大補陰丸及加減方對去卵巢更年期模型大鼠血清FSH、LH及體質量、腎上腺指數的影響

汪文來，趙紅霞，金香蘭，張 玲，王 震，盧賀起，岳廣欣，于 崢，張立石

(中國中醫科學院中醫基礎理論研究所，北京 100700)

更年期綜合征［1］中醫常將其歸屬于絕經前后諸證、郁證及臟躁，是由于婦女年屆七七，腎氣漸衰，天癸將竭，沖任二脈空虛，精血虧乏，臟腑失去濡養，加之情志因素，使陰陽失調和臟腑之間失去平衡而發病。以月經紊亂、烘熱汗出、煩躁失眠、腰酸乏力等為主癥。本實驗以去勢雌性更年期模型大鼠為研究對象，探討大補陰丸及加減方的干預效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 選用 SPF級 Wistar大鼠76只，體質量200±10g，由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供(許可證號 SCXK-(軍)2007-004)。大鼠飼養和實驗均在中國中醫科學院中醫基礎理論研究所清潔級實驗動物室內進行(實驗動物室許可證號SYXK(京)-2005-0024)。

1.1.2 藥物 大補陰丸為杭州胡慶余堂藥業有限公司生產的水蜜丸(批號101227)。大補陰丸加減方由知母、熟地、炒黃柏、醋炙龜板、丹皮、三七等藥組成。大補陰丸水蜜丸粉碎成細粉，以蒸餾水配成1∶2(藥∶水);大補陰丸加減方以水煎煮濃縮至1g/mL，均置4℃冰箱備用。

1.1.3 主要試劑 FSH、LH的 ELISA試劑盒為武漢Uscn公司生產。

1.1.4 主要儀器 酶標儀:美國Biotek公司。

1.2 方法

1.2.1 分組及處理 先將76只大鼠隨機分為3組，其中空白對照組10只，假手術組10只和造模組56只。造模組大鼠用戊巴比妥鈉麻醉后摘除雙側卵巢［2］，假手術組只摘取卵巢周圍少許脂肪組織。術后常規飼養60d，在造模成功的大鼠中選取56只，按體質量均衡隨機分為4組，其中模型組14只，陽性對照組14只，大補陰丸組14只，大補陰丸加減組14只，然后開始給藥。大補陰丸組灌胃給予濃度為 1g生藥/2mL的水溶液，即每天灌服 0.75mL/100g/體質量，相當于服生藥 0.375g/100g/體質量。大補陰丸加減組灌胃給予濃度為1g生藥/mL的水煎劑，即每天灌服1.54mL/100g/體質量，相當于服生藥1.54g/100g/體質量。陽性對照組灌胃給予0.008mg/mL的己烯雌酚，給藥體積為0.9mL/100g/體質量，給藥量相當于 0.0072 mg/100g/體質量。以上灌胃給藥3個月，每天1次，連續6d，休息1d，再連續給藥6d。空白對照組、假手術組、模型組按上法灌服等體積的純凈水。其余各組根據動物體質量計算給予相應量的藥液。動物給藥90d后，空腹狀態、麻醉，腹主動脈取血、離心，分離血清，－80℃低溫保存。每周稱體質量1次。

1.2.2 外周血血清中促卵泡激素(FSH);促黃體生成激素(LH)含量的檢測 采用ELISA法檢測血清FSH和LH的含量。具體步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.2.3 腎上腺指數的檢測 大鼠處死前禁食12h，麻醉后開腹取材。經腹主動脈采血檢測變化，取腎上腺稱量其重量與體質量之比計算腎上腺指數(臟器指數=臟器質量mg/體質量g×100)。

1.3 統計學方法

實驗結果皆以均數±標準差(珋x±s)表示，采用方差分析(ANOVA)，組間兩兩比較，采用q檢驗。

2 結果

2.1 大補陰丸及加減方對去卵巢大鼠所致更年期綜合癥大鼠血清中FSH含量的影響

表1 各組大鼠血清FSH水平的比較(珋x±s)

表1顯示，模型組大鼠血清 FSH水平顯著升高，陽性對照組與模型組比較(P＜0.01)，差異有統計學意義。大補陰丸與模型組比較(P＜0.05)，FSH顯著降低。大補陰丸加減組與模型組比較(P＜0.01)，差異有統計學意義。

