNEL法，按細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒操作說明進(jìn)行操作，最后使用含有DAPI染料的封片劑封片，激光共聚焦觀察細(xì)胞凋亡情況，TUNEL陽性信號(hào)為綠色熒光，位于胞核，圓形，DAPI染核為藍(lán)色。每一細(xì)胞爬片觀察4個(gè)獨(dú)立視野，計(jì)算每100個(gè)細(xì)胞中核熒光陽性的凋亡細(xì)胞數(shù)。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，組間數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析,各處理組之間采用SNK-q檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1原代心室肌細(xì)胞的鑒定

倒置相差顯微鏡下，原代心室肌細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)多樣，搏動(dòng)明顯，核居中呈卵圓形。倒置熒光顯微鏡下，細(xì)胞呈多角形，胞漿呈綠色熒光陽性表達(dá)的細(xì)胞達(dá)95%，非心肌細(xì)胞胞漿無陽性表達(dá)，見圖1。

Figure 1. Primary culture and identification of neonatal rat cardiomyocytes (×200). A: morphological image of primary neonatal rat cardiomyocytes;B: indentification of cardiomyocytes by α-actin immunofluorescent staining (green). Scale bar: 100 μm.

圖1乳鼠心肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定

2重組腺病毒對(duì)心肌細(xì)胞的感染力及感染效率檢測(cè)

應(yīng)用武漢淅碼公司構(gòu)建的Ad-T-cad-siRNA感染心肌細(xì)胞，10～12 h后,熒光顯微鏡下開始出現(xiàn)紅色熒光,感染后48 h熒光強(qiáng)度最強(qiáng)。隨著MOI的增加,紅色熒光陽性率亦增加: MOI值為50時(shí),熒光陽性率為70.5%;MOI值為100時(shí)，熒光陽性率接近97%，但心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)并無明顯抑制,而PBS對(duì)照組未見有熒光表達(dá)。這說明我們使用的重組腺病毒能有效地感染乳鼠心肌細(xì)胞,且體外感染效率高，見圖2。

Figure 2. Cardiomyocytes infected with Ad-T-cad-siRNA for 48 h (×200). A: MOI=50; B: MOI=100.

圖2轉(zhuǎn)染Ad-T-cad-siRNA48h后的心肌細(xì)胞

3RT-PCR和Westernblotting檢測(cè)T-cadmRNA和蛋白表達(dá)結(jié)果

相對(duì)其所有處理組，給予Ad-T-cad-siRNA處理組T-cad mRNA 水平明顯降(P<0.05)，與腺病毒陰性對(duì)照組比較，差異顯著(P<0.05)；Western blotting 結(jié)果檢測(cè)T-cad 蛋白表達(dá)與mRNA 結(jié)果相一致，見圖3。

Figure 3. Expression of T-cadherin (T-cad) mRNA (A) and protein (B) in cardiomyocytes. M: DNA marker (100～600 bp); 1: control group; 2: H/R group; 3: APN (30 mg/L)+H/R group; 4: Ad-T-cad-siRNA+APN (30 mg/L)+H/R group; 5: Ad-HK+APN (30 mg/L)+HR group.Mean±SD.n=3.*P<0.05vsother groups.

圖3各組心肌細(xì)胞T-cadmRNA和蛋白的表達(dá)

4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率

用Annexin V-FITC/PI對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行雙標(biāo)記染色發(fā)現(xiàn)，正常對(duì)照組細(xì)胞集中在B3區(qū),在B4區(qū)和B2區(qū)內(nèi)無分布或分布甚少,凋亡率極低; H/R組出現(xiàn)大量凋亡細(xì)胞；脂聯(lián)素預(yù)處理后,可見B2和B4區(qū)細(xì)胞分布明顯減少,細(xì)胞凋亡較H/R組明顯減少；沉默T-cad表達(dá)后，再給予脂聯(lián)素處理，心肌細(xì)胞凋亡率較H/R組無明顯差異(P>0.05)，較APN+H/R組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與腺病毒陰性對(duì)照組相比，差異顯著(P<0.05)，見圖4、表1。

Figure 4. The apoptotic rates examined by flow cytometry.

