醫(yī)用臭氧治療對HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞亞群的影響

摘要：目的：觀察醫(yī)用臭氧治療HBeAg陽性慢性乙型炎患者外周血T淋巴細胞亞群的變化，探討醫(yī)用臭氧對機體免疫功能的影響。

方法：采集165例醫(yī)用臭氧治療的HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者治療前、后及32例（對照組）健康體檢者的外周血，用流式細胞儀檢測T淋巴細胞亞群的變化。

結(jié)果：HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者與健康體檢者相比，CD4+T淋巴細胞降低（P<0.05）、CD8+淋巴細胞數(shù)目增加（P<0.05）、CD4+/CD8+比值下降，在醫(yī)用臭氧治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎12周后，患者CD4+細胞升高（P<0.05）、CD8+細胞下降（P<0.05）、CD4+/CD8+比值增加（P<0.05）。

結(jié)論：醫(yī)用臭氧能提高對HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者的CD4+，CD8+水平，增強其抗病毒應答能力。

關(guān)鍵詞：慢性乙型肝炎醫(yī)用臭氧T細胞亞群流式細胞術(shù)

【中圖分類號】R4【文獻標識碼】B【文章編號】1008-1879（2012）11-0165-02

目前國內(nèi)外對T細胞免疫在乙型肝炎患者中的報道較多[1，2]，并發(fā)現(xiàn)T淋巴細胞亞群比例的失調(diào)是導致感染慢性化的重要原因[3]，有作者采用臭氧治療45例慢性乙型肝炎（CHB）患者，發(fā)現(xiàn)有一定的療效，而無嚴重的不良事件發(fā)生[4]，為此我們應用醫(yī)用臭氧治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者165例，并觀察其療效及外周血T淋巴細胞亞群的變化，現(xiàn)報道如下。

1對象與方法

1.1病歷來源。我院及外院2010年8月—2011年10月住院及門診HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者165例，男135例，女30例，年齡18-65歲，平均年齡（31.2±10.3）歲，符合2000年（西安）全國傳染病與寄生蟲病和肝病學術(shù)會議修訂的標準[5]，所有病例HBsAg，HBeAg，HBV DNA持續(xù)陽性6個月，ALT在正常值上限的2-10倍，血清總膽紅素不超過正常上限的2倍，血清白蛋白大于32g/L，凝血酶原活動度大于60%，外周血紅細胞計數(shù)大于4.0×109/L、血小板計數(shù)大于80×109/L。1年內(nèi)未接受任何抗病毒或免疫調(diào)節(jié)劑，排除丙型肝炎，丁型肝炎、HIV等重疊感染者以及糖尿病、甲狀腺功能異常，精神神經(jīng)系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病、嚴重心腎疾病患者。另選32名我院健康體檢者作為外周血T淋巴細胞亞群檢測的對照組。

1.2治療方法。165例HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者，在常規(guī)護肝治療如靜脈滴注還原性谷胱甘肽等基礎(chǔ)上，在患者簽署知情同意書的條件下，應用醫(yī)用臭氧自血療法（MAH），抽患者外周靜脈血100亳升，流入密閉的一次性采血袋中（袋中加有枸椽酸鈉抗凝劑），用一次性注射器從臭氧發(fā)生設(shè)備（德國赫美斯臭氧發(fā)生器）抽取50亳升一定濃度臭氧和50亳升醫(yī)用純氧混合氣體，通過濾膜注入臭氧反應袋中與全血充分混合后（5分鐘），再回輸患者體內(nèi)。第一個月：臭氧濃度20-35μg/ml×100ml氣體×100ml血液。第1周：臭氧濃度20μg/ml，3次（隔日1次）。第2周：臭氧濃度25μg/ml，3次（隔日1次）。第3周：臭氧濃度30μg/ml，3次（隔日1次）。第4周臭氧濃度35μg/ml，3次（隔日1次）。第二個月：醫(yī)用臭氧濃度40μg/ml×100ml氣體×100ml血液。第三個月：醫(yī)用臭氧濃度20μg/ml×100ml氣體×100ml血液。每周3次，共3個月。

1.3檢測方法。外周血淋巴細胞亞群檢測，采用K3EOTA抗凝真空管采血5ml，在流式細胞儀（美國BecKMAN、coulTET公司，）上檢測CD4+，CD8+細胞，螢光標記單克隆抗體CD4+和CD8+購自BeckMAN、coulTER公司，操作按試劑盒說明書進行，血清生化學指標檢測采用美國ABI公司7000熒光定量PCR儀（深圳匹基生物工程公司）血清學標志檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測（上海科華公司）。

1.4統(tǒng)計學方法。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以X±S表示，兩組間差異比較采用成組設(shè)計的t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

治療前后患者肝功能及ABVDNA，HBeAg，變化情況（見表1）。

3討論

乙型肝炎病毒（HBV）是一種非細胞毒性的病毒，其所致的肝細胞損壞是由機體針對HBV特異性抗原的免疫反應的所引起[5]。機體感染HBV后外周血淋巴細胞亞群間的平衡被打破，主要表現(xiàn)為各種淋巴細肥亞群數(shù)目和功能的改變[7]。而Bocci等進行臭氧對血液中白細胞尤其是淋巴細胞的體外作用的十余年研究，終地揭開了臭氧在一定濃度窗下具有免疫激活和調(diào)節(jié)作用的面紗，臭氧作用于全血，可誘導產(chǎn)生眾多細胞因子[4]。據(jù)國內(nèi)外研究顯示，宿主的細胞免疫功能特別是HBV特異性CD+4T細胞反應和CD8+細胞反應對HBV的清除和疾病的轉(zhuǎn)歸有重要的影響[8]，另外Peraltac在肝臟缺血再灌注損傷研究中發(fā)現(xiàn)，臭氧能提高腺苷量，降低黃嘌呤水平。前者具有保護作用，后者可形成反應性自由基，對肝臟具有損傷作用[9]。

本文結(jié)果顯示采用醫(yī)用臭氧治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎12周后，患者CD+4T細胞明顯上升，CD8+T細胞明顯下降，CD+4/CD8+明顯上升，說明患者的細胞免疫功能得到一定恢復，且肝功能改善HBV DNA水平、HBeAg水平明顯下降。

總之，乙型肝炎是嚴重危害人類健康的疾病，感染乙肝病毒的轉(zhuǎn)歸與機體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)，從免疫學的觀點看，治療乙肝的關(guān)鍵是恢復慢性HBV感染者體內(nèi)有效的T細胞反應[10]。因此醫(yī)用臭氧治療慢性乙型肝炎值得臨床進一步探索。

參考文獻

[1]MAINI MK，BONI C，LEE CK，et al.The role of virus-specific CD8+ cells in liver damage and viral control during persistent hepatitis B virus infection[J].J Exp Med，2000，191：1269-1280

[2]肖光明，姚細安，連粵湘，等.乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞亞群的變化[J].實用肝臟病雜志，2005，8（1）：22-24

[3]蔣陽昆，涂燕云，許劍.T淋巴細胞亞群水平對阿德福韋酯治療慢性乙型肝炎療效的影響.實用肝臟病雜志，2010，13（4），263-264

[4]何曉峰.臭氧治療的臨床應用[M].北京：科學出版社，2009：108

[5]中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會和肝病學分會.病毒性肝炎防治方案[J].肝臟，2000，5（4）：257-263

[6]Van Hecke E，Paradijs J，Molitor C，et al.Hepatitis B virus specific cytotoxic T lymphocyte response in patients with acute and chronic hepatitis B virus infections[J].J Hepatol，1994，20（4）：514-523

[7]Maini MK，Boni C，Lee CK，et al.The role of virus specific CD8+ cells in liver damage and viral control during persistent hepatitis B virus infection[J].J Experimental Medicine，2000，191（8）：1269-1280

[8]Chisari FV，F(xiàn)erraric C.Hepatitis B virus immunopathogenesis，Annu Rev Immunol，1995，13：29-60

[9]PERAITA C， XAUS C， BARTTRONS R， et al. Effect of ozone treatment on reactive oxygen species and adenosine production during hepatic ischemia-reperfusion.J. Free Radic Res.2000；33（5）：595-605

[10]Lau GK，Use of immunomodulatory therapy（other than interferon）lor the treatment of chronic hepatitis B virus infection[J].J Gastroenterol Hepatol，2000，15 suppel；E46-52