血清乙型肝炎病毒載量的研究

來永廣 王玉霞

血清乙型肝炎病毒載量的研究

來永廣 王玉霞

目的 研究血清病毒載量與乙型肝炎病毒基因型的關系。方法 選擇在2010年3月至2012年是本院收治的100例乙型肝炎感染患者作為研究對象, 分別對乙型肝炎感染患者病毒基因型和血清病毒載量進行有效的檢測和記錄, 并對檢測結果進行有效的分析。結果 通過對100例乙型肝炎感染患者基因型進行檢測, 其中B型有36例, C型有56例, BC型有8例。C型病毒基因患者HBV-DNA為(7.01±1.16)log值, HBeAg為66.7%, 均比B型病毒基因患者高, 而C型病毒基因患者 HBeAb陽性率為33.3% , 比B型病毒基因患者低。結論 乙型肝炎患者病毒基因型多為C型, 乙型肝炎病毒C型基因患者血清病毒載量明顯高于乙型肝炎病毒B型基因患者, 臨床上依據血清病毒載量, 明確乙型肝炎病毒基因型。

血清；乙型肝炎病毒；載量

臨床研究表明, 乙型肝炎病毒可分為A至H8個不同基因型。不同基因型具有不同的在血清病毒載量, 對預后效果也有所不同。因此, 醫務人員在對乙型肝炎病毒感染患者進行檢診療時, 可通過血清病毒載量, 明確病毒基因型, 為乙型肝炎臨床治療提供重要依據。本文就山東省莒縣人民醫院肝病科于收治的100例乙型肝炎感染患者作為研究對象, 對患者基因型和血清病毒載量進行有效的檢測和分析, 具體情況如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇在2010年3月至2012年本院收治的100例乙型肝炎感染患者作為研究對象, 其中男54例, 女47例, 患者年齡在16~68歲之間, 平均32. 7歲；其中慢性乙型肝炎有45例,原發性肝癌有18例, 乙型肝炎并發肝硬化有37例。對所有患者進行組織活檢、病理檢查和臨床診斷后, 均確診為乙型肝炎感染患者, 并將重疊感染患者排除, 且所有患者在檢測前, 未采取任何抗病毒預防和治療措施。

1.2 方法

1.2.1 檢測試劑 在乙型肝炎病毒基因型和血清病毒載量實驗中, 所需的檢測試劑主要包括乙型肝炎病毒熒光試劑盒、乙肝三系試劑、乙型肝炎病毒基因芯片、引物及探針等。

1.2.2 檢測方法 ①乙型肝炎病毒血清標志物的檢測。血清病毒載量主要通過熒光定量PCR進行檢測, 而乙肝三系則主要通過具有化學發光作用的為微粒子型免疫儀進行檢測。②乙型肝炎病毒基因型的檢測。提取乙肝病毒基因與PCR檢測條件設置。檢測人員必須按照具體的操作要求, 將乙肝病毒基因有效的提出。PCR檢測條件：使乙型肝炎病毒模板及其PCR 檢測液在PCR檢測擴增儀中進行有序循環, 具體如下, 在溫度為94 ℃條件進行5min預變性后, 按照溫度94 ℃條件預變性30s——溫度50℃條件預變性30s——溫度72 ℃ 條件預變性30s的順序進行循環, 共需循環35次, 最后再將其放入溫度為72℃條件下進行延伸, 時間為5min。基因芯片雜交及顯色。當把PCR反應檢測形成產物放置到溫度為98 ℃進行5min變性后, 快速將其放置到冰浴中, 時間為5min, 然后取出2L變性物, 把適量雜交液加入變性物后混勻, 并取適量滴至基因芯片中的雜交艙內, 然后將基因芯片快速放置到溫度為39 ℃的保溫箱中, 時間為30min, 即可完成基因芯片雜交試驗［1］。將基因芯片取出, 然后對其進行有效的清洗后, 將剩余液體清除, 然后再向芯片雜交艙添加適量的現實液體, 放置到溫度為39 ℃的保溫箱中, 時間為40min,最后將芯片雜交艙清除, 同時用蒸餾水對芯片顯色區域進行有效的清洗, 放置到溫度為39 ℃ 條件下進行烘干, 最后利用芯片檢測以及相關軟件, 讀取芯片檢測數據。乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸序列對 PCR擴增后的產物和p GEM-T載體之間的連接；與大腸埃希菌間的轉化；與菌落間的篩選等進行有效的鑒定, 并對陽性克隆進行有效檢查和分析, 最后對乙型肝炎病毒基因型和基因型芯片測試結果進行有效的對比。

