面向藥物分析專業(yè)本科生的實(shí)驗(yàn)教學(xué)

摘要：面向藥物分析專業(yè)本科生開展高效液相色譜實(shí)驗(yàn)課程很有必要。課程的開設(shè)有助于學(xué)生理解高效液相色譜的基本概念和了解高效液相色譜技術(shù)在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用情況，對(duì)擴(kuò)大學(xué)生知識(shí)面，啟發(fā)學(xué)生科研興趣有利。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；實(shí)驗(yàn)教學(xué)；本科生；藥物分析

中圖分類號(hào)：G642.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1674-9324（2013）24-0270-02

以培養(yǎng)具有創(chuàng)新性思維和較強(qiáng)動(dòng)手能力、適應(yīng)我國(guó)21世紀(jì)新藥研究開發(fā)需要的藥學(xué)人才為指導(dǎo)思想，藥物分析課程旨在通過(guò)教學(xué)使學(xué)生了解新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂的基本原理，掌握對(duì)已知結(jié)構(gòu)的藥物進(jìn)行定性和定量測(cè)定的常見分析方法并在此基礎(chǔ)上熟悉一些藥物分析的新方法、新技術(shù)。實(shí)驗(yàn)教學(xué)是藥物分析的重要環(huán)節(jié)，占有較大的比重，實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量對(duì)學(xué)生加深理解和鞏固所學(xué)的理論知識(shí)，正確熟練地掌握實(shí)驗(yàn)的基本操作和技能，培養(yǎng)學(xué)生良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣、實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度和嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的工作作風(fēng)，培養(yǎng)學(xué)生掌握藥物的質(zhì)量控制和質(zhì)量保證能力將起到重要作用[1，2]。因此，在藥物分析的整個(gè)學(xué)習(xí)過(guò)程中要求學(xué)生既重視藥品質(zhì)量分析的基礎(chǔ)理論知識(shí)的學(xué)習(xí)，又要重視實(shí)驗(yàn)技能的訓(xùn)練。我校藥物分析教學(xué)始于1958年，在長(zhǎng)期的教學(xué)過(guò)程中，我們不斷總結(jié)教學(xué)過(guò)程，尋找問(wèn)題，實(shí)施實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過(guò)高效液相色譜測(cè)定維生素A中視黃醇、視黃醛、視黃酸、維生素A醋酸酯的含量，了解高效液相色譜的測(cè)定原理以及與傳統(tǒng)三點(diǎn)校正法相比較之下的優(yōu)越性，熟悉高效液相色譜的使用，引導(dǎo)、培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

高效液相色譜法[3，4]（high performance liquid chromatography，HPLC）是在20世紀(jì)60年代末期迅速發(fā)展起來(lái)的用于有機(jī)物定量分析的儀器分析方法。HPLC是在經(jīng)典液相（柱）色譜的基礎(chǔ)上，采用了由全多孔或非多孔高效微粒（1.7~10μm）固定相制備的色譜柱，由高壓輸液泵輸送流動(dòng)相，用高靈敏度檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了高柱效、高選擇性、高靈敏度的快速分析，并成為有機(jī)物定量分析的主要分析工具。

三、實(shí)驗(yàn)

1.儀器和試劑。日本島津LC-15C高效液相色譜儀，UV 2401-PC紫外分光光度計(jì)，維生素A醋酸酯標(biāo)準(zhǔn)品（Dr.Ehrenstorfer），美國(guó)sigma公司視黃醇、視黃醛、視黃酸標(biāo)準(zhǔn)品，甲醇（色譜純），異丙醇（分析純），環(huán)己烷（分析純）試藥維生素A軟膠囊（上海東海制藥），實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

2.溶液的配制。①供試品溶液，取樣品20丸，擠出內(nèi)容物，取0.1463g于10ml容量瓶，異丙醇溶解并定容至刻度，用甲醇稀釋成14.63μg/ml進(jìn)樣分析。②對(duì)照品溶液，精密稱取視黃醇、視黃醛、視黃酸和維生素A醋酸酯對(duì)照品適量，置容量瓶中，加異丙醇溶解并用甲醇定容至刻度，配制成各對(duì)照品濃度約為12μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

