阿司匹林聯(lián)合氟尿嘧啶對肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用

盧雪如等

【摘要】 目的 體外實驗探討阿司匹林聯(lián)合氟尿嘧啶對肝癌細(xì)胞增殖的影響。方法 實驗分對照組、阿司匹林組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組，各組分別以不同劑量藥物處理肝癌細(xì)胞48小時，CCK-8法檢測細(xì)胞抑制率，計算兩藥的聯(lián)合效應(yīng)。結(jié)果 與對照組相比，阿司匹林單獨用藥可抑制肝癌細(xì)胞的增殖，呈劑量依賴關(guān)系（P<0.01）。與氟尿嘧啶組相比，聯(lián)合用藥組可提高對肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用（P<0.01），呈現(xiàn)相加效應(yīng)（0.85≤Q≤1.15）。結(jié)論 阿司匹林聯(lián)合氟尿嘧啶能提高對肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用，具有相加效應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】 阿司匹林；氟尿嘧啶；肝癌細(xì)胞；細(xì)胞增殖

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.08.487 文章編號：1004-7484（2013）-08-4510-02

原發(fā)性肝癌是一種嚴(yán)重影響人類健康的惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率較高。我國是世界上肝癌高發(fā)區(qū)之一，發(fā)病率為20.37/10萬，位于常見腫瘤第三位[1]。氟尿嘧啶（fluorouracil，F(xiàn)U）是治療腫瘤、預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)以及腫瘤復(fù)發(fā)后化療最常用的藥物之一，以FU為基礎(chǔ)制定的化療方案在臨床上得到廣泛應(yīng)用，但是，肝癌對FU具有一定的耐藥性，而且FU可以對機體的正常細(xì)胞產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用[2]，大劑量使用FU可以引起腎功能損害及嚴(yán)重的胃腸道反應(yīng)，從而限制了FU的臨床應(yīng)用及療效的提高[3]。阿司匹林（acetysalicylic acid，ASA），又名乙酰水楊酸，是常用的非甾體類解熱、鎮(zhèn)痛藥和抗炎藥，對胃腸道腫瘤有抑制作用和預(yù)防作用[4]。長期服用阿司匹林能有效降低結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤的發(fā)病率，表明其在腫瘤的防治中有廣泛的應(yīng)用前景[5]。目前國內(nèi)關(guān)于阿司匹林聯(lián)合氟尿嘧啶對肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用研究未見報道。本研究旨在探討這兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用提高對肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用，為臨床治療肝癌提供證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），DMEM（GIBCO，上海英駿生物有限公司），胰酶細(xì)胞消化液（Beyotime），CCK-8試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所），阿司匹林（南京都萊生物技術(shù)有限公司），氟尿嘧啶注射液（FU，25mg/mL，天津金耀氨基酸有限公司），用無血清培養(yǎng)液稀釋至2.5mg/mL備用。

1.1.2 儀器 多功能酶標(biāo)儀（Biotek），倒置顯微鏡（OLYMPUS），CO2培養(yǎng)箱（RSBiotech），超凈工作臺（蘇凈集團蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）。

1.1.3 細(xì)胞株 人肝癌細(xì)胞株HepG2，由廣東醫(yī)學(xué)院衰老研究所提供。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 將人肝癌細(xì)胞置于含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，37℃，飽和濕度，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.2 阿司匹林和氟尿嘧啶處理肝癌細(xì)胞 實驗分為對照組、阿司匹林組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組。阿司匹林組中4個劑量終濃度分別是0.5、1、2、4mmol/L。氟尿嘧啶組藥物終濃度是0.1mg/mL。聯(lián)合用藥組中氟尿嘧啶藥物終濃度均為0.1mg/mL，阿司匹林4個劑量終濃度分別是0.5、1、2、4mmol/L。取對數(shù)生長期細(xì)胞，每孔5000個細(xì)胞接種于96孔板，加入含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液100μL培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后加入藥物。實驗組每個劑量設(shè)5個復(fù)孔，每孔加入5μL相應(yīng)濃度藥液。對照組加相等體積的無血清培養(yǎng)基。培養(yǎng)48h后檢測。

1.2.3 CCK-8法測定細(xì)胞抑制率 取1.2.2處理后的細(xì)胞，采用CCK-8法于450nm波長下測定光吸收值A(chǔ)450，計算細(xì)胞抑制率。細(xì)胞抑制率=（1-實驗組A450/對照組A450）×100%。