圖4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率

表1各組心肌細(xì)胞凋亡率比較

Table 1. Comparison of apoptotic rates of cardiomyocytes examined by flow cytometry (%.Mean±SD.n=4)

GroupApoptosisrateControl2．33±0．25H/R50．23±1．84?APN+H/R20．46±2．56#Ad?T?cad?siRNA+APN+H/R51．20±3．50?△Ad?HK+APN+H/R21．20±3．70#

*P< 0.05vscontrol group;#P<0.05vsH/R group;△P< 0.05vsAPN+H/R group.

5TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡

激光共聚焦顯微鏡觀察心肌細(xì)胞凋亡情況，TUNEL陽性信號(hào)位于細(xì)胞核，呈綠色熒光，而所有細(xì)胞核經(jīng)DAPI 熒光染料復(fù)染呈藍(lán)色。結(jié)果顯示：正常對(duì)照組偶見細(xì)胞凋亡；H/R 組心肌細(xì)胞綠色熒光顯著增多；APN 預(yù)處理后心肌細(xì)胞中綠色熒光較H/R 組顯著減少；腺病毒沉默T-cad表達(dá)組，綠色熒光增多，與APN+H/R組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與H/R組比較無明顯差異(P>0.05)，與腺病毒陰性對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)，見圖5。

Figure 5. The apoptosis of cardiomyocytes in different groups examined by TUNEL staining. A: control group; B: H/R group; C:APN (30 mg/L)+H/R group; D:Ad-T-cad-siRNA+APN (30 mg/L)+H/R group; E:Ad-HK+APN (30 mg/L)+H/R group.Mean±SD.n=4.*P< 0.05vscontrol group;#P<0.05vsH/R group;△P< 0.05vsAPN (30 mg/L)+H/R group.

圖5TUNEL法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率

討 論

脂聯(lián)素作為脂肪分泌的一種激素，大量研究發(fā)現(xiàn)APN可以減輕缺血再灌注引起的心肌細(xì)胞損傷[8]，Yamauchi等[9]應(yīng)用分子克隆技術(shù)確定脂聯(lián)素的這種保護(hù)作用與其特異性受體有關(guān)，分別為AdipoR1和AdipoR2，其中AdipoR1在骨骼肌分布廣泛， AdipoR2則在肝臟中高度表達(dá)[9]。近年來T-cad作為脂聯(lián)素的一種新受體，因其在心血管系統(tǒng)高度表達(dá)受到人們的廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，T-cad可抑制血管內(nèi)膜增生，在小鼠的頸動(dòng)脈被氣囊導(dǎo)管擴(kuò)張后T-cad會(huì)在新生內(nèi)膜高表達(dá)[10]。同時(shí)，Philippova等[11]也發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生冠狀動(dòng)脈粥樣硬化血管附近存在T-cad和APN 的表達(dá)，暗示冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程中，T-cad起著關(guān)鍵的作用。另外，T-cad可通過抑制PERK信號(hào)途徑，對(duì)抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[12]。