2 結果

2.1 乙型肝炎病毒基因型

通過對100例乙型肝炎感染患者基因型進行檢測, 其中B型有35例, C型有57例, BC型有8例。乙型肝炎病毒基因型檢測結果與其基因芯片測試結果相符合。

2.2 乙型肝炎病毒基因型與血清病毒載量關系

由表1可知, C型病毒基因患者HBV-DNA為(7.01±1.16) log值, HBeAg為66.7%, 均比B型病毒基因患者高, 而C型病毒基因患者 HBeAb陽性率為33.3% , 比B型病毒基因患者低。

表1 乙型肝炎病毒基因型與血清病毒載量關系分析

3 討論

乙型肝炎病毒基因型能夠對乙型肝炎病毒感染變異進行有效的反應, 是乙型肝炎病毒感染患者預防和質量的重要影響因素, 并形成一定的區域性特點。通過對乙型肝炎病毒基因型進行研究后, 發現大多數乙型肝炎病毒感染患者基因型主要以C 型及B 型較多。本文通過對本院收治的100例乙型肝炎病毒感染患者基因型進行檢測, 發現B型有35例, C型有57例, BC型有8例。充分說明了乙型肝炎病毒基因型檢測結果與其基因芯片測試結果相符合［2］。

不同乙型肝炎病毒基因序列存在的差異性, 導致血清病毒蛋白表達受到一定的影響, 同時不同的乙型肝炎病毒基因, 其病毒復制情況、血清病毒載量及發病機制也將有所不同, 從而導致乙型肝炎病毒感染患者病癥表現、預后效果均有所不同。現階段很多醫學研究者認為, 乙型肝炎病毒C基因型容易對患者肝臟造成嚴重損害, 預后效果較差。有關研究表明, 乙型肝炎病毒B基因型抗原體系中的血清更換幾率較高, 發生時間較早, 病毒復制時間相對較短, 而C基因型則相反, 因此容易對患者肝臟造成嚴重損害［3］。本研究結果顯示, C型病毒基因患者HBV脫氧核糖核酸為(7.01±1.16)log值, 乙型肝炎E抗原陽性率為66.7%, 均比B型病毒基因患者高, 而C型病毒基因患者HBVE抗體陽性率為33.3% , 比B型病毒基因患者低。證明了乙型肝炎病毒C基因型患者存在較高的血清病毒載量, 并對病毒預后結果造成嚴重影響, 必須引起醫務人員的高度重視。

總之, 大多數的乙型肝炎患者病毒基因型均為C型, 且乙型肝炎病毒C型基因患者血清病毒載量明顯高于乙型肝炎病毒B型基因患者, 并對病毒預后效果具有一定的影響, 臨床上依據乙型肝炎病毒血清病毒載量, 明確其基因型, 做好相關預后, 以保證病毒預后效果。

［1］ 陳成進.乙型肝炎病毒檢測技術的研究進展.職業與健康, 2011, 9(8):89-90.

［2］ 汪文明,簡芳,楊夕,等.乙型肝炎患者3種血清標志物模式HBV DNA含量比較.檢驗醫學與臨床, 2010,12(19):76-77.

［3］ 韓立兵,龐曉鷹,于立新等.乙型肝炎病毒前S1抗原與病毒復制水平的相關性.實用臨床醫藥雜志, 2010,3(23):54-55.

276500 山東省莒縣人民醫院肝病科(來永廣) ；山東省莒縣浮來山衛生院（王玉霞）