3.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。①對(duì)東海制藥生產(chǎn)的維生素A軟膠囊，按上述色譜條件測(cè)定，用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，同時(shí)按照藥典執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法測(cè)定含量。2種方法測(cè)定結(jié)果見表1。②人工用對(duì)照品模擬樣品，HPLC法測(cè)定結(jié)果見表2。

但是UV法只能測(cè)得Va醋酸酯含量，不能測(cè)得視黃醇、視黃醛和視黃酸的含量，具有一定的局限性。

四、總結(jié)

通過(guò)高效液相測(cè)定維生素A醋酸酯的含量與中國(guó)藥典收錄的三點(diǎn)校正法[7]的比較，發(fā)現(xiàn)HPLC法和三點(diǎn)校正法都能測(cè)定維生素A軟膠囊中維生素A醋酸酯的含量，但是兩種方法在應(yīng)用范圍上存在一定的區(qū)別。三點(diǎn)校正法適合純度比較高的維生素A醋酸酯[5]，通過(guò)三點(diǎn)校正法雖然可消除某些雜質(zhì)的影響，使得該法在Va制劑含量測(cè)定中始終發(fā)揮著重要作用，但是不能夠單獨(dú)測(cè)出維生素A中雜質(zhì)的含量。HPLC法更適合純度比較低的維生素A，而且能夠單獨(dú)測(cè)出某種特定的雜質(zhì)的含量。在最新的研究發(fā)現(xiàn)，農(nóng)藥草達(dá)滅對(duì)大鼠體內(nèi)維生素A代謝產(chǎn)物產(chǎn)生影響，因此對(duì)睪丸造成一定的毒性。HPLC法可以對(duì)動(dòng)物體內(nèi)維生素A及其代謝產(chǎn)物即視黃醇、視黃醛、視黃酸進(jìn)行含量測(cè)定[6]，但是紫外三點(diǎn)校正法明顯不行。因此HPLC法顯示出其特有的優(yōu)越性。HPLC法專屬性更強(qiáng)，檢測(cè)靈敏度更高，能更好對(duì)樣品進(jìn)行質(zhì)量控制。分析實(shí)驗(yàn)課中開設(shè)高效液相色譜法和三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素A含量的實(shí)驗(yàn)，可對(duì)同種目標(biāo)分析物的不同分離方法進(jìn)行比較，以加深學(xué)生對(duì)兩種分離方法的理解，從而提高學(xué)生靈活運(yùn)用分離分析方法的能力。目前國(guó)內(nèi)相關(guān)院校已經(jīng)相繼給本科生開設(shè)了毛細(xì)管電泳的實(shí)驗(yàn)，但是關(guān)于該類教學(xué)實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)、全面報(bào)道很少。我們?cè)诜e極給本科生開設(shè)了相關(guān)實(shí)驗(yàn)的同時(shí)，不斷結(jié)合自己的科研成果，使其成為一個(gè)開放式實(shí)驗(yàn)，取得了較好的教學(xué)效果。

參考文獻(xiàn)：

[1]于世林.高效液相色譜法技術(shù)與應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2009.

[2]詹益興.實(shí)用色譜法[M].科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2008.

[3]黃琦，周孝瑞，蔣成君等．面向應(yīng)用型人才培養(yǎng)的藥物分析改革與實(shí)踐[J].安徽醫(yī)藥，2011，15（5）：655-658.

[4]付支鋒，王琳.藥物分析實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革的探索與實(shí)踐[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，12（2）：191-192．

[5]錢玲慧，廖佳宇，李亞妮等.測(cè)定維生素A的三種方法比較[J].實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理，2012，29（5）.

[6]Fabiola G，Zuno-Floriano，Dirk Holstege，et al.Determination of Vitamin A and its Metabolites in Rat Testis：Possible Involvement of Vitamin A in Testicular Toxicity Caused by Molinate[J].Bull Environ Contam Toxicol （2012）88：1038–1042

[7]劉文英.藥物分析（第6版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2010.

作者簡(jiǎn)介：呂燕平（1988-），女，碩士研究生，從事新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

通訊作者：段更利（1954-），男，教授，從事新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。