1.2.4 阿司匹林和氟尿嘧啶兩藥相加作用判斷 按金（正均）氏公式進(jìn)行判斷[6]。金氏公式為Q=EA+B/（EA+EB-EAEB）。式中EA為阿司匹林單獨處理的細(xì)胞抑制率，EB為氟尿嘧啶單獨處理的細(xì)胞抑制率，EA+B為兩藥聯(lián)合處理的細(xì)胞抑制率：Q<0.85表示兩藥合用有拮抗作用；Q>1.15表示兩藥合用有協(xié)同作用；0.85≤Q≤1.15表示兩藥合用有相加作用。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 實驗數(shù)據(jù)以（χ±s）表示，采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，組間差異顯著性比較采用t檢驗，p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 阿司匹林聯(lián)合氟尿嘧啶抑制肝癌細(xì)胞增殖 與對照組相比，不同濃度阿司匹林可抑制肝癌細(xì)胞的增殖，呈劑量依賴性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），見表1。與氟尿嘧啶組相比，阿司匹林聯(lián)合氟尿嘧啶可提高對肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用（P<0.01），0.85≤Q≤1.15，兩藥聯(lián)用具有相加作用，見表2。

3 結(jié) 論

本研究表明，阿司匹林和氟尿嘧啶均可抑制體外肝癌細(xì)胞生長。不同濃度阿司匹林可抑制肝癌細(xì)胞的增殖，隨著藥物濃度的增加，抑制作用增強。阿司匹林與氟尿嘧啶聯(lián)合用藥可提高對肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用，具有相加作用。阿司匹林和氟尿嘧啶均能抑制肝癌細(xì)胞生長，但兩種藥物的抗腫瘤機制不同。阿司匹林對腫瘤細(xì)胞的影響主要通過抑制環(huán)加氧酶-1（COX-1）及環(huán)加氧酶-2（COX-2）表達(dá)而起作用[7]。COX-l在許多組織均有表達(dá)，產(chǎn)生前列腺素從而保護(hù)胃黏膜及擴張腎血管。而COX-2過度表達(dá)可增加前列腺素E2的合成進(jìn)而抑制機體的免疫功能，有利于腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，還能使自由基活性增加而引起突變，并能促進(jìn)腫瘤血管生長等一系列促腫瘤作用[8]。氟尿嘧啶對腫瘤細(xì)胞的抑制主要是通過體內(nèi)代謝產(chǎn)生的5-F-dUMP從而抑制DNA的合成[9]。阿司匹林聯(lián)合氟尿嘧啶抑制肝癌細(xì)胞的增殖可能與上述機制有關(guān)。聯(lián)合治療可使多種藥物獲得相加作用，產(chǎn)生最大的抑瘤效應(yīng)，減少用藥量，降低不良反應(yīng)。臨床上可通過阿司匹林和氟尿嘧啶聯(lián)合應(yīng)用，提高抗癌療效。

參考文獻(xiàn)

[1] 王星剛，劉剛.原發(fā)性肝癌的綜合治療方法探討[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2007，11（15）：695-696.

[2] 陳忠南，徐克前.表觀遺傳學(xué)藥物FK228聯(lián)合氟尿嘧啶對肝癌細(xì)胞增殖、凋亡及Fas mRNA表達(dá)的影響[J].中南大學(xué)學(xué)報，2009，34（2）：124-129.

[3] 馮婷，劉霞，趙明耀等.牛膝多糖聯(lián)合5-氟尿嘧啶對食管癌的作用及相關(guān)機制的探討[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2011，36（5）：531-534.

[4] 王美榮，戚之琳.阿司匹林對SMMC-7721人肝癌細(xì)胞增殖的影響[J].皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，29（4）：243-245.

[5] Avivi D，Moshkowitz M，Detering E，et al.The role of lowdose aspirin in the prevention of colorectal cancerJ].Expert Opin Ther Targets，2012，16（Suppl 1）：51-62.

[6] 翟曉波，盧愛國.氟尿嘧啶和絲裂霉素聯(lián)合用藥體外藥敏試驗在大腸癌中的應(yīng)用[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2006，23（5）.

[7] 李淑芳.阿司匹林藥效學(xué)研究進(jìn)展[J].中國民族民間醫(yī)藥，2012，（1）：31-33.

[8] 江平，劉志蘇.阿司匹林對肝癌細(xì)胞生長的抑制作用及其機制[J].中華實驗外科雜志，2008，25（11）：1391-1393.

[9] 韓玉霞.單吡啶基卟啉-5-氟尿嘧啶化合物的合成及抗癌活性的研究[D].河北省：河北師范大學(xué)，2009.