2.2 大補陰丸及加減方對去卵巢大鼠所致更年期綜合癥大鼠血清中LH含量的影響

表2顯示，模型組大鼠血清LH水平顯著升高，陽性對照組與模型組比較(P＜0.01)差異有統計學意義。大補陰丸及加減組與模型組比較，LH顯著降低(P＜0.05)。

2.3 大補陰丸及加減方對去卵巢大鼠所致更年期綜合癥大鼠體質量的影響

表3顯示，與空白對照組和假手術組比較，模型組大鼠體質量明顯增加(P＜0.01);與模型組比較，大補陰丸及加減組、陽性對照組大鼠體質量明顯降低(P ＜0.01)。

表2 各組大鼠血清LH水平的比較(珋x±s)

表3 各組大鼠體質量水平的比較(珋x±s)

2.4 大補陰丸及加減方對去卵巢大鼠所致更年期綜合癥腎上腺指數的影響

表4 各組大鼠腎上腺指數的比較(珋x±s)

表4顯示，與空白對照組和假手術組相比，模型組大鼠腎上腺指數明顯降低(P＜0.01)。與模型組相比，陽性對照組腎上腺指數顯著升高(P＜0.01)，大補陰丸及加減組腎上腺指數明顯升高(P＜0.05)。

3 討論

大補陰丸原名叫“大補丸”，出自元代醫學家朱震亨所著《丹溪心法》一書。該方系朱氏滋陰降火學說的代表方，由熟地黃、炙龜板、黃柏、知母、豬脊髓組成，其組方體現了丹溪“陽常有余，陰常不足”的學術思想，用藥強調瀉相火而補腎陰，因此本方是用于治療婦女更年期綜合征的有效方法之一。大補陰丸加減方是在大補陰丸原方基礎上加入丹皮、三七等清熱涼血、活血化瘀之品，達到滋陰補腎、化瘀活血、養血填精之效，從而治療更年期綜合征。

更年期綜合癥主要表現為生殖內分泌功能障礙與植物神經功能失調的一組證候群。現代醫學認為，更年期婦女由于卵巢功能衰退，雌激素分泌逐漸減少，體內僅有低水平的雌激素，是其發生更年期綜合癥的主要原因。FSH、LH均由腺垂體分泌，其中FSH可促進卵泡的各種細胞生長發育以利于生殖細胞的成熟，并可促進新細胞合成FSH受體，從而增強FSH對卵泡生長發育的作用;而LH可使顆粒細胞黃素化并分泌黃體酮。由于雌激素不足，對下丘腦-垂體不能進行有效的負反饋，致使垂體分泌促性腺激素增加［3］。

本實驗選擇去勢的造模方法，切除雙側卵巢(OVX)而人為制造卵巢功能突然減退的環境來模擬更年期綜合癥發生。結果表明，與空白對照組比較，模型組大鼠血清 FSH、LH(P＜0.01)水平明顯升高。陽性對照組與模型組比較(P＜0.01)，差異有統計學意義。大補陰丸及加減方能顯著降低OVX大鼠FSH、LH及體質量水平，并能明顯升高大鼠腎上腺指數。實驗結果與更年期婦女生殖內分泌情況一致。說明婦女進入更年期后，卵巢功能逐漸衰退，雌激素水平下降，導致下丘腦-垂體-卵巢軸的平衡失調，出現植物神經功能紊亂等一系列癥狀，如月經紊亂、烘熱汗出、煩躁失眠等。大補陰丸及加減方通過滋陰降火、養血填精調節和改善更年期綜合征癥狀。本實驗證實，大補陰丸及加減方可糾正模型大鼠FSH、LH激素水平，使其向正常平衡恢復，具有降低OVX大鼠體質量增速過快作用，能緩解OVX大鼠腎上腺萎縮狀況，對婦女更年期綜合征防治具有積極意義。

［1］ 許麗綿，歐陽惠卿，盧如玲.更年期綜合征病因病機及其證治述要［J］.中醫藥學刊，2003，21(9):1550-1552.

［2］ 鞠大宏，張春英，王安民，等.溫補腎陽方對去卵巢所致骨質疏松癥大鼠IL-1和IL-6活性的影響［J］.中國中醫基礎醫學雜志，2000，6(4):29-32.

［3］ 葉玉妹，楊慰，韓文均，等.寧神顆粒對實驗性更年期雌性大鼠性激素和免疫功能的影響［J］.時珍國醫國藥，2012，23(2):344-346.