控制食品細(xì)菌檢驗箱的使用誤差

摘要：在食品檢驗過程中，應(yīng)嚴(yán)格從檢驗流程的各個環(huán)節(jié)加以控制，從樣品抽取、制備、校準(zhǔn)儀器設(shè)備、配制試劑、選擇檢驗方法、控制實驗室環(huán)境、操作人員的熟練程度及對相關(guān)檢驗項目的檢查等幾方面，確保獲得準(zhǔn)確的檢驗結(jié)果。

關(guān)鍵詞：食品細(xì)菌誤差細(xì)菌檢驗箱

【中圖分類號】R-1【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1008-1879（2012）11-0467-01

食品細(xì)菌檢驗箱作為衛(wèi)生裝備用于食品衛(wèi)生監(jiān)督及食品檢驗，是基層單位衛(wèi)生防疫工作的重要工具之一。我中心近幾年開展對此箱使用的培訓(xùn)工作。針對檢驗結(jié)果常常出現(xiàn)的誤差，我們反復(fù)進(jìn)行總結(jié)和驗證，收到了一些效果，現(xiàn)報告如下：

1資料與方法

1.1一般資料。檢驗標(biāo)本為隨機(jī)抽取的食品樣品3份。使用營養(yǎng)瓊脂作為培養(yǎng)基。檢驗儀器為磁力攪拌器，無菌培養(yǎng)皿，細(xì)菌檢驗箱，振蕩器。

1.2方法。各個樣品稱取10g，放入無菌錐形瓶內(nèi)，加入90mL無離子水，磁力攪拌分別為40min。并稀釋成10-1-10-7的不同稀釋度的樣品溶液。傾注平板法檢測菌含量：用移液槍從各個平行樣品相應(yīng)稀釋液中各吸取1mL，每個樣品稀釋液3個重復(fù)，待培養(yǎng)基表面干燥后，將平板倒置于35-37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。平板涂布法檢測菌含量：用移液槍從各個平行樣品相應(yīng)稀釋液中各吸取200uL涂布平板，每個樣品稀釋液3個重復(fù)；將平板倒置于35～37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

2結(jié)果

采用不同的檢測方法，對合生素中芽孢桿菌檢出量的結(jié)果見表1。從表1可見：不同方法獲得的細(xì)菌菌落數(shù)量有差別，傾注平板法相較平板涂布法檢測的菌含量多，但基本在20%的誤差范圍內(nèi)。平板計數(shù)法操作相對簡單、快捷且影響因素較少。傾注法培養(yǎng)基營養(yǎng)分布較均勻，對部分蔓延菌落能控制，但對操作人員熟練程度要求相對較高。

