HPLC法測定贛南烏藥根、莖、葉中烏藥醚內酯的含量

摘要：利用反相高效液相色譜法測定贛南烏藥（Lindera aggregate）根、莖、葉中烏藥醚內酯的含量，建立了贛南烏藥的質量標準。以乙腈-水（45∶55，V/V）為流動相，檢測波長為235 nm。結果表明，烏藥醚內酯在0.08～2.00 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程為y=20.851x+9.421， R2=0.999 6。贛南烏藥根中烏藥醚內酯含量為0.529%，莖、葉中未檢出烏藥醚內酯。贛南烏藥根中烏藥醚內酯含量遠高于市售商品烏藥，該方法可用于贛南烏藥的質量控制，方法簡便、準確、可靠。

關鍵詞：贛南烏藥（Lindera aggregate）；烏藥醚內酯；反相高效液相；含量測定

中圖分類號：O657.7+2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2012）21-4870-03

Determination of Linderane in Roots，Stems and Leaves of Lindera aggregate from the Region of Gannan by HPLC

LIU Bing-jing1，2，ZHANG Jian1，2，CHENG Qi-lai1，2，WEN Hui-ling1，2，LI Chao1， JIANG Zhi-wei1

（1.College of Pharmacy， Gannan Medical University， Ganzhou 341000， Jiangxi， China；

2.Jiangxi Provincial Key Lab of Cerebrovascular Pharmacology， Ganzhou 341000， Jiangxi， China）

Abstracts： Determination of linderane in roots， stems and leaves of Lindera aggregata from the region of Gannan to provide scientific basis for quality control of Lindera aggregata from the region of Gannan. HPLC analytical method was established using a acetonitrile-water（45∶55，V/V） as the mobile phase at 235 nm. The linear range of linderane was between 0.08～2.00 μg， the regression equation was y=20.851x+9.421（R2=0.999 6）. Content of linderane in the root of collected sample was 0.529%， but it was not detected in the stem and leave of collected sample. The linderane content of Lindera aggregata from the region of Gannan in root was higher than the commercial products. The HPLC was suitable for the determination of linderane form Lindera aggregata. This method was convenient，stable，and reliable.

Key words： Lindera aggregate； linderane； HPLC； content determination

江西贛南山區具有特殊的地質構造、海拔和氣候條件，主產濕地植物，并且孕育出藥理活性極好的中草藥，“贛南草藥”的良好藥用價值已得到證實，逐漸成為新的品牌，其中贛南產烏藥已應用于臨床并取得良好的效果。

烏藥（Lindera aggregate（Sims）Kosterm）系樟科（Lauraceae）山胡椒屬（Lindera）植物，為傳統的理氣止痛藥[1]。最早載于唐代陳藏器《本草拾遺》。具有溫中散寒、理氣止痛的功效。現代藥理學研究表明烏藥具有廣泛的藥理活性[2，3]。烏藥根主要由異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜成分組成[4]，莖中主要含有單寧類成分[5]，葉中主要含有黃酮類成分[6]。其中呋喃倍半萜及其內酯類成分是烏藥的特征成分，具有較強的專屬性，也具有一定的活性，為了確保烏藥的質量標準評價有具體的量化指標，根據烏藥中所含成分的特點，本研究對烏藥根、莖、葉中呋喃倍半萜類成分烏藥醚內酯（Lindrane）進行了測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 高效液相色譜儀（Agilentl 1100），紫外分光光度計（北京普析）。

1.1.2 試劑與藥材 甲醇、乙醇均為分析純，乙腈為色譜純，水為超純水，烏藥醚內酯（自制，經HPLC檢測純度達98%以上）。

烏藥采自于贛州信豐縣金盆山，由贛南醫學院藥學院彭金年副教授鑒定為Lindera aggregate （Sims） Kosterm，標本現保存在江西省腦血管藥理重點實驗室。取上述樣品于60 ℃烘干、粉碎、過40目篩備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 色譜條件 Lichrospher色譜柱（25 cm×0.4 cm，5 μm，Merck公司）。流動相乙腈-水（45∶55，V/V），流速1.0 mL/min，檢測波長235 nm，進樣量20 μL。

1.2.2 供試品溶液的制備 稱取0.5 g烏藥樣品粗粉置于索氏提取器中，加100 mL乙醇提取6 h，揮干提取液，殘渣用乙醇分次溶解，轉移至100 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，過濾取濾液。

1.2.3 對照品溶液的制備 稱取烏藥醚內酯對照品4.0 mg置10 mL量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度400 mg/L儲備液，分別量取0.1、 0.5、1.0、1.5、2.5 mL上述儲備液置于10 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別配制成濃度為4、20、40、60、100 mg/L的對照品溶液。