因此，為了確定T-cad在心肌細(xì)胞缺血再灌注的作用，本實(shí)驗(yàn)?zāi)７滦募〖?xì)胞缺血再灌注，體外建立H/R模型，并通過腺病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)沉默T-cad，同時(shí)給予APN處理，發(fā)現(xiàn)與APN+H/R組和腺病毒陰性對(duì)照組相比，心肌細(xì)胞凋亡率明顯增高(P<0.05)；與H/R組相比，凋亡率無明顯差異(P>0.05)。所以我們得出結(jié)論：T-cad這一受體在脂聯(lián)素發(fā)揮對(duì)缺氧復(fù)氧引起的心肌細(xì)胞的損傷中起著關(guān)鍵性的作用，此受體的缺失使APN與心肌細(xì)胞失去聯(lián)系，從而不能更好地發(fā)揮其對(duì)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧的保護(hù)作用。與我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致的，Denzel等[13]研究也發(fā)現(xiàn)，在小鼠缺血再灌注損傷和心肌肥大的模型中，T-cad基因敲除小鼠心肌梗死面積增大，且同時(shí)給予腺病毒介導(dǎo)的脂聯(lián)素后，并不能逆轉(zhuǎn)上述變化[13]。但是在此過程中，AdipoR1和AdipoR2作為經(jīng)典的脂聯(lián)素受體所起的作用，是獨(dú)立于脂聯(lián)素而存在，或者是作為次要的受體和T-cad起著協(xié)同的作用，還未有明確的結(jié)論。另一方面，脂聯(lián)素結(jié)合AdipoR1和AdipoR2后，主要是通過激活A(yù)MPK、PPARα、Rab5b和PI3K等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮其抗脂肪酸氧化、蛋白質(zhì)降解、細(xì)胞保護(hù)等作用[14]。對(duì)于T-cad，因其具有不同于AdipoR1和AdipoR2的7次跨膜結(jié)構(gòu)，同時(shí)缺乏跨膜區(qū)和細(xì)胞內(nèi)結(jié)合區(qū)域，僅僅通過GPI附著于細(xì)胞膜上，近年來研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)的T-cad可以通過PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通道，降低胰島素的抵抗[15]。但是，在心血管系統(tǒng)，其作用的發(fā)揮和上述PI3K/Akt/mTOR等通道是否有著聯(lián)系，尚需進(jìn)一步詳細(xì)研究。

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EffectsofT-cadherinonhypoxia/reoxygenation-inducedapoptosisofcardiomyocytesfromneonatalrats

SUN Ya-li, BIAN Yun-fei, SUN Xu, LIU Gai-zhen, BAI Rui, XIAO Chuan-shi

(DeoatmentofCardiology,TheFirstAffiliatedHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China.E-mail:yunfeibian@sina.com)

AIM: To investigate the mechanism of cardiomyocyte apoptosis induced by hypoxia/reoxygenation (H/R) by silencing a new adiponectin receptor T-cadherin through adenovirus-mediated RNA interference.METHODSThe primary cardiomyocytes were isolated from neonatal rats and cultured for 72 h. The cardiomyocytes were randomly divided into control group, H/R group, APN+H/R group, Ad-T-cadherin-siRNA+APN+H/R group and Ad-HK (adenovirus negative control)+APN+H/R group. The transfection ability and efficiency were examined. The expression of T-cadherin at mRNA and protein levels was detected by RT-PCR and Western blotting. The apoptotic rate was analyzed by flow cytometry and TUNEL.RESULTSHigh purity of neonatal rat cardiomyocytes was obtained by primary culture. After 48 h, over 90% of myocardiocytes were infected at MOI=100. The transfected myocardiocytes showed a low expression level of T-cadherin under normal physiological condition. Compared with APN+H/R group, the cell apoptotic rate significantly increased in Ad-T-cadherin-siRNA+APN+H/R group (P<0.05). Compared with H/R group, the difference was not statistically significant (P>0.05).CONCLUSIONAd-T-cadherin-siRNA effectively infects myocardial cellsinvitroand successfully reduces the expression of T-cadherin in myocardial cells. The inhibitory effect of adiponectin on H/R-induced cardiomyocyte apoptosis is attenuated by decreasing the expression of T-cadherin.

Adiponectin; T-cadherin; Cardiomyocytes; RNA interference; Hypoxia/reoxygenation

R541

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.05.004

1000- 4718(2013)05- 0790- 06

2012- 12- 10

2013- 04- 02

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81170198)

△通訊作者 Tel: 0351-3365787; E-mail: yunfeibian@sina.com