3討論

為了解決檢驗結(jié)果存在較大誤差這一難題，首先要考慮如何準(zhǔn)確選擇樣品稀釋度。如果對樣品污染程度估計過高而選擇較高的稀釋倍數(shù)，可能導(dǎo)致生長的菌落過少而失去計數(shù)意義；相反，如果對樣品污染程度估計不足而選擇較低的稀釋倍數(shù)，菌落數(shù)過多呈疊加或融合生長而導(dǎo)致無法計數(shù)。如果是針對食物中毒的回顧性微生物檢驗，則會帶來一定的影響和損失[1]。正確的做法是：遵照食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求以及對標(biāo)本種類、污染情況的估計來選擇適宜的稀釋度，結(jié)合檢驗?zāi)康膩泶_定。如果只需檢驗該食品細(xì)菌數(shù)是否超標(biāo)，只須做一個稀釋度即可；如需得出具體數(shù)目則須做3個稀釋度（以10倍遞增），對于污染食品至少要選擇3個以上的稀釋倍數(shù)（以10倍遞增），以保障檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。掌握培養(yǎng)基煮沸時間檢驗箱大多檢驗方法在常規(guī)的實驗室檢驗方法上進(jìn)行了改良。正確的操作是將已加入瓊脂培養(yǎng)基的試管放入水中煮沸15min。一定要守時，不要提前中止。在此期間，沸騰的瓊脂隨時會因內(nèi)部壓力增大而從試管內(nèi)噴發(fā)出來，造成人員傷害。因此，用于煮沸試管的器皿（本箱提供的是電熱杯）一定要加蓋，并要等到沸騰停止后再開蓋取出試管。做大腸菌群測定時，檢驗箱將傳統(tǒng)的試管法改良為新發(fā)酵盒法，待檢樣品不用再進(jìn)行稀釋，操作簡便、易行。但因煮沸蒸發(fā)水分而導(dǎo)致培養(yǎng)基容量減少達(dá)不到發(fā)酵盒刻度，需在煮沸前適量增加水量以補(bǔ)充不足。準(zhǔn)確控制加樣時瓊脂溫度加待檢樣品（以下簡稱加樣）時瓊脂溫度的掌握和加樣動作的速度都是影響試管斜面質(zhì)量的重要因素，也是影響最后細(xì)菌計數(shù)能否準(zhǔn)確的一個關(guān)鍵階段[2]。多數(shù)致病菌生長的最適宜溫度是35℃，高溫對細(xì)菌有明顯的致死作用，多數(shù)細(xì)菌在55-60℃經(jīng)30-60min后死亡，而瓊脂在45℃以下時凝固成膠凍狀[3]。因此，加樣時培養(yǎng)基溫度既不能高于55℃又不能低于45℃，而此時培養(yǎng)基的溫度無法靠溫度計來準(zhǔn)確測量，只有通過手測法來估計，一般以手握試管感到熱但不燙手為宜，此時溫度約在45℃左右。人體對溫度的感覺有一定的差異，可事先對已知水溫進(jìn)行反復(fù)訓(xùn)練、體會后，才能準(zhǔn)確把握加樣時溫度。切忌在50℃以上加樣。如試管內(nèi)瓊脂溫度未達(dá)到45℃時加入待檢樣品，會導(dǎo)致瓊脂很快凝固，來不及制成斜面。經(jīng)驗及技巧為了減少檢驗結(jié)果的誤差，提高檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信度，除了以上影響因素外，還要注意以下3方面：一是培養(yǎng)基的濃度一定要夠，在具體要求的誤差內(nèi)，寧多不少，否則會因營養(yǎng)不夠細(xì)菌生長不良或不生長；二是煮沸時間一定要達(dá)到15min，以便各種成分能夠充分混勻溶解，并達(dá)到滅菌效果，否則也會影響待檢細(xì)菌的生長；三是加樣時要使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻，以保證細(xì)菌能分散生長，既要混合均勻，又要速度快，而且還不能出現(xiàn)氣泡。可以勻速上下顛倒試管3-4次，切忌用力搖晃。總之，只有嚴(yán)格按照要求規(guī)范操作，減少使用誤差，提高其準(zhǔn)確性，才能使細(xì)菌檢驗箱發(fā)揮其應(yīng)有的作用。在對食品微生物檢驗時要注意各個環(huán)節(jié)來確保微生物檢驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，為食品衛(wèi)生和安全提供可靠的依據(jù)。今后食品微生物檢驗技術(shù)的發(fā)展方向會是：①采用快速和大批量的檢驗方法，來提高檢驗效率；②形成標(biāo)準(zhǔn)化的實驗條件；③提高和保證檢驗的精度和靈敏度。

參考文獻(xiàn)

[1]舒柏華，孫丹陵，王勝利.肉類食品細(xì)菌污染生物發(fā)光快速分析技術(shù)研究[J].中國公共衛(wèi)生，2003，19，（4）：483-484

[2]張潔梅.食品微生物檢驗技術(shù)的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代食品科技，2005，21，（2）：221-222

[3]陳麗華，李光宇，王世琨.我國的食品質(zhì)量安全現(xiàn)狀分析[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報：社會科學(xué)版，2007，5（1）：47-49