2 結果與分析

2.1 標準曲線制備

準確吸取烏藥醚內酯濃度為4、20、40、60、100 mg/L對照品溶液各20 μL。按“1.2.1”色譜條件下進行測定。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標得到標準曲線，回歸方程為y=20.851x+9.421， R2=0.999 6，烏藥醚內酯在0.08～2.00 μg與峰面積呈良好的線性關系。

2.2 試驗的精密度

吸取對照品溶液20 μL，重復進樣5次，測定烏藥醚內酯的吸收峰面積，測定結果的RSD為0.5%，表明精密度良好。

2.3 穩定性試驗結果

吸取同一供試品溶液20 μL，間隔12 h進行測定，以烏藥醚內酯的吸收峰面積進行考察，進樣5次，測得RSD為0.61%，表明樣品至少在60 h內穩定。

2.4 加樣回收試驗結果

稱取已知烏藥醚內酯含量的烏藥樣品粉末0.5 g，各3份，每份加入一定量的烏藥醚內酯對照品，測定3次的平均回收率為100.11%，RSD為1.25%，結果見表1。

2.5 樣品測定結果

收集贛南烏藥根、莖、葉樣品各3份，分別制成供試品溶液，過0.5 μm的微孔濾膜。吸取烏藥醚內酯對照品溶液和供試品溶液各20 μL，在“1.2.1”色譜條件下進行，用外標法定量，并計算各樣品中烏藥醚內酯的含量，結果表明，烏藥根3批樣品中烏藥醚內酯的含量為0.529%，RSD為1.276%（n=3），烏藥莖和葉中未檢驗出烏藥醚內酯的含量（表2）。烏藥醚內酯和烏藥樣品高效液相色譜圖見圖1～圖4。

3 小結與討論

本研究改進了烏藥中烏藥醚內酯含量的測定方法，采用高效液相色譜法，以乙腈-水（45∶55，V/V）為流動相，與許多文獻中乙腈-水（56∶44，V/V）為流動相報道不一致[4]，可使烏藥呋喃倍半萜組分中烏藥醚內酯與其他成分獲得基線分離，其中烏藥醚內酯的分離度很好，該方法具有快速、準確、重現性好等特點，為贛南烏藥質量標準化提供了依據。

首次測定了烏藥根、莖、葉中烏藥醚內酯的含量。烏藥塊狀根中主要含有倍半萜，生物堿等成分[4]，烏藥莖中主要是單寧類成分[5]，葉中主要是黃酮類成分[6]，因此只在烏藥根中檢測出烏藥醚內酯，在莖、葉未能檢測出，與文獻報道一致。

贛南烏藥根中烏藥醚內酯含量很高，以這類成分作為指標來評價贛南烏藥的質量標準是較為適宜的。從樣品分析結果來看，贛南烏藥樣品中烏藥醚內酯的含量總趨勢要遠高于市售樣品[7]，這可能與贛南地區的特殊地理環境、加工方法以及樣品的貯藏時間有關，有待于進一步的研究與探討。

參考文獻：

[1] 肖培根.新編中藥志[M].北京：化學工業出版社，2002.230.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：化學工業出版社，2005.53.

[3] 中國醫學科學院藥物研究所.中藥志（第二冊）[M].北京：人民衛生出版社，1981.926.

[4] 程顯隆，肖新月，張南平，等.RP-HPLC法測定烏藥中烏藥醚內酯和烏藥內酯的含量[J].藥物分析雜志，2003，23（3）：225-227.

[5] 張朝鳳，貴 新，孫啟時，等.烏藥莖中鞣質類成分研究[J].中國天然藥物，2003，1（4）：203-206.

[6] 張朝鳳，孫啟時，趙燕燕，等.烏藥葉中黃酮類成分研究[J].中國藥物化學雜志，2010，43（5）：274-276.

[7] 蔡立紅，癦桂新，王崢濤，等.高效液相色譜法測定烏藥中烏藥醚內酯的含量[J].中國中藥雜志，2004，29（7）：657-659.

收稿日期：2012-06-01

基金項目：江西省教育廳科技重點項目（GJJ10698）；江西省教育廳科技項目（GJJ11565）；江西省衛生廳中醫藥科研計劃課題（2011A153）

作者簡介：劉冰晶（1985-），男，云南昆明人，助教，碩士，從事天然產物化學研究工作，（電話）18720899759（電子信箱）974141690@qq.com；

通訊作者，張 劍，男，教授，主要從事藥用植物化學研究工作，（電話）0797-8169775（電子信箱）zhangjiangnmc031@163.com。