酶試劑法快速檢測常用農藥殘留的比較研究

摘要：根據果蔬中農藥殘留檢出的實際情況，采用市場上的3個商品化農殘酶速測試劑盒對常見農藥（水胺硫磷、敵敵畏、呋喃丹、毒死蜱、三唑磷、滅多威、氯氟氰菊酯、甲氰菊酯、百菌清、腐霉利和三唑酮）進行了靈敏度試驗。結果表明，酶試劑對腐霉利、氯氟氰菊酯、甲氰菊酯、百菌清、三唑酮5種農藥無抑制反應或靈敏度較差，而對其余6種農藥的反應較為靈敏，其靈敏度依次為敵敵畏、呋喃丹、三唑磷、毒死蜱、水胺硫磷和滅多威。

關鍵詞：酶抑制法；快速檢測；農藥；靈敏度

中圖分類號：O657.32；Q556+.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2012）21-4873-03

Comparative Study on Enzyme Reagent Method for Rapid Detection of Common

Pesticide Residues

YI Tao1，ZHAO Ming-ming2，LU Lei2，DING Hua2，ZHOU You-xiang2，LI Shu-qian2

（1.Department of Food Science and Technology， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， China；2.Agricultural Quality Standards and Testing Technology Research Institute， Hubei Academy of Agricultural Sciences， Wuhan 430064， China）

Abstract： The common residue of pesticides in fruits and vegetables， including isocarbophos， dichlorvos， carbofuran， chlorpyrifos， triazophos， methomyl， cyhalothrin， fenpropathrin， chlorothalonil， procymidone and triazolone， were analyzed by the 3 commercial enzyme inhibition kits with the pesticide residue rapid analyzer. The results showed that any enzyme reagent inhibition kit was not sensitive to procymidone， cyhalothrin， fenpropathrin， chlorothalonil and triazolone， it was only sensitive to six pesticides， the sensitivity to the six pesticides in order was dichlorvos， carbofuran， triazophos， chlorpyrifos， isocarbophos and methomyl.

Key words： enzyme inhibition method； rapid detection； pesticide； sensitivity

近年來我國農產品的農藥殘留狀況得到了較好的控制。一是全國每年3～5次的農產品質量安全例行監測結果顯示逐年好轉，不僅表現在農藥殘留超標率逐年持續下降，已從10年前的超過50%下降到目前的10%以下，如稻米和水果檢測合格率高達98%以上，蔬菜和茶葉檢測合格率也達95%以上；二是農藥殘留水平明顯降低，10年前檢出超過1 mg/kg農藥殘留量的蔬菜數量較多，現已很少見。但另一方面，目前農藥殘留狀況尚不穩定，仍然存在著一些風險隱患[1]。隨著國內外殘留限量標準的提高或監測農藥種類的增加，原來不超標的農產品變成了超標[2]，特別是蔬菜檢測中由過去禁用、限用農藥殘留超標比例大變成了現在常規農藥殘留超標比例提高的情況。

農產品質量安全市場準入制度已在全國各地廣泛實施。在農產品批發市場、超市和農貿市場對進入市場的農產品（主要是蔬菜、水果）用農藥殘留快速測定技術進行監測，對不合格的農產品進行現場銷毀，防止超標蔬菜、水果流入市民餐桌。本研究針對農產品中蔬菜、水果中農藥殘留情況以及常規農藥殘留速測技術，比較了3種農殘速測試劑對常見農藥的檢測靈敏度[3]，以供相關市場準入監管部門和檢測人員參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

水胺硫磷、敵敵畏等11種農藥標準品購于農業部環境科研監測所，市購3種商品化酶抑制法農殘快檢試劑盒（分別命名為LJ、LZ和TT），其中LJ試劑盒中的酶試劑為乙酰膽堿酯酶，LZ和TT試劑盒的酶試劑為丁酰膽堿酯酶，8通道農殘速測儀（HW-PR1008，海維（武漢）生物電子有限公司生產）。

1.2 方法

1.2.1 儀器穩定性試驗 稱取22.6 mg重鉻酸鉀，加入50 μL硫酸，用去離子水定容至100 mL，農殘速測儀各通道每間隔20 min同時測定重鉻酸鉀標準溶液在410 nm處的吸光度，計算其平均值及RSD值。

1.2.2 特異性試驗 方法參照GB/T 5009.199-2003《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的快速檢測》[4]和NY/T 448-2001《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘毒快速檢測方法》[5]，其中丁酰膽堿酯酶試劑盒操作如下：向離心管中加入試劑盒自帶緩沖液3 mL，然后加入500 μL顯色劑，37 ℃水浴30 min，再加入500 μL底物，混勻后立即放入速測儀中測定3 min內的吸光度變化值ΔA0，標定酶試劑活力，稀釋得到酶工作液。配制不同濃度的各種農藥標準品，分別加入到含有3 mL緩沖液500 μL顯色劑的反應體系中，37 ℃恒溫水浴30 min，加入500 μL底物，混勻后立即放入速測儀中，3 min后測定各種農藥不同濃度吸光度的變化值ΔAt，計算抑制率。

抑制率=[（ΔA0-ΔAt）/ΔA0]×100%

式中，ΔA0為空白對照液反應3 min吸光度的變化值；ΔAt為樣品溶液反應3 min吸光度的變化值。

乙酰膽堿酯酶試劑盒操作如下：取一包緩沖鹽加10 mL水溶解，向離心管中加入酶試劑自帶的緩沖液2.5 mL，然后加入100 μL顯色劑，37 ℃水浴15 min，加入100 μL底物，混勻后立即放入速測儀中，3 min后測定其吸光度的變化值ΔA0，標定酶試劑活力。配制不同濃度的各種農藥標準品，分別加入到含有3 mL緩沖液100 μL顯色劑的反應體系中，37 ℃水浴15 min，加入100 μL底物，混勻后立即放入速測儀中，3 min后測定各種農藥不同濃度吸光度的變化值ΔAt，同上法計算抑制率。

以農藥標準品濃度的對數值為橫坐標，抑制率為縱坐標，繪制農藥對酶試劑的抑制曲線。

2 結果與分析

2.1 速測儀的穩定性分析

HW-PR1008型農殘速測儀的穩定性試驗結果見表1。由表1可知，HW-PR1008型農殘速測儀總的RSD≤2.0%，說明該儀器的穩定性、重復性等均符合要求，可以用于農藥殘留的快速檢測。

2.2 酶試劑盒的農藥抑制率試驗結果

TT酶試劑盒的酶試劑為丁酰膽堿酯酶，檢測時抑制率≥70%，即可判定為檢出農藥殘留。從圖1可以看出，TT的酶試劑對6種農藥靈敏度依次為敵敵畏、呋喃丹、三唑磷、毒死蜱、水胺硫磷和滅多威。6種農藥的檢出限如表2所示。

LZ酶試劑盒的酶試劑也屬丁酰膽堿酯酶。從圖2可以看出，LZ酶試劑對6種農藥靈敏度依次為敵敵畏、呋喃丹、三唑磷、滅多威、水胺硫磷和毒死蜱。6種農藥的檢出限如表3所示。

LJ酶試劑盒的酶試劑屬乙酰膽堿酯酶。從圖3可以看出，LJ酶試劑對6種農藥靈敏度依次為敵敵畏、三唑磷、呋喃丹、毒死蜱、滅多威和水胺硫磷。6種農藥的檢出限如表4所示。

3 小結與討論

綜上所述，3種酶抑制農殘試劑盒對腐霉利、氯氟氰菊酯、甲氰菊酯、百菌清和三唑酮等5種農藥無效，均不產生抑制。酶試劑無法檢出蔬菜、水果中殺菌劑農藥殘留如腐霉利、百菌清和三唑酮等，同樣也無法檢出菊酯類農藥殘留如甲氰菊酯、氯氟氰菊酯等；對有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的敏感性和檢出限依據不同的酶試劑而有所差別，需引起市場準入檢測工作中相關人員的注意。

參考文獻：

[1] 溫雅君，高景紅，李 玲，等. 批發市場蔬菜農藥殘留調查及風險評估[J].安徽農業科學，2011，39（33）：20543-20545.

[2] 中華人民共和國農業部. 農業部發布農產品中的農藥殘留及安全問題回答[EB/OL].http：//www.gov.cn/gzdt/2012-05/17/content_2140014.htm.

[3] 王 林，王 晶，張 瑩，等.蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的快速檢測方法研究[J].中國食品衛生雜志，2003，15（1）：39-40.

[4] 王麗紅.淺析GB/T5009.199-2003農殘速測酶抑制率法[J].口腔用品護理工業，2012（1）：14-16.

[5] 李書謙，路 磊，陳福生，等.果蔬中有機磷類農藥殘留快速檢測技術研究[J].湖北農業科學，2004（4）：58-60.

收稿日期：2012-08-07

基金項目：國家農業科技成果轉化資金項目（2011GB2D10002）；湖北省農業科技創新中心資助項目（2011-620-000-001）

作者簡介：易 濤（1987-），男，湖北鄂州人，在讀碩士研究生，研究方向為食品安全分析，（電話）027-87282927（電子信箱）372887110@qq.com；

通訊作者，李書謙，高級農藝師，從事食品檢驗研究工作，（電話）027-87389267（電子信箱）lishuqian11